跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

政府意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2010年1月；120(1):303-14.
doi:10.1172/JCI40364。 Epub 2009年12月28日。

血管平滑肌细胞中Stat3依赖性急性Rantes的产生调节小鼠动脉损伤后的炎症

杰森·科瓦西奇 1, 罗希特·古普塔, 安吉拉·C·李, 马明超, 方芳, 克莱尔·托尔伯特, Avram D Walts公司, Leilani E Beltran公司, Hong San公司, 陈贵宾, 辛西娅·圣希莱尔, 曼弗雷德·博姆
附属公司

小鼠血管平滑肌细胞中Stat3依赖性急性Rantes生成调节动脉损伤后的炎症反应

杰森·科瓦西奇等人。 临床研究杂志. 2010年1月.

摘要

炎症是动脉损伤的关键组成部分，VSMC增殖和新生内膜形成是这一过程的最终结果。然而，动脉损伤后立即发生的急性事件为这一炎症程序制定了蓝图，这在很大程度上尚不清楚。因此，我们在小鼠中研究了这些事件，发现动脉损伤后，内侧血管平滑肌细胞以急性方式上调Rantes，依赖于Stat3和NF-kappaB（p65亚单位）。这导致了早期T细胞和巨噬细胞的募集，也在细胞周期素依赖性激酶抑制剂p21Cip1的调节下进行。Rantes生产是VSMC独有的，由Tnf-alpha发起，但不是由Il-6/gp130发起。Rantes的产生依赖于p65/Stat3复合物与Rantes启动子内NF-kappaB-结合位点的结合，Stat3或p65的shRNA敲除显著减弱Rantes产生。在体内，发现内侧VSMC中存在急性NF-kappaB和Stat3激活，与对照组相比，Tnfa-/-小鼠损伤后的急性Rantes生成显著减少。最后，我们生成了SMC特异性条件性Stat3缺乏小鼠，并证实了VSMC产生急性Rantes的Stat3依赖性。总之，这些观察统一了血管损伤后的炎症事件，表明血管平滑肌细胞通过急性Rantes生成和随后的炎性细胞募集来协调动脉炎症反应程序。

PubMed免责声明

数字

图1
图1。CD3（CD3）+动脉丝损伤后T细胞浸润。
(A类)相对CD3+WT和第21页–/–老鼠。数据显示为平均值±SEM(B类)显示CD3的股动脉切片的典型对应共焦显微图像+未受损血管中的T细胞（绿色）以及动脉导线损伤后6小时和1天的T细胞，虚线方框表示1天图像右上角显示的放大倍数较高的区域。嵌入方块宽度：70μm。细胞核（蓝色）用DAPI染色。由于自体荧光，动脉弹性层可见绿色。比例尺：100μm。
图2
图2。动脉损伤后，Rantes的产生急剧上调，并由内侧VSMC局部产生。
(A类)Local Rantes（左面板），第21页Cip1号机组（中间面板），和状态3qRT-PCR检测动脉损伤后（右侧）mRNA表达。所示比较为WT与第21页–/–Rantes和状态3，使用第21页Cip1号机组仅在WT小鼠中评估表达*P（P）<0.05**P（P）< 0.01; ***P（P）< 0.0001. 此外，从基线检查（未受伤）到受伤后6小时，WT小鼠的局部血管Rantes mRNA表达增加了21倍(n个=5两组；P（P）< 0.05);第21页Cip1号机组mRNA表达增加58倍(n个基线=10，n个=6小时时为7；P（P）< 0.005); 和状态3mRNA表达增加3.5倍(n个=基线时为7，n个=6小时时为12；P（P）< 0.001). (B类)在基线（未受伤）和受伤后6小时，WT小鼠股动脉切片的Rantes免疫荧光染色的典型共焦显微镜图像。Rantes显示为红色，细胞核显示为蓝色（DAPI）。由于自体荧光，动脉弹性层可见绿色。比例尺：100μm。(C类)在动脉损伤6小时后，使用BM移植小鼠定位Rantes的产生。通过方差分析（总体P（P）=0.0045），兰特–/–用WT-BM重组小鼠（WT至Rantes–/–;n个=4）与用WT（WT到WT，n个= 6; *P（P）<0.05与WT到Rantes–/–)或Rantes–/–BM（兰特–/–至WT，n个=5*P（P）<0.05与WT到Rantes–/–). 数据显示为平均值+SEM。
图3
图3。局部血管Rantes生成调节早期CD3+T细胞和CD115+动脉损伤后巨噬细胞浸润和晚期新生内膜形成。
(A类)WT到WT和WT到Rantes–/–小鼠行动脉损伤，于第1天检测细胞浸润情况。相对CD3+从WT到Rantes，T细胞浸润减少–/–小鼠与野生型小鼠相比(n个=6（WT到WT），n个=9（WT至Rantes）–/–****P（P）< 0.0005). (B类)WT至Rantes动脉损伤后1天，相对CD115+巨噬细胞浸润减少–/–小鼠与WT到WT小鼠的比较(n个=7（WT到WT），n个=9（WT至Rantes）–/–; ****P（P）< 0.0005). (C类)根据内膜/中层比率评估，动脉损伤后3周，从WT到Rantes的股血管新生内膜形成减少–/–与WT到WT小鼠相比(n个=9（WT到WT），n个=8（WT至Rantes）–/–; **P（P）< 0.001). 数据显示为平均值+SEM(天)动脉钢丝损伤后3周，从WT到WT和WT到Rantes小鼠股动脉的代表性横截面（H&E染色）。箭头表示内部弹性层。比例尺：100μm。
图4
图4。内侧VSMC动脉损伤后，Stat3和p65被急性激活。
WT小鼠在基线（未受伤）和急性损伤后p65（受伤后6小时）、Stat3（受伤后5小时）和p-Stat3（Tyr705）（受伤后3小时）的免疫荧光染色股动脉切片的代表性共焦图像。p65、Stat3和p-Stat3以红色显示，细胞核以蓝色显示（DAPI）。由于自体荧光，动脉弹性层可见绿色。比例尺：20μm。
图5
图5。Stat3和p65协同并调节VSMC中Rantes的表达。
(A类)用含有天然Rantes启动子（Co）或突变质粒（M1或M2）的报告质粒转染VSMC，旨在消除假定的NF-κB结合位点活性。指出了推测NF-κB结合位点和突变的位置和序列。比较是Co第21页–/–相对于Co WT，或M1或M2相对于Co的WT和第21页–/–.pGL2表示转染了不含启动子的pGL2质粒的WT VSMC。n个=所有组为3**P（P）< 0.005, ***P（P）< 0.001, ****P（P）< 0.0001. (B类)shRNA p65Kd输入第21页VSMCs降低了第65页（左侧面板，n个=3两组**P（P）<0.01）和Rantes（右侧面板，n个=4两组*P（P）<0.05）(C类)Tnf-α治疗4小时增加WT-Co VSMC中Rantes mRNA的表达(n个=6（对于非模拟），n个=7（受刺激时）；P（P）<0.0005），而p65Kd和Stat3Kd VSMCs表现出Tnf-α诱导的Rantes mRNA表达减弱，而Tnfα处理的Co VSMCs（p65Kd:n个= 3, *P（P）< 0.05; 统计3Kd：n个= 4, **P（P）< 0.005). 数据显示为平均值+SEM(天)WT Co和Stat3Kd VSMC中的IP和WB（输入蛋白质水平如图所示）。IP与anti-Stat3结合，然后WB与anti-p65结合（左上），IP与anti p65结合，再WB与anti-Stat3联合（左下）。IP带有抗p65，然后WB带有抗p21Cip1号机组（右上）显示p65与p21的协同作用Cip1号机组在Stat3Kd VSMC中几乎被废除。
图6
图6。相互依赖的Stat3和p65与Rantes启动子的NF-κB结合位点1结合。
(A类)使用抗Stat3抗体显示Stat3与Rantes启动子NF-κB结合位点1号结合的WT Co VSMC的ChIP，在蛋白-DNA交联前1、2、4或8小时，无（Co）或Tnf-α刺激（Co对2小时，Co对4小时**P（P）< 0.01; Co与8小时***P（P）< 0.005;n个=所有组为3）。(B类)使用抗p65抗体显示p65在Tnf-α刺激后与Rantes启动子的NF-κB结合位点1结合的WT-Co-VSMC的ChIP（Co对1小时**P（P）< 0.01; Co与2小时****P（P）< 0.001; Co与4小时***P（P）< 0.005; Co与8小时*P（P）< 0.05;n个=所有组为3）。(C类)WT-Stat3Kd VSMC的ChIP与IP使用抗p65抗体，显示p65在Tnf-α刺激后与Rantes启动子的NF-κB结合位点1结合(n个=所有组为3）。数据显示为平均值+SEM。
图7
图7。Tnf-α，而不是Il-6/gp130，刺激VSMC中的Rantes转录。
(A类)未经（Co）或经Tnf-α刺激1、2、4或8小时（Co对1小时**P（P）< 0.01; Co与2小时***P（P）< 0.005; Co与4小时*P（P）< 0.05; Co与8小时***P（P）< 0.005;n个=所有组为3）。(B类)无（Co）或Il-6刺激1、2、4或8小时的WT VSMC中Rantes mRNA表达的qRT-PCR(n个=所有组为3）。(C类)WT VSMC中p-Stat3的WBs与未经（Co）或经Tnf-α或Il-6刺激1、2、4或8小时的3T3细胞相比。显示了Stat3和β-肌动蛋白的水平，并且各组之间的水平相似。(天)在指定浓度下用Tnf-α-R1阻断抗体预处理的WT VSMC中p-Stat3的WB，然后用Tnfα刺激。共线：WB在接受Tnf-α刺激但不接受Tnfα-R1阻断抗体的VSMC上使用IgG。显示了Stat3和β-肌动蛋白的水平，并且各组之间的水平相似。(E类)WT-Co和gp130Kd VSMC，不含（Co）或经Il-6或Tnf-α处理1、2、4或8小时。在不同细胞类型之间未观察到Rantes mRNA表达的差异(n个=所有组为3）。数据显示为平均值+SEM。
图8
图8。血管Rantes的表达依赖于体内的Tnf-α和Stat3。
(A类)损伤后6小时，股动脉中Rantes mRNA的表达从Tnfa公司–/–与WT小鼠相比(n个=WT为5，n个=8（适用于）Tnfa公司–/–; *P（P）< 0.05). (B类)损伤后6小时，股动脉中Rantes mRNA的表达从状态3飞行/飞行;第22页α-Cre公司与WT小鼠相比(n个=WT为5，n个=6用于状态3飞行/飞行;SM22型α-Cre公司; *P（P）< 0.05). 数据显示为平均值+SEM。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

中的注释

  • 动脉损伤的急性反应加剧。
    马里兰州乌拉·T。 Hla T等人。 临床投资杂志。2010年1月；120(1):90-2. doi:10.1172/JCI41738。Epub 2009年12月28日。 临床投资杂志。2010 PMID：20038805 免费PMC文章。

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Boehm M等人。骨髓源性免疫细胞通过p27Kip1依赖机制调节血管疾病。临床投资杂志。2004;114(3):419–426.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Olive M等，p21通过基质细胞衍生因子-1/CXCR4轴调节小鼠动脉创伤修复。临床投资杂志。2008;118(6):2050–2061.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Chen MS等。裸金属支架再狭窄不是一种良性的临床实体。《美国心脏杂志》2006；151(6):1260–1264.-公共医学
    1. Taubman MB等。JE mRNA在主动脉损伤和血小板衍生生长因子刺激的血管平滑肌细胞中迅速积累。1992年Circ Res；70（2）：314–325。-公共医学
    1. Schwarz JB等。CXC趋化因子受体3在动脉损伤炎症反应中的新作用：mTORC1的参与。2009年Circ Res；104(2):189–200.-公共医学

出版物类型

MeSH术语