跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航

流感病毒复制所需的人类宿主因子

雷娜特·科尼格等。 自然. .

摘要

流感病毒A是一种RNA病毒，它编码多达11种蛋白质，这种小编码能力要求病毒在其生命周期的许多方面使用宿主细胞机制。对这些宿主细胞需求的了解不仅告诉我们病毒利用的分子途径，而且还提供了抗病毒药物开发的进一步目标。在这里，我们使用基于全基因组RNA干扰筛选的综合系统方法来确定295个早期流感病毒复制所需的细胞辅因子。在这一组中，参与激酶调节信号、泛素化和磷酸酶活性的因子含量最高，181个因子聚集成一个高度显著的宿主-猪相互作用网络。此外，295个因子中的219个被证实是野生型流感病毒高效生长所必需的，对基因子集的进一步分析显示，病毒进入所需的23个因子，包括空泡ATP酶（vATP酶）和COPI蛋白家族成员、成纤维细胞生长因子受体（FGFR）蛋白和糖原合成酶激酶3（GSK3）-β。此外，有10种蛋白质被证实参与了流感病毒复制的进入后步骤。这些包括核导入成分、蛋白酶和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶（CaM激酶）IIbeta（CAMK2B）。值得注意的是，猪源H1N1流感病毒的生长也依赖于已确定的宿主因子，我们发现包括vATPase和CAMK2B在内的几种因子的小分子抑制剂可对抗流感病毒复制。

PubMed免责声明

数字

图1
图1。流感病毒宿主细胞因子的全基因组RNAi筛选
(一)重组WSN-Ren病毒的示意图，显示HA片段被修饰以表达雷尼利亚荧光素酶，但保持HA包装序列。(b)将阵列全基因组RNAi文库（针对19000多个人类基因的100000个siRNAs）转染到A549细胞中。随后用WSN-Ren感染细胞，并通过在指定时间测量荧光素酶活性来监测病毒复制。(c（c）)流感病毒的高显著性（p<0.001，基于排列测试）宿主-血栓素相互作用图，包含181个确认的流感病毒宿主细胞因子（绿色圆圈）、10个流感病毒编码蛋白或复合物（红色圆圈）和另外184个细胞蛋白（橙色圆圈）之间的4266个相互作用。(d日)流感病毒、艾滋病毒、丙型肝炎病毒、登革热病毒和西尼罗河病毒使用的人类相互作用组预测复合物（基于此处报告的结果和之前的筛查结果-，-12，28）。红色的强度表示病毒在复合体内所需蛋白质的富集（基于超几何p值）的重要性。
图2
图2。流感病毒进入宿主因素的鉴定
（a）说明从全基因组初级分析到病毒生命周期中进入和进入后步骤所涉及因素的识别的筛选进展。显示了在每个阶段（括号中）确认的基因数量和测试的基因数量。(b)基因缺失（2个siRNAs/基因）对使用WSN、VSV或MMLV包膜假型荧光素酶编码HIV颗粒感染的相对影响（右侧面板）。RNAi对野生型WSN病毒复制和病毒NP和M1基因转录的影响也显示出来（左图）。每个测定中的抑制作用显示为蓝色（高抑制作用）到黄色（低抑制作用）的连续性。(c（c）)内胚层外壳蛋白复合物（COPI）被确定为17个生化模块（MCODE簇）之一，可能对流感病毒的进入很重要（图例见图1c；另见图S5）。(d日)携带β-内酰胺酶（Bla-M1）融合蛋白的流感病毒VLP感染siRNA-转染的A549细胞。显示了含有可检测细胞质β-内酰胺酶活性的细胞百分比。(e（电子）)将耗尽ARCN1并感染野生型WSN病毒的细胞固定，并在指定的时间进行NP（绿色）和细胞核（蓝色）染色，并用共焦显微镜进行分析。感染后90分钟的放大图像表明，ARCN1耗尽的细胞细胞核中缺乏传入的RNP复合物。
图3
图3。不同流感病毒进入后复制事件的影响因素特征及保存需求
(一)显示了A/WSN/33病毒感染后90和180分钟宿主因子缺失对病毒NP蛋白核定位的影响（右图）。在180分钟时，所有基因和CSE1L、PRSS35、F13A1（p<0.02）均出现显著影响（基于Welch T检验，p<0.01）。左面板显示了缺乏这些因子的细胞中病毒复制（WT WSN）、病毒基因（NP/M1）转录水平以及WSN假型颗粒或Bla-M1 VLP的进入。与阴性对照组（最下面一行）相关的数值以蓝色（>95%抑制）到黄色（很少或没有抑制）的连续体表示。(b)A/WSN/33病毒感染CSE1L、CAMK2B和KPNB1细胞后指定时间流感病毒NP蛋白定位的共焦成像。90’插图中的箭头表示核RNP。(c（c）)宿主因子缺失对流感病毒小基因萤火虫报告病毒复制的影响。每个基因萤火虫荧光素酶的归一化倍数减少显示为相对于加扰siRNA控制（SC1）+/-标准偏差。通过Student的T检验，所有降低均显著（p<0.05）。（FF=萤火虫荧光素酶siRNA）。(d日)KN-93是CAMK2B的一种选择性抑制剂，以剂量依赖性方式抑制a/WSN/33流感病毒在MDCK细胞中的复制，而不影响细胞活力（ATP水平）。显示了三份样品的平均滴度+/-标准偏差。(e（电子）)用靶向所示基因的siRNAs转染A549细胞，随后感染流感A/WSN/33病毒、猪源流感A/Netherlands/602/2009（H1N1）病毒（SOIV）或VSV。病毒生长显示为相对于加扰siRNA控制（SC1）+/-标准偏差的平均百分比*低于检测水平（1×104pfu/ml）。NP=甲型流感病毒NP的siRNA，RPS=RPS27A的siRNA。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Palese P，Shaw ML。正粘病毒科：病毒及其复制。In:Knipe DM，Howley PM，编辑。菲尔兹病毒学。第5版。第2卷。费城：Lippincott Williams&Wilkins；2007年，第1647–1689页。
    1. Wang TT，Palese P.揭开猪流感病毒的神秘面纱。单元格。2009;137:983–985.-公共医学
    1. De Clercq E.抗病毒药物对甲型流感病毒具有活性。Nat Rev药物发现。2006;5:1015–1025.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Layne SP、Monto AS、Taubenberger JK。大流行性流感：一种不方便的突变。科学。2009;323:1560–1561.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Brass AL等。通过功能基因组筛查鉴定HIV感染所需的宿主蛋白。科学。2008;319:921–926.-公共医学

出版物类型

MeSH术语