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.2010年5月20日；2（3）：296-308。

VX680/MK-0457是一种有效且选择性的极光激酶抑制剂，可靶向透明细胞肾癌中的肿瘤细胞和内皮细胞

阎丽 1, 张忠发, 陈金东, 黄丹（Dan Huang）, 闫丁, 闵行滩, 超南倩, 詹姆斯·H·雷索, Hyung Kim先生, Bin Tean Teh公司
附属机构

VX680/MK-0457是一种有效且选择性的极光激酶抑制剂，可靶向透明细胞肾癌中的肿瘤细胞和内皮细胞

阎丽等。 美国J Transl Res. .

摘要

极光激酶是细胞有丝分裂的关键调节因子，与肿瘤发生过程有关。近年来，极光激酶作为肿瘤治疗的潜在靶点引起了人们的广泛关注。在这里我们报道了Aurora A和Aurora B激酶在透明细胞肾细胞癌（ccRCC）中的作用。通过对174例ccRCC患者样本的全基因组表达阵列分析，我们发现与正常肾脏样本相比，ccRCC中Aurora A和B的表达水平显著升高。Aurora A和Aurora B的高表达水平与肿瘤晚期和患者生存率低显著相关。药物VX680（也称为MK-0457）对Aurora激酶活性的抑制抑制了体外ccRCC细胞的生长，导致ccRCC细胞在G2/M期积聚和凋亡。VX680治疗也抑制了ccRCC异种移植物肿瘤的生长，并伴有肿瘤微血管密度的降低。对内皮细胞系的分析表明，VX680抑制内皮细胞生长，其作用与ccRCC细胞相似。我们的研究结果表明，VX680通过靶向ccRCC肿瘤细胞和肿瘤相关内皮细胞的增殖来抑制ccRCC肿瘤的生长。极光激酶及其下游细胞周期蛋白在ccRCC中具有重要作用，可能是该疾病的有效预后标记物和治疗靶点。

关键词：极光；极光激酶；MK-0457；VX680；肾细胞癌。

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数字

图1
图1
极光激酶在人ccRCC中的表达及VX680的生长抑制。A、 左面板，按T分期和恶性程度分类的原发性ccRCC中Aurora A和Aurora B mRNA表达水平。C1，预后良好；C2，预后不良。右侧面板的生存分析表明极光A和极光B的高表达与患者生存率低之间存在关联。使用每个基因的mRNA表达水平的平均值作为截止值，将患者分为高表达组和低表达组。误差条显示标准偏差*P<0.05，**P<0.02，***P<0.01。B、 VX680对人ccRCC细胞活力的影响。将细胞与不同浓度的VX680孵育96 h，并通过MTT分析对其活力进行量化。测定了每个细胞系的增殖抑制IC50值，并对其进行了描述。误差线表示标准偏差。C、 生长抑制曲线。将A498和Caki-1细胞与VX680在指定浓度下孵育96 h，并通过MTT分析量化生存能力。D、 VX680抑制A498和Caki-1细胞中的极光激酶信号。用诺卡唑处理细胞16小时以诱导有丝分裂阻滞（同步化）。将同步化A498和Caki-1细胞从诺卡唑块中释放出来，并用指示浓度的VX680处理6小时。“Con”指未经处理的对照样品。单独的样品也用二甲基亚砜进行处理，以进行车辆控制。取同步化HeLa细胞作为阳性对照。用针对所示蛋白的抗体对全细胞裂解产物进行免疫印迹；肌动蛋白的Western blotting用于显示样品的等负荷。
图2
图2
极光激酶在人肾细胞癌细胞系中的表达。Western blotting分析人肾细胞癌细胞系中极光A和B、磷酸化极光A以及磷酸化组蛋白H3的表达。
图3
图3
延长VX680处理对A498和Caki-1细胞系中极光激酶和细胞周期相关蛋白表达的影响。A、 异步细胞的72小时VX680处理。异步A498或Caki-1细胞与增加的VX680浓度孵育72小时。“Con”指未经处理的对照样品。单独的样品也用二甲基亚砜进行处理，以进行车辆控制。取同步化HeLa细胞作为阳性对照。用针对所示蛋白的抗体对全细胞裂解产物进行免疫印迹；肌动蛋白印迹用于显示样品的等负荷。B、 72小时VX680处理诺卡唑堵塞的ccRCC细胞。用诺卡唑处理A498和Caki-1细胞16小时以诱导有丝分裂阻滞。然后将细胞从有丝分裂阻滞中释放出来，然后添加DMSO或指示浓度的VX680 72小时。“Con”是指未经处理的对照样品；取同步化HeLa细胞进行Western blot阳性对照。还运行异步细胞的样品裂解液进行比较。
图4
图4
VX680诱导ccRCC细胞在G2/M期停滞和凋亡。A、 B.VX680诱导细胞周期阻滞在G2/M和多倍体。细胞与VX680孵育72 h，用碘化丙啶（PI）染色，并用流式细胞仪进行分析。误差线表示标准偏差*P（P）< 0.05, **P（P）< 0.01, ***P（P）< 0.001. C、 VX680处理诱导ccRCC细胞凋亡。细胞与VX680孵育72 h，用Annexin V-FITC染色，并用流式细胞仪进行分析。误差线表示标准偏差*P（P）< 0.05, **P（P）< 0.01.
图5
图5
VX680治疗抑制ccRCC肿瘤生长并抑制Aurora激酶信号体内A、 将1000万个Caki-1细胞皮下注射到每只小鼠的右侧，以引发异位肿瘤。肿瘤细胞接种后第3天开始腹腔注射50%PEG300或VX680（80 mg/kg），每天持续至第21天。最终平均肿瘤体积（mm三)测量。通过腹腔注射80 mg/kg VX680或50%PEG300绘制Caki-1异种颗粒的肿瘤生长曲线(n个=每组9-10只小鼠）。误差线表示标准偏差***P<0.001。B、 从每组中随机选择三或四个肿瘤的一部分进行匀浆以制备裂解物，并通过Western blotting分析蛋白质表达。C、 VX680或50%PEG300治疗后Caki-1异种移植瘤中p-Aurora A、p-组蛋白H3、PCNA和CD34的免疫组织化学染色。D、 定量Caki-1异种移植瘤活缘的增殖指数（PCNA）、p-Aurora a染色和p-组蛋白H3染色，以及定量VX680或50%PEG300治疗的Caki-1移植瘤的MVD。误差线表示标准偏差***P（P）< 0.001.
图6
图6
VX680对携带Caki-1异种移植物的裸鼠体重的影响。将80 mg/kg VX680或相当体积的50%PEG300腹腔注射给异种移植小鼠(n个=每组9-10只小鼠）。VX680治疗后对体重无影响。误差线表示标准偏差。
图7
图7
Aurora激酶在内皮细胞中的表达以及VX680对HUAEC细胞增殖和细胞周期阻滞的影响。A、 内皮细胞Aurora激酶表达的Western blotting。B、 生长抑制曲线。内皮细胞与VX680在所示浓度下孵育96小时，并通过MTT分析量化生存能力。C、 HUAEC细胞用0.06或0.3µmol/L的VX680处理，Caki-1细胞用0.3µml/L的VX68处理72h。全细胞裂解物进行Western blotting检测Aurora激酶活性和细胞周期蛋白；肌动蛋白被用作负荷控制。D、 VX680诱导G2/M细胞周期阻滞，HUAEC细胞暴露于VX68072 h，然后用PI染色；流式细胞仪检测细胞周期阻滞。误差条表示标准偏差*P<0.05，**P<0.01。
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