跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

网站是安全的。
这个https：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2010年3月19日；285(12):9273-81.
doi:10.1074/jbc。M109.075218。 Epub 2010年1月13日。

通过胶原受体强制诱导的肌成纤维细胞分化依赖于哺乳动物的透明度（mDia）

马修·W·C·陈 1, 法扎·乔达里, 李威信, 约翰·科普兰, 克里斯托弗·麦卡洛克
附属机构

通过胶原受体强制诱导的肌成纤维细胞分化依赖于哺乳动物的透明度（mDia）

马修·W·C·陈等。 生物化学杂志. .

摘要

纤维化的发展促进了肌成纤维细胞（原纤维细胞）的分化，从而导致组织功能障碍。肌成纤维细胞的分化依赖于肌动蛋白的组装，肌动蛋白组装是对力的反应，由多种肌动蛋白结合蛋白介导，包括哺乳动物的双足类相关蚁（mDia）。我们研究了mDia在机械感应通路中的作用，机械感应通路导致α-平滑肌肌动蛋白（SMA）的力诱导表达，SMA是肌成纤维细胞分化的标志物和关键决定因素。在用siRNA处理以敲低mDia，然后使用附着于β1整合素的胶原包被的磁铁矿珠进行张力处理的细胞中，肌动蛋白在珠接触位点的组装被抑制。通过mDia敲除，SMA转录共激活物MRTF-A的强制诱导核移位减少了50%。siRNA敲除mDia后，SMA转录共激活物（血清反应因子）的表达减少50%，或在转染催化活性mDia的细胞中减少100%。通过敲低mDia的siRNA来阻止SMA启动子的强制激活和SMA表达。在测定肌纤维母细胞介导的收缩的锚定胶原蛋白凝胶分析中，mDia的敲除使收缩减少50%。我们得出结论，mDia在力诱导的SMA转录激活和肌成纤维细胞分化的发展中起着重要作用。

PubMed免责声明

数字

图1。
图1。
力诱导肌动蛋白组装依赖于mDia。 A类施力后60分钟内胶原蛋白包衣珠相关蛋白的免疫印迹分析。计算每个样品中分离的珠子数量，并用于估计蛋白质负载的等效性。BSA涂层珠用作非特异性粘附控制。Aβ1整合素阻断抗体4B4和ROCK抑制剂Y-27632被用作阴性对照。B类siRNA敲低mDia的细胞与胶原蛋白包被的磁珠孵育并施加力。珠相关蛋白的免疫印迹显示β-肌动蛋白募集。β1-整合素免疫印迹用作负荷对照。左侧面板显示了siRNA敲除mDia的功效。β-肌动蛋白与β1-整合素的比值是通过免疫印迹的密度测定计算出来的（平均值±S.E。，右侧面板).C类共聚焦图像显示，转染组分活性成分的细胞中的罗丹明-球蛋白呈放射丝染色(加利福尼亚州)-或显性阴性(DN（公称直径）)-m直径。
图2。
图2。
强制诱导的MRTF-A核易位依赖于mDia。 A类免疫荧光图像显示了用无关或mDia siRNA处理的细胞中MRTF-A的核移位状态，用胶原蛋白包被的磁珠培养，然后施加或不施加力。这个白色箭头显示细胞核中存在MRTF-A。用DAPI染色细胞以显示细胞核(蓝色)和MRTF-A免疫染色(绿色)和mDia(红色).B类力作用60min后进行免疫荧光图像定量。数据是显示MRTF-A核易位的细胞百分比的平均值±S.E。在每个实验组中，对25个细胞进行定量。
图3。
图3。
力诱导SRF激活需要mDia。 A类，在NIH 3T3细胞中测量了标准化为β-半乳糖苷酶的力诱导的SRF萤光素酶启动子活性。在一段时间内（1至4小时）用力刺激细胞。与基本启动子活性相比，启动子活性表现为折叠变化。B类在转染mDia siRNA、DN-mDia、CA-mDia或载体对照的细胞中施加力2小时后，测量SRF启动子活性。
图4。
图4。
力诱导的SMA激活依赖于mDia。 A类，在NIH 3T3细胞中施加4 h力后，测量归一化为β-半乳糖苷酶的力诱导SMA-淀粉酶启动子活性。用mDia siRNA、DN mDia或CA mDia处理细胞。B类，共聚焦细胞图像(F类)或不带(法国试验标准)施力4小时后，在单个胶原蛋白包被珠周围显示mDia与FITC-结合抗体和SMA与TRITC-结合抗体的染色。相同细胞的DIC图像显示珠子的位置。注意，用mDia的siRNA处理的细胞没有检测到mDia。
图5。
图5。
gelsolin、ROCK和mDia通路在SMA表达中的相对贡献。 A类用siRNA预处理NIH 3T3细胞以击倒gelsolin、ROCK或mDia。施加力4小时后，测量归一化为β-半乳糖苷酶的力诱导SMA-淀粉酶启动子活性。免疫印迹显示以GAPDH作为负荷控制物敲除gelsolin、ROCK和mDia的效果。B类，测量细胞中MRTF-A的核移位。在细胞中施加或不施加siRNA击倒gelsolin、ROCK和mDia的力60分钟后，对免疫荧光图像进行量化。对细胞进行MRTF-A染色(绿色)并用DAPI识别细胞核的位置(蓝色). 数据是每个实验组25个细胞中MRTF-A核移位细胞的平均±S.E.百分比。
图6。
图6。
强迫诱导的肌成纤维细胞分化依赖于mDia。 A类、NIH3T3细胞与胶原蛋白包裹的磁珠孵育的荧光图像，以及(F类)或不带(法国试验标准)暴露在陶瓷永磁体施加的张力下。对细胞进行SMA免疫染色(绿色)和ED-A纤连蛋白(红色). 细胞核用DAPI染色(蓝色). SMA和ED-A纤维连接蛋白的存在表明肌纤维母细胞表型。中间面板用mDia siRNA处理后显示力载细胞。B类，免疫印迹显示在相同条件下进行的实验中SMA和ED-A纤维连接蛋白的蛋白表达A类.GAPDH显示为加载控件。
图7。
图7。
成纤维细胞的凝胶收缩需要MRTF-A和mDia。 A类用DN-MRTF-A或mDia或载体对照siRNA处理的细胞中的应力释放胶原蛋白凝胶收缩。数据为凝胶从培养皿中释放后凝胶直径随时间变化的平均值+S.E。B类从胶原凝胶分离的细胞裂解物中提取的GAPDH免疫印迹表明，在每个胶原凝胶样品中分析的细胞数量相等。
图8。
图8。
提出的机械传递模型。对胶原蛋白珠施加张力会触发局部粘附蛋白的募集和激活。反过来，焦点粘附蛋白通过激活凝胶蛋白和ROCK促进肌动蛋白的组装，从而阻止肌动蛋白丝的分解。mDia使肌动蛋白倒钩末端成核，从而使肌动素丝生长和伸长。肌动蛋白组装过程中，MRTF-A从肌动蛋白单体中分离出来，启动MRTF-A-的核移位。在细胞核中，MRFT-A作为转录共激活物诱导SMA。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Tomasek J.J.、Gabbiani G.、Hinz B.、Chaponnier C.、Brown R.A.（2002）《分子细胞生物学自然评论》。3, 349–363-公共医学
    1. Leslie K.O.、Taatjes D.J.、Schwarz J.、vonTurkovich M.、Low R.B.（1991）《美国病理学杂志》。139, 207–216-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Sun Y.，Weber K.T.（1996）《心血管》。第31、518–525号决议-公共医学
    1. Webber J.、Meran S.、Steadman R.、Phillips A.（2009）J.Biol。化学。284, 9083–9092-项目管理咨询公司-公共医学
    1. MacKenna D.A.、Dolfi F.、Vuori K.、Ruoslahti E.（1998）《临床杂志》。投资。101, 301–310-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型