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.1991年7月5日;266(19):12257-65.

一个新的功能性人醛脱氢酶基因的克隆与鉴定

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  • PMID: 2061311
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一个新的功能性人醛脱氢酶基因的克隆与鉴定

L C Hsu先生等。 生物化学杂志. .
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摘要

我们从cosmid pWE-15中的人类基因组文库中克隆了一个新的功能性ALDH基因(ALDHx),方法是使用与ALDH1和ALDH2基因的保守区域部分匹配的29-核苷酸探针进行筛选。新的ALDHx基因在517个氨基酸残基的编码序列中不包含内含子。新ALDHx基因和ALDH2基因的推导氨基酸序列之间的相似程度为72.5%(517个氨基酸残基的比对),而ALDHx和ALDH1基因之间的相似程度为64.6%(500个氨基酸残基的比对)。存在于ALDH1和ALDH2同工酶中的氨基酸残基(Cys-162、Cys-302、Glu-268、Glu-487、Gly-223、Gly-225、Gly-299、Gly-245和Gly-250)也保留在新ALDHx基因的推导序列中,这些氨基酸残基与功能和结构重要性有关。用ALDHx探针进行的Northern杂交显示,在人类肝脏和睾丸组织中存在一条独特的mRNA带(3.0千碱基)。使用新的ALDHx探针,我们在lambda gt11载体中从人类睾丸cDNA文库中克隆了该基因的cDNA。cDNA的核苷酸序列在三个核苷酸位置上与基因组序列不同,导致2个推导氨基酸残基的交换。这些位置具有多态性,通过对目标区域的PCR扩增以及对八个无关个体基因组DNA的核苷酸序列分析进一步证明了这一点。基因组和cDNA序列的比对表明,尽管ALDHx基因在其编码序列中似乎没有内含子,但发现一个2.6千碱基的内含子中断了5’-未翻译(5’-UT)序列。初步延伸和S1定位分析表明至少存在两个5'-UT外显子。通过对一组啮齿动物-人类杂交细胞系的DNA样本进行Southern blot杂交,将新的ALDHx基因归属于第9染色体。

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