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.2009:579:443-67.
doi:10.1007/978-1-60761-322-0_22。

生物活性鞘脂的高效液相色谱-串联质谱综合定量分析

附属公司

生物活性鞘脂的高效液相色谱-串联质谱综合定量分析

杰克·比拉夫斯基等。 摩尔生物法. 2009.

摘要

最近,关于神经酰胺(Cer)、鞘氨醇(Sph)和1-磷酸鞘氨醇。ESI/MS/MS方法提供了一种通用工具,用于检测和监测生物材料中SPL水平和成分的变化。在运行于多反应监测(MRM)的Thermo Fisher Scientific三重四极杆质谱仪上,对鞘磷脂碱(SB)、鞘磷脂碱1-磷酸盐(SB-1P)、神经酰胺(Cers)、神经胺1-磷酸盐(Cer-1P)、葡萄糖基/半乳糖基陶瓷(Glu-Cers)和鞘磷脂(SM)进行同步ESI/MS/MS分析正电离模式。生物材料(细胞、组织或生理液)用内标物(IS)进行强化,提取到单相中性有机溶剂系统中,并通过LC/MS/MS系统进行分析。SPL的定性分析(识别)是通过对特定类别SPL的常见碎片离子特征进行母离子扫描来实现的。定量分析是基于在人造基质中加入已知量的目标分析物、合成标准物和等量的is生成的校准曲线。校准曲线是通过使用线性回归模型绘制分析物与相应is的峰面积比与浓度的关系来构建的。这种稳健的分析程序可以确定各种生物材料中内源性鞘磷脂(ESPL)的组成,并达到亚皮摩尔水平的检测极限。该方法构成了研究SPL代谢的“脂质体”方法,定义了单个生物活性SPL类别的不同亚种的功能。

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