Harvesting, identification and barrier function of human lung microvascular endothelial cells

doi:10.1016/j.vph.2009.12.009

.2010年5月-6月；52(5-6):175-81.

doi:10.1016/j.vph.2009.12.009。 Epub 2010年1月11日。

人肺微血管内皮细胞的采集、鉴定及屏障功能

约翰·D·卡特拉瓦斯¹, 康妮·斯奈德, 克里斯蒂安娜·迪米特罗普洛, 阿尔伯特·S·Y·张, 鲁道夫·卢卡斯, 亚历山大·德维林, 斯蒂芬·M·布莱克

附属公司

PMID： 20060932
预防性维修识别码：项目经理4374552
内政部： 10.1016/j.vph.2009.12.009

人肺微血管内皮细胞的采集、鉴定及其屏障功能

约翰·D·卡特拉瓦斯等。血管药理学. 2010年5月-6月.

.2010年5月至6月；52(5-6):175-81.

doi:10.1016/j.vph.2009.12.009。 Epub 2010年1月11日。

作者

约翰·D·卡特拉瓦斯¹, 康妮·斯奈德, 克里斯蒂安娜·迪米特罗普洛, 阿尔伯特·S·Y·张, 鲁道夫·卢卡斯, 亚历山大·德维林, 斯蒂芬·M·布莱克

附属

¹乔治亚医学院，美国佐治亚州奥古斯塔30912-2300。jcatrava@mcg.edu

PMID： 20060932
预防性维修识别码：项目经理4374552
内政部： 10.1016/j.vph.2009.12.009

摘要

内皮屏障功能障碍是急性肺损伤（ALI）和急性呼吸窘迫综合征（ARDS）发病机制的重要因素。尽管明确需要以预防和修复内皮屏障功能障碍为目标的方法，但我们对肺微血管内皮通透性的分子调控的理解仍不完整。培养的肺微血管内皮细胞是研究屏障功能的一个很有吸引力的范例。在这里，我们描述了一种采集、鉴定和培养人肺微血管内皮细胞（HLMVEC）的方法。由此获得的HLMVEC以单层形式生长，表现出接触抑制，具有典型的鹅卵石外观。它们表达内皮蛋白，如血管性血友病因子和内皮型一氧化氮合酶，并摄取乙酰化的低密度脂蛋白。此外，HLMVEC对革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌产物、凝血酶、血管内皮生长因子和微管破坏剂的屏障破坏作用具有可预测的反应和优越的敏感性。这些HLMVEC为研究导致ALI和ARDS的机制提供了一种室内衍生的替代商用人类细胞。

PubMed免责声明

数字

图1
*左上面板*：HLMVEC的相衬显微照片（第3段）；其他三个面板显示了所有内皮细胞的既定特征，即乙酰化LDL的摄取（Ac-LDL：右上面板）、血管性血友病因子的表达（vWF；下l；eft面板）和内皮（或3型）一氧化氮合酶的表达（eNOS；右下面板）。请参见*材料和方法*了解详细信息。

图2
LPS引起的HLMVEC内皮电阻（TER）的时间和浓度依赖性降低。8个阵列接种了HLMVEC（10万）；48小时后，观察到融合单层表现出~900MΩ的电阻。在箭头所示的时间添加LPS或载体（15µl），并在接下来的18小时内以20秒的间隔连续记录TER值。所示数据为四个重复的平均值±SEM。*：车辆组P<0.05。

图3
革兰氏阳性菌产物溶菌酶（LLO；A）和溶血素（PLY；B）引起的HLMVEC跨内皮细胞阻力（TER）的时间和浓度依赖性降低。8个阵列接种了HLMVEC（10万）；48小时后，观察到汇合单层表现出约900MΩ的电阻。在箭头所示的时间添加LPS或载体（15µl），并在接下来的18小时（A）或150分钟（B）内以20秒的间隔连续记录TER值。所示数据为四个重复的平均值±SEM。*：相应车辆组P<0.05。

图4
凝血酶引起HLMVEC跨内皮电阻（TER）的时间和浓度依赖性降低；48小时后，观察到汇合单层表现出约900MΩ的电阻。在箭头所示的时间添加凝血酶或溶媒（15µl），并在接下来的160分钟内以20秒的间隔连续记录TER值。所示数据代表了三个具有可比结果的独立实验。

图5
血管内皮生长因子（VEGF）对HLMVEC跨内皮阻力（TER）的时间和浓度依赖性降低。8个阵列接种了HLMVEC（10万）；48小时后，观察到汇合单层表现出约900MΩ的电阻。在箭头所示的时间添加VEGF或载体（15µl），并在接下来的11小时内以20秒的间隔连续记录TER值。所示数据为四个重复的平均值±SEM。*：车辆组P<0.05。

图6
微管解聚剂诺可达唑引起的HLMVEC跨内皮阻力（TER）的时间和浓度依赖性降低。8个阵列接种了HLMVEC（10万）；48小时后，观察到汇合单层表现出约900MΩ的电阻。在箭头指示的时间添加诺可唑或载体（15µl），并在接下来的30分钟内以20秒的间隔连续记录TER值。所示数据代表了三个具有可比结果的独立实验。

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[1] Abraham E、Anzueto A、Gutierrez G、Tessler S、San Pedro G、Wunderink R、Dal Nogare A、Nasraway S、Berman S、Cooney R、Levy H、Baughman R、Rumbak M、Light RB、Poole L、Allred R、Constant J、Pennington J、Porter S.人类肿瘤坏死因子单克隆抗体治疗感染性休克的双盲随机对照试验。NORASEPT II研究小组。柳叶刀。1998;351:929–933。-公共医学

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