Kupffer cell and interleukin-12-dependent loss of natural killer T cells in hepatosteatosis

doi:10.1002/hep.23292

.2010年1月；51(1):130-41.

doi:10.1002/hep.23292。

肝脂肪变性中Kupffer细胞和白细胞介素-12依赖性自然杀伤T细胞的丢失

克里默¹, 伊曼纽尔·托马斯, 理查德·米尔顿, 阿什利·W·佩里, 尼科·范·罗伊扬, 迈克尔·D·惠勒, 史蒂文·扎克斯, 迈克尔·弗里德, 理查德·A·里皮, 伊恩·海因斯

附属公司

PMID： 20034047
预防性维修识别码： PMC3761962
内政部： 2002年10月10日/2009年9月23日

肝脂肪变性中Kupffer细胞和白细胞介素-12依赖性自然杀伤T细胞的丢失

克里默等。肝病学. 2010年1月.

.2010年1月；51(1):130-41.

doi:10.1002/hep.23292。

作者

克里默¹, 伊曼纽尔·托马斯, 理查德·米尔顿, 阿什利·W·佩里, 尼科·范·罗伊扬, 迈克尔·D·惠勒, 史蒂文·扎克斯, 迈克尔·弗里德, 理查德·瑞普, 伊恩·海因斯

附属

¹美国北卡罗来纳大学教堂山分校酒精研究中心，NC 27599。

PMID： 20034047
预防性维修识别码： PMC3761962
内政部： 2002年10月10日/2009年9月23日

摘要

肝脂肪变性与肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素（IL）-12、主要T辅助因子（Th）1细胞因子的表达增加以及肝脏自然杀伤细胞（NKT）数量减少有关。脂质积累、细胞因子表达和肝脏NKT细胞之间的关系尚不清楚。本研究旨在评估IL-12在肝脂肪变性发展中的作用及其对肝脏NKT细胞的潜在影响。雄性C57Bl/6野生型（WT）和IL-12缺乏型（IL-12（-/-））小鼠喂食胆碱缺乏饮食（CDD）0、10或20周。CDD导致WT小鼠显著的肝脂肪变性，减少肝脏而非脾脏NKT细胞数量和功能，增加T（h）1型细胞因子IL-12、干扰素γ（IFN-γ）和TNF-α的肝脏表达。IL-12的缺乏导致了类似的CDD诱导的肝脂肪变性，但保留了肝NKT细胞，并显著降低了肝IFN-γ和TNF-α的表达。用脂多糖治疗CDD喂养的小鼠导致肝脏IL-12表达显著增加，枯否细胞（KC）耗竭降低了CDD诱导的脂肪肝中肝脏IL-12的表达并恢复了NKT细胞。有趣的是，与对照组喂食小鼠的经类似处理的KC相比，喂食CDD的小鼠的KC在体外激活时未能产生更多的IL-12，这表明体内的次要因素促进了IL-12的产生。最后，患有严重脂肪变性的人类肝脏显示NKT细胞显著减少。

结论：肝脂肪变性以KC和IL-12依赖的方式减少肝脏NKT细胞的数量。我们的结果表明，KC衍生IL-12在脂肪肝免疫反应改变中具有关键和多功能作用，这一过程可能在人类非酒精性脂肪肝中活跃。

PubMed免责声明

数字

**图1。脂肪肝内肝NKT细胞数量和功能减少**
A.通过流式细胞术分析喂食胆碱充足饮食（CSD）或胆碱缺乏饮食（CDD）10周的小鼠肝单个核细胞的T细胞受体β（TCRβ）和NK1.1表达或TCRβ与载PBS57的CD1d四聚体的结合。给出了典型的点图。B.静脉注射α-半乳糖神经酰胺（αGal，200ng/g）后3小时，通过ELISA测定10周喂养CSD或CDD的小鼠肝脏IL4蛋白的表达。每组n=6-9只小鼠*与CSD喂食载体治疗小鼠相比，p<0.05，⁺与CSD喂养的αGal处理小鼠相比，p<0.05。

**图2。长期喂食CDD后IL12生成增加不会影响肝脂肪变性的进展**
A.给C57BL/6小鼠喂食CDD 0、10或20周。全肝组织实时定量PCR检测肝IL-12的表达，ELISA检测血清IL-12。数值为平均值±SEM，。在C57BL/6（Wt）和IL-12中CDD 0周、10周和20周后，进行B&E染色的肝脏组织学检查^−/−老鼠。代表性的显微照片以100倍放大率显示，并插入400倍（每张图像的右下角）。C.在CDD喂养0、10或20周后，测量血清丙氨酸氨基转移酶、肝脏重量与体重之比（LW/BW）和肝脏甘油三酯。Wt和IL-12之间无显著差异^−/−这些参数中的任何一个。数值为平均值±SEM，*p<0.05，每组n=4-8只动物。

**图3。IL-12促进T_小时脂肪肝中1种细胞因子的表达**
T型肝炎_小时1（TNFα和IFNγ）和T_小时通过实时PCR检测wt和IL12中2（IL-4或IL-10）细胞因子基因的表达^−/−小鼠喂食CDD 0、10或20周。数值为平均值±SEM，*p<0.05；n=每组4-8只动物。

**图4。IL-12参与脂肪变性相关的肝NKT细胞耗竭**
C57BL/6（Wt）和白细胞介素（IL）-12^−/−给小鼠喂食CDD 0、10或20周，并用流式细胞仪分析肝单个核细胞总数。用抗小鼠T细胞受体β（TCR）和自然杀伤（NK）1.1抗体对肝单个核细胞（A）或脾细胞（C）进行染色。方框中列出了T细胞、NKT细胞和NK细胞。数值代表所分析的肝单个核细胞总数的百分比。B和D。肝（B）或脾（D）NKT细胞的定量，表示为肝CD3总量的百分比⁺表达NK1.1。图是3-6个不同实验的代表。每组3-6只动物的结果具有代表性。

**图5。Kupffer细胞在脂肪肝内被激活**
A.喂食CDD 0、10或20周的野生型小鼠的肝脏切片用F4/80染色。展示了具有代表性的400张显微照片。B.每400x场F4/80阳性细胞的定量。分析了每只小鼠每节的十个字段。C.使用实时PCR检测肝脏CD14基因表达。D.注射LPS 6小时后肝脏IL12基因表达。E.注射脂多糖（LPS，2.5mg/kg）6小时后wt或IL12的血清天冬氨酸转氨酶水平^−/−小鼠连续20周喂食胆碱充足饮食（CSD）或CDD饮食。F.在用生理盐水或LPS（10μg/ml）治疗3小时后，从喂食胆碱充足饮食或胆碱缺乏饮食10周的wt小鼠中分离出的肝巨噬细胞（Mφ）中IL12的表达。显示了两个独立实验的代表性数据。数值为平均值±SEM，*p与相应对照组相比<0.05，⁺与LPS处理的胆碱充足饮食喂养的小鼠相比，p<0.05；n=每组4-8只动物。

**图6。氯膦酸盐耗尽枯否细胞并改善T细胞升高_小时脂肪肝组织中1种相关细胞因子的表达**
A.巨噬细胞耗竭研究的给药方案。CDD 10周后建立肝脂肪变性的小鼠每4-5天注射一次氯膦酸钠，持续3周；CDD 20周后的小鼠在连续喂食CDD的同时，每隔4-5天接受一次氯磷酸钠，持续5周。B.肝脏切片用来自给药载体或氯膦酸盐的wt小鼠的F4/80抗体染色，如A.所述。呈现400倍放大的典型显微照片。C.肝脏T_小时1和T_小时2细胞因子表达，如通过实时PCR在载体或氯膦酸盐处理的动物中评估的。数值为平均值±SEM，*p<0.05。n=每组4-6只动物。

**图7。Kupffer细胞参与脂肪变性诱导的肝NKT细胞耗竭**
通过流式细胞术评估在指定时间段内喂食胆碱缺乏饮食的溶媒或氯膦酸盐处理野生型小鼠的淋巴细胞亚群，分离出肝单核细胞。结果代表了4-6个不同的实验，p<0.01。

**图8。肝脂肪变性与人类NKT和NK细胞数量减少有关**
按照方法所述，人类肝脏活检被分为三组。对载玻片进行CD3和CD57染色，CD57是人类NK细胞的标记物。CD3阳性细胞呈蓝色，NK阳性细胞呈红色。双阳性细胞称为NKT细胞。A.呈现染色组织的代表性显微照片，NKT细胞用箭头指示。B.从至少10张400倍的组织图片中计算NKT细胞的定量。每组n=3-5的代表性结果。数值为平均值±SEM。

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中的注释

进行性非酒精性脂肪性肝病中自然杀伤T细胞积聚的支持证据？
Syn WK，Oo YH。 Syn WK等人。肝病学。2010年1月；51(1):345-6; 作者回复346。doi:10.1002/hep.23404。肝病学。2010. PMID：20034038 没有可用的摘要。
肝脂肪变性与免疫系统细胞之间的联系。
Alisi A、Panera N、Nobili V。 Alisi A等人。肝病学。2010年4月；51(4):1472; 作者回复1472-3。doi:10.1002/hep.23563。肝病学。2010. PMID：20373379 没有可用的摘要。

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