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.2010年4月23日；285(17):12604-11.
doi:10.1074/jbc。109.094524美元。 Epub 2010年2月25日。

涉及法尼类X受体和小异二聚体伴侣的通路通过microRNA-34a抑制正向调节肝脏sirtuin 1水平

Jiyoung Lee（李继英） 1, 阿姆鲁塔·帕迪, 阿比拉莎·夏尔马, 宋桂生, 吉苗, 尹元墨, 李旺, 琼索克·金·坎佩尔
附属公司

涉及法尼类X受体和小异二聚体伴侣的通路通过microRNA-34a抑制正向调节肝脏sirtuin 1水平

Jiyoung Lee（李继英）等。 生物化学杂志. .

摘要

Sirtuin 1（SIRT1）是一种NAD依赖性脱乙酰酶，与多种细胞过程密切相关，包括代谢疾病、癌症和可能的衰老。尽管对SIRT1的功能进行了广泛的研究，但SIRT1水平是如何调节的仍然相对未知。在这里，我们报道了核胆汁酸受体法尼类X受体（FXR）抑制肝脏中的microRNA-34a（miR-34a），从而导致SIRT1水平的正调控。合成激动剂GW4064激活FXR可降低正常小鼠的肝脏miR-34a水平，FXR-null小鼠的肝脏micr-34a水平持续升高。FXR诱导小异二聚体伴侣（SHP）的表达，SHP是一种孤儿核受体和转录共抑制因子，进而通过抑制启动子处的p53占用，抑制miR-34a基因的关键激活物p53的表达。MiR-34a通过结合SIRT1 mRNA的3'非翻译区降低SIRT1水平，腺病毒介导的MiR-34a过度表达显著降低小鼠肝脏中SIRT1蛋白水平。值得注意的是，在饮食诱导的肥胖小鼠中，miR-34a水平升高，SIRT1蛋白水平降低，这些小鼠中的FXR激活逆转了miR-34b和SIRT1水平，这表明FXR活化、miR-34a降低以及随后SIRT1升高之间存在有趣的联系。我们的研究表明，FXR/SHP通路在通过抑制miR-34a控制SIRT1水平方面发挥了意想不到的作用，肥胖小鼠miR-34a水平的升高有助于SIRT1水平的降低。操纵这种调节网络可能有助于治疗代谢性疾病和癌症等老龄化疾病。

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数字

图1。
图1。
FXR下调miR-34a。 一个用qRT-PCR测量野生型（+/+）和FXR-null小鼠（−/-）的肝脏miR-34a和对照miR-720水平，并绘制每个小鼠的值。酒吧表示三只或四只动物的平均值。B类，正常小鼠用GW4064或车辆治疗(车辆)持续1h，收集肝脏进行qRT-PCR，绘制每只小鼠的值。酒吧表示五到七只动物的平均值。C类，HepG2细胞用50μ米鹅去氧胆酸(CDCA公司)隔夜收集用于qRT-PCR。误差线、S.D。D类和E类，正常小鼠经尾静脉注射腺病毒载体，5天后用qRT-PCR检测肝脏miR-34a水平，Western blot检测SHP蛋白水平(工作分解结构)分析。使用Student’st吨测试*，第页< 0.05; **,第页< 0.01; ***,第页< 0.001; NS，统计学上不显著，S.E(n个= 5).
图2。
图2。
SHP通过抑制p53与启动子的结合来抑制miR-34a基因的表达。 一个和B类使用小鼠Hepa1c1c7细胞进行CoIP分析(一个)和小鼠肝脏(B类)提取以检测内源性p53和SHP之间的相互作用。C类,35S-SHP或35合成S-FXR，并通过GST下拉试验测定其与GST或GST-p53的结合。D–F型如图所示，HepG2细胞与表达质粒、miR34a启动子（−1402至+578）-luc或突变报告子共转染，然后感染Ad-siSHP。两天后，收集细胞进行qRT-PCR(D类)和报告人分析(E类和F类).误差线、S.D。G公司和H（H），鼠标(G公司)或HepG2细胞(H（H）)用100n处理米GW4064持续1小时，采集样本进行ChIP分析。测量了谱带强度，并在顶部每个的乐队。我用GW4064处理感染的HepG2细胞，并收集用于ChIP分析。
图3。
图3。
SIRT1是肝细胞miR-34a的靶点。 一个显示了SIRT1转录物3′-UTR中的miR-34a序列和miR-34a-结合位点。B类，用所示质粒转染HepG2细胞，然后感染Ad-miR-34a或对照Ad-empty，并收集用于报告分析。C类，用报告质粒转染COS-1细胞，如所示，同时转染抗miR-34a或对照干扰RNA(反scrm)然后收集用于报告人分析。D类用Ad-miR-34a或对照Ad-empty感染HepG2细胞，检测SIRT1和对照微管蛋白水平。E类给正常小鼠尾静脉注射Ad-miR-34a或对照Ad-empty，5天后测定肝脏SIRT1和对照肌动蛋白和微管蛋白水平。在下部面板属于D类和E类，测量了谱带强度，并绘制了与微管蛋白相关的强度。统计显著性由学生的t吨测试（S.E。，n个= 3). **,第页< 0.01; ***,第页< 0.001.
图4。
图4。
饮食诱导肥胖小鼠miR-34a升高，SIRT1降低。 一个和B类Western blot分析检测野生型或FXR阴性小鼠肝脏SIRT1蛋白水平(一个)和qRT-PCR(B类).一个,右侧面板绘制了与微管蛋白相关的谱带强度。统计显著性由学生的t吨测试（S.E。，n个＝4）.*，第页< 0.05; NS，统计学上不显著。C–J型,C类，实验大纲。喂食正常食物（−）或高脂肪西式饮食的小鼠的肝脏(西部数据)收集20周进行油红o染色(D类)，qRT-PCR(E类,F类,G公司、和J型)、ChIP分析(H（H）)和Western blot分析(我).我绘制了与微管蛋白相关的谱带强度。统计显著性由学生的t吨测试（S.E。，n个= 5). *,第页<0.05。
图5。
图5。
在饮食诱导的肥胖小鼠中，FXR的激活降低了miR-34a水平，增加了SIRT1蛋白水平。 一个，给出了实验大纲。B类和C类，喂食WD chow的小鼠每天服用GW4064，持续5天，肝脏miR-34a水平(B类)和SIRT1蛋白水平(C类)进行了测量。D类给喂WD周的小鼠注射Ad-FLAG-FXR，1周后喂0.5%胆酸-胆碱6 h；测定肝脏SIRT1蛋白水平。E类，显示了FXR/SHP/miR-34a调控网络控制肝脏SIRT1水平的拟议模型。在该模型中，miR-34a通过部分碱基配对与SIRT1转录物的3′-UTR结合来抑制肝脏SIRT1的翻译。在正常小鼠中，FXR的激活诱导SHP的表达，SHP通过抑制p53与miR-34a启动子的结合来抑制miR-34b基因的转录。相反，在饮食诱导的肥胖小鼠中，FXR/SHP通路有缺陷，导致miR-34a水平升高，随后肝脏中SIRT1蛋白水平降低。
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