跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
。2010年7月20日；107(29):12889-94.
doi:10.1073/pnas.1005938107。 Epub 2010年6月29日。

人ESCRT-III和VPS4蛋白是中心体和纺锤体维持所必需的

盛田英治 1, 勒雷米·A·科尔夫, 玛丽·安妮·卡伦, 弗吉尼亚·桑德林, 克里斯托弗·K·罗德什, 韦斯利·桑奎斯特
附属公司

人ESCRT-III和VPS4蛋白是中心体和纺锤体维持所必需的

盛田英治等。 美国国家科学院程序。 。

摘要

ESCRT途径有助于介导哺乳动物和古生菌胞质分裂的最后脱落步骤。在哺乳动物中，ESCRT途径的两个早期作用蛋白ALIX和TSG101通过与磷酸蛋白CEP55的直接相互作用被招募到中体。CEP55在细胞周期的大部分时间都位于中心体，但在胞质分裂开始时迁移到中心体。这表明ESCRT途径也可能与中心体相连。在这里，我们系统地分析了在有丝分裂和细胞分裂的不同阶段对晚期作用哺乳动物ESCRT-III和VPS4蛋白的需求。我们发现，VPS4A、VPS4B或11种不同的人类ESCRT-III（CHMP）蛋白中的任何一种的缺失都能抑制脱落。值得注意的是，单个ESCRT-III和VPS4蛋白的缺失也会改变中心体和纺锤体的极数，产生多极纺锤体（大多数ESCRT-III/VPS4蛋白质）或单极纺锤体（CHMP2A或CHMP5），并导致染色体分离和核形态缺陷。VPS4蛋白在有丝分裂期间集中在纺锤极，在胞质分裂期间集中于中体，这意味着这些蛋白直接在这两个位点发挥作用。我们的结论是，ESCRT-III/VPS4蛋白在中心体起作用，以帮助调节其维持或增殖，然后在脱落过程中在中体发挥作用，从而帮助确保细胞分裂不同阶段的有序进行。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

数字

图1。
图1。
缺乏ESCRT-III和VPS4蛋白的细胞DNA含量异常。(A类)流式细胞术分析显示用对照siRNA或siRNA处理的HeLa细胞的DNA含量，以耗尽ALIX（对照）、CEP55（对照），CHMP2A、CHMP3或VPS4B。标记2C、4C和8C DNA峰，并提供细胞百分比。(B类)具有4C（红色）和8C（橙色）DNA的siRNA处理的细胞的定量百分比(n个=2±范围，虚线表示具有4C和8C DNA的对照细胞的平均总百分比）。
图2。
图2。
缺乏ESCRT-III和VPS4蛋白的细胞有丝分裂和胞质分裂缺陷。(A类)来自HeLa细胞的共焦荧光切片，缺失了指定的蛋白质。荧光染色显示微管（红色，抗α-管蛋白）和细胞核（绿色，SYTOX绿色）。多核细胞（1）、可见中体（2）和碎片细胞核（3）用箭头突出显示。(B类)多核细胞百分比（红色）或可见中体细胞百分比（蓝色）(A类)由指定蛋白质耗竭后的脱落缺陷引起(n个=3±SD）。(C类)细胞核碎片细胞百分比（红色）(A类)或未对齐的染色体（蓝色）（图3A类)在指定蛋白质耗尽后(n个=3±SD）。
图3。
图3。
缺乏ESCRT-III和VPS4蛋白的细胞中心体缺陷。(A类)用对照CHMP2A或VPS4B siRNA处理后，HeLa细胞DNA（SYTOX绿色）和中心体（红色，抗Pericentrin）染色的共焦荧光图像。细胞在间期显示(左侧)和有丝分裂(赖特，微管呈白色，抗α-管蛋白）。箭头高亮显示可见中心体的子集(图S2和第3章). (B类)siRNA处理后中心体数目异常的细胞百分比，n个=3±SD）。(C类)在去除指定蛋白的固定HeLa细胞的3D重建中测量的中心体体积，对Pericentrin进行染色，并将其放入指定的体积范围。图中给出了三个不同实验的颜色键和总细胞数。(D类和E类)用对照或VPS4B siRNA处理后具有三个或三个以上中心体的HeLa细胞的百分比。每6小时采集单个样本，并用抗Pericentrin和γ-Tubulin抗体染色。只计算用两种抗体染色的中心体(n个=3±SD）。有丝分裂的(D类)和相间(E类)来自相同样本的细胞分别计数。
图4。
图4。
缺乏VPS4B或CHMP2A的活细胞有丝分裂和胞质分裂缺陷的时间序列分析。(A类)用对照siRNA处理或耗尽指定蛋白质的HeLa细胞分裂的时间图像。稳定转导的HeLa细胞表达荧光染色质（H2B-mCherry，每个面板的第一列）和微管（YFP-α-微管蛋白，第二列）。第三列中提供了相位对比图像，并给出了经过的时间(左侧). 数字编码的事件键：（1）阻止脱落，（2）中体溶解和合并，（3）多纺锤体/中心体，（4）染色体排列失败，（5）染色体不对称分离为三个新生细胞，（6）多个小核的形成，（7）单极纺锤体/单中心体或簇，（8）“C”-形成染色体簇，（9）出现子细胞，（10）染色体分离到子细胞失败。中提供了这些单个单元格和单元格字段的注释电影电影S1,S2系列,第3章,S4系列,第5章,S6系列,第7部分、和第8节. (B类)缺少指定蛋白质的细胞中有丝分裂和胞质分裂不同阶段的示意图。一、 界面；M、 中期；C、 胞质分裂；A、 脱落。特定缺陷的数字编码如下A类. (C类–E类)有丝分裂持续时间(C类)和有丝分裂细胞的百分比(D类)和脱落(E类)缺乏指定蛋白质的细胞缺陷(SI材料和方法)。
图5。
图5。
中期和胞质分裂期间内源性VPS4A的定位。显示用对照siRNA处理的细胞在有丝分裂（第1行）或胞质分裂（第2行）期间内源性VPS4A（绿色，抗VPS4A，第1列和第3列）和微管（白色，抗α-管蛋白，第2列和第三列）定位的代表性图像。相位对比图见第4列。请注意，VPS4A在中期（第1行）集中在纺锤体极，在胞质分裂期间集中在中体（第2行）。第3行和第4行的图像显示VPS4A耗尽的细胞，显示抗体染色的特异性，并显示多极纺锤体，这是耗尽依赖性表型的特征（第3行）。中心体和中心体用箭头突出显示并放大插图对应于黄色箭头突出显示的区域。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

参考文献

    1. Raiborg C，Stenmark H。泛素化膜蛋白的内体分选中的ESCRT机制。自然。2009;458:445–452.-公共医学
    1. Bieniasz PD。HIV-1病毒粒子发生的细胞生物学。细胞宿主微生物。2009;5:550–558.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Carlton JG、Martin-Serro J.《胞质分裂和逆转录病毒芽变之间的平行关系：ESCRT机制的作用》。科学。2007年；316:1908–1912.-公共医学
    1. Morita E等。人类ESCRT和ALIX蛋白与中体蛋白相互作用，在胞质分裂中发挥作用。EMBO J.2007；26:4215–4227.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. 赫尔利·JH。ESCRT复合物与多泡体的生物发生。当前操作细胞生物学。2008;20:4–11.-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型