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.2009年10月5日；651(2):201-8.
doi:10.1016/j.aca.2009.08.032。 Epub 2009年8月27日。

脂质生物合成的高分辨质谱和核磁共振同构体分析

安德鲁·莱恩 1, 特蕾莎W-M风扇, 谢正之, 亨特·N·B·莫斯利, 理查德·东芝（Richard M Higashi）
附属公司

脂质生物合成的高分辨质谱和核磁共振同构体分析

安德鲁·莱恩等人。 Ana Chim Acta公司. .

摘要

我们将2D-NMR和输注FT-ICR-MS与计算机辅助分配相结合，直接在粗细胞提取物中分析甘油磷脂（GPL）的13C同位素，从而在几分钟内实现了3000个以上等压分子的极高信息吞吐量。为了将同位素与其他GPL结构区分开来，要求质量精度高于1 ppm，测量m/z的分辨率为100000。从生长在[U-13C]-葡萄糖上的LCC2乳腺癌细胞中提取的GPL的同位素分析提供了有关GPL生物合成和周转的丰富信息。基于自然丰度背景，FT-ICR-MS的同位素强度比精确到约1%或更好，并且取决于信噪比。详细分析了[U-13C]-葡萄糖中13C并入特定磷脂酰胆碱的时间过程，以定量测量生长LCC2细胞中甘油、乙酰辅酶a和总GPL池的大小。对从高分辨率2D NMR获得的甘油和脂肪酰基链中的位置13C富集进行独立和互补分析，以验证模型的关键方面。该技术能够简单快速地制备样品，进行快速分析，并且通常适用于几乎任何头部组的未分离GPL，以及其他类别代谢物的混合物。

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数字

图1
图1
甘油磷脂酰胆碱的结构
图2
图2。LCC2细胞甲醇提取物的高分辨率核磁共振谱
从10 mM[U存在下生长的LCC2细胞中提取甘油磷脂-13C] -葡萄糖24小时，如文中所述。如方法所述，在800 MHz、20°C下记录核磁共振谱。A、 B.用1D 1H NMR谱记录50 ms混合时间的TOCSY谱。TOCSY光谱在18.8 T 293 K温度下记录，在B温度下混合时间为50 ms1场强为9 kHz。数据通过一个线性预测和t中的零填充进行处理1并在两个维度中使用非移位高斯函数进行切趾。C.1D核磁共振波谱顶部：1D13C编辑1H（HSQC）光谱底部：高分辨率1核磁共振波谱
图2
图2。LCC2细胞甲醇提取物的高分辨率核磁共振谱
从10 mM[U存在下生长的LCC2细胞中提取甘油磷脂-13C] -葡萄糖24小时，如文中所述。如方法所述，在800 MHz、20°C下记录核磁共振谱。A、 B.TOCSY光谱，以50ms的混合时间与1D 1H NMR光谱记录。TOCSY光谱在18.8 T 293 K温度下记录，在B温度下混合时间为50 ms1场强为9 kHz。数据通过一个线性预测和t中的零填充进行处理1并在两个维度中使用非移位高斯函数进行切趾。C.1D核磁共振波谱顶部：1D13C编辑1H（HSQC）光谱底部：高分辨率1核磁共振波谱
图2
图2。LCC2细胞甲醇提取物的高分辨率核磁共振谱
从10 mM[U存在下生长的LCC2细胞中提取甘油磷脂-13C] -葡萄糖24小时，如正文所述。如方法所述，在800 MHz、20°C下记录核磁共振谱。A、 B.用1D 1H NMR谱记录50 ms混合时间的TOCSY谱。TOCSY光谱在18.8 T 293 K温度下记录，在B温度下混合时间为50 ms1场强为9 kHz。数据通过一个线性预测和t中的零填充进行处理1并在两个维度中使用非移位高斯函数进行切趾。C.1D核磁共振波谱顶部：1D13C编辑1H（HSQC）光谱底部：高分辨率1核磁共振波谱
图3
图3。LCC2细胞甲醇提取物的高分辨FT-ICR质谱
A.使用[U标记24小时后LCC2甲醇提取物的FT-ICR-MS剖面光谱-13C] -葡萄糖。图中显示了m/z区域从760到782的特写。高分辨率（测量质量>10000）下的精确质量（优于1ppm）能够分配GPL及其同位素。根据内部标准利血平进行外部校准和二次校准的质量和强度已任意缩放至100单位（m）0m/z=760.5860。B.将PC 34:1的质量分布归一化为总强度随时间的函数。0h时的分布与预期的自然丰度强度无法区分。这里使用线形图只是为了清楚起见；数据点C之间没有隐含值。选定质量峰值的时间过程。■ 米0，□米0+3，●∑（m0+2n）；❍ ∑（米0+3+2n）。m0+3个强度拟合到a（1−exp（−kt）），a=0.11±0.008，k=0.19±0.04 h−1
图3
图3。LCC2细胞甲醇提取物的高分辨FT-ICR质谱
A.使用[U标记24小时后LCC2甲醇提取物的FT-ICR-MS剖面光谱-13C] -葡萄糖。图中显示了m/z区域从760到782的特写。高分辨率（测量质量>10000）下的精确质量（优于1ppm）能够分配GPL及其同位素。根据内部标准利血平进行外部校准和二次校准的质量和强度已任意缩放至100单位（m）0m/z=760.5860。B.将PC 34:1的质量分布归一化为总强度随时间的函数。0h时的分布与预期的自然丰度强度无法区分。这里使用线形图只是为了清楚起见；数据点C之间没有隐含值。选定质量峰值的时间过程。■ 米0，□米0+3，●∑（m0+2n）；❍ ∑（米0+3+2n）。m0+3个强度拟合到a（1−exp（−kt）），a=0.11±0.008，k=0.19±0.04 h−1
图4
图4。甘油磷脂酰胆碱生物合成模型
仅显示了可从葡萄糖中生物合成标记的碳原子（胆碱头部基团未标记，见正文）。Glc=葡萄糖，Gly=甘油。实心圆表示13C和开放圆12C.甘油和乙酰碳来源于[U-13C] -葡萄糖或未标记来源。脂肪酸是由标记和未标记的乙酰辅酶A随机生成的。丁酸（如图所示）有4种可能的同位素。这些可以与未标记（天然13C丰度）甘油，或标记甘油。从4个脂肪酰基同位素中，与每个甘油部分缩合生成16个可能的二酰基GPL分子，有两种方法可以使两条链都未标记，两种方法都完全标记（813C） 有两种方式13C、 四分之四13C.对于两种形式的甘油，这些可能性同样存在，导致两个峰，包括m0，米0+2，米0+4，米0+8和m0+3，米0+5米0+7和m0+11.总量的一部分也将对应于尚未移交的先前存在的GPL（即仅自然丰度13C） ●●●●。仅显示了四种具有代表性的二丁基GPL同位素（共32种）。
图5
图5
模拟同位素极化24小时分布24小时后的同位素分布13使用公式（2）和文中给出的适当p值计算C葡萄糖标记。使用文中所述的等式1计算脂肪酰基链的同位素，乙酰辅酶a池为35%13C2醋酸盐。（●）观察到的模拟分布。
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    1. Orita H、Coulter J、Lemmon C、Tully E、Vadlamudi A、Medghalchi SM、Kuhajda FP、Gabrielson E.临床癌症研究。2007;13:7139–7145.-公共医学
    1. Swinnen JV，Brusselmans K，Verhoeven G.临床营养和代谢护理的当前意见。2006;9:358–365.-公共医学
    1. Piyathilake CJ、Frost AR、Manne U、Bell WC、Weiss H、Heimburger DC、Grizzle WE。人类病理学。2000;31:1068–1073.-公共医学

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