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.2009年7月15日；69(14):5752-60.
doi:10.1158/0008-5472.CAN-08-3992。

细胞命运决定因子DACH1在雌激素受体α阳性乳腺癌中表达，并抑制雌激素受体α信号

弗拉基米尔·波波夫 1, 周杰（音译）, L安德鲁·雪莉, 朱迪·昆, Wen-Shuz Yeow先生, 詹妮弗·赖特, 吴孔明博士, Hallgeir Rui公司, 拉特纳·K·瓦德拉穆迪, Jie Jiang（解江）, 拉凯什·库马尔, 王晨光同学, 理查德·佩斯特尔
附属机构

细胞命运决定因子DACH1在雌激素受体α阳性乳腺癌中表达，并抑制雌激素受体α信号

弗拉基米尔·波波夫等。 癌症研究. .

摘要

Dachshund（dac）基因最初被克隆为果蝇高活性EGFR突变椭圆的显性抑制剂，编码果蝇眼睛发育过程中细胞命运决定途径的关键成分。对2200多个乳腺癌样本的分析表明，肿瘤表达DACH1的患者的生存期提高了约40个月。在此，DACH1和雌激素受体α（ERalpha）在人类乳腺癌中的表达呈负相关。DACH1结合并抑制ERalpha功能。细胞核DACH1表达抑制雌二醇（E（2））诱导的DNA合成和细胞增殖。DACH1在免疫沉淀-Western印迹中结合ERalpha，与染色质免疫沉淀中的ERalpha.相关，并抑制ERalpha-转录活性，需要保守的DS结构域。蛋白质组分析确定脯氨酸、谷氨酸和富含亮氨酸蛋白1（PELP1）为DACH1结合蛋白。与PELP1结合需要DACH1 COOH末端。DACH1抑制ERalpha信号的诱导。E（2）在内源性内质网反应元件处从DACH1中招募ERalpha并分离辅升压因子，使PELP1成为ERalpha-辅激活因子。DACH1表达在预后不良的人类乳腺癌中缺失，它作为ERalpha功能的内源性抑制剂发挥作用。

PubMed免责声明

利益冲突声明

潜在利益冲突的披露

没有披露潜在的利益冲突。

数字

图1
图1
人类乳腺癌中DACH1的表达与ERα呈负相关。A、，使用AQUA-PM 2000平台进行的免疫组织化学染色显示，乳腺癌样本中DACH1和ERα表达水平呈负相关。B、，正常乳腺组织的免疫组织化学染色(顶部)和乳腺癌(底部).C、，ERα和DACH1在乳腺癌中的表达呈负相关。D、，DACH1在正常乳腺组织中的核仁表达在早期侵袭性乳腺癌中丢失。
图2
图2
DACH1和ERα上的结构域需要相互作用。A、，转染wt或突变DACH1表达载体和wt ERα的HEK293T细胞用E2持续24小时（10−8摩尔/升）。用抗FLAG抗体进行免疫沉淀，然后用Western blotting检测ERα。DACH1的COOH末端是与ERα相互作用所必需的。B、 在体外翻译35S-标记的DACH1和ERα与涂有等量GST蛋白的GST-ERα片段的珠培养，显示ERα与DACH1之间物理结合对ERα的最低序列要求。数据表明，与DACH1的相互作用需要ERα上282到337氨基酸的区域。
图3
图3
ERα活性被DACH1抑制。A、，用DACH1表达载体和ERα反应荧光素酶报告基因转染MCF-7细胞。用E处理细胞2(10−8mol/L）作用24小时。柱，平均荧光素酶活性n个>5次单独转染；酒吧，东南方。B、，将ERE荧光素酶报告子与表达载体共转染，以获得缺失DS结构域的wt或DACH1突变体(左边)或人类细胞周期蛋白D1启动子(正确的). DACH1表达抑制雌激素反应元件的转录。C、，DACH1抑制稳定感染DACH1的MCF-7细胞的DNA合成。D、，这个第2页启动子荧光素酶报告子与DACH1表达载体共转染。定量逆转录聚合酶链式反应第2页稳定表达MSCV-iRES-GFP-DACH1或对照的MCF-7细胞的mRNA水平。
图4
图4
PELP1结合DACH1。A、，用于鉴定DACH1相关蛋白的蛋白质组方法的示意图。B、，DACH1的结构表明保守的DS结构域。COOH末端的mSin3A结合位点。用DACH1的NH2末端的FLAG抗体进行免疫沉淀。Western blot针对细胞裂解物中PELP1的T7表位和用DACH1的α-FLAG抗体进行的免疫沉淀。删除DACH1 COOH末端将废除PELP1结合。C、，免疫沉淀-转染FLAG-tagged DACH1和T7-tagged PELP1缺失突变体的细胞的Western blotting，用于识别PELP1上结合DACH1所需的结构域。根据PELP1突变体的相对结合，可以得出结论，PELP1上400到460氨基酸的区域是相互作用所必需的。D、，DACH1的MCF-7细胞共聚焦显微镜观察(绿色)和PELP1(红色). DACH1和PELP1的彩色化如图所示。
图5
图5
在配体存在的情况下，DACH1与PELP1在ERα处竞争。A、 在体外翻译35S标记的DACH1、PELP1和ERα在E的存在下孵育2(10−8mol/L）或对照，然后使用Myc和T7抗体进行免疫沉淀。DACH1联营公司在体外PELP1和ERα。B、，ERα免疫沉淀(M2 IP标志)共沉淀PELP1。ERα免疫沉淀物与越来越多的细菌纯化的DACH共存(HIS-DACH1（西班牙语）)然后在SDS-PAGE上电泳。如图所示，对抗体进行蛋白质印迹，以显示在DACH1增加的情况下与ERα结合的PELP1的相对丰度。
图6
图6
DACH1在局部染色质的背景下调节ERα的占有率。A、，染色质免疫沉淀分析第2页发起人。用E处理MCF-7细胞2(10−8摩尔/升）。染色质免疫沉淀分析显示HDAC1/组蛋白H3和DACH1在第2页PELP1启动子ERE。E2的添加使用针对DACH1的抗FLAG抗体增强DACH1结合。B、，shRNA到PELP1减少PELP1并增加HDAC1丰度第2页染色质免疫沉淀试验中的ERE。C、，用编码DACH1和/或PELP1的表达载体转染雌激素反应荧光素酶报告基因。柱，平均荧光素酶活性n个>5个单独的转染；酒吧，PELP1表达逆转DACH1介导的ERα转录活性抑制。D、，DACH1通过与PELP1竞争抑制配体ERα信号传导从而增加HDAC1相对丰度的拟议机制的示意图。
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