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.2009年6月15日；23（12）：1450-60。
doi:10.1101/gad.1795909。

在乳腺形态发生过程中，Par3/aPKC相互作用对终芽重塑和祖细胞分化至关重要

卢克·马丁·麦卡弗里 1, 伊恩·马卡拉
附属公司

在乳腺形态发生过程中，Par3/aPKC相互作用对终芽重塑和祖细胞分化至关重要

卢克·马丁·麦卡弗里等。 基因开发. .

摘要

哺乳动物极性蛋白主要在细胞培养系统中进行研究，而对其在体内的功能知之甚少。为了解决这个问题，我们使用shRNA慢病毒系统来操纵小鼠乳腺干/祖细胞中的基因表达。将Par3缺失的干/祖细胞移植到乳腺脂肪垫中严重破坏了乳腺发育，腺体的特征是导管增生、管腔充盈和高度紊乱的末端芽结构，无法重塑为正常的导管结构。出乎意料的是，Par3缺失乳腺的祖细胞数量也在增加。我们鉴定了Par3的非典型蛋白激酶C（aPKC）结合域在体内限制Par3和aPKC在乳腺上皮顶部区域的新功能，并发现乳腺形态发生依赖于Par3直接结合aPKC的能力。这些结果揭示了Par3在体内调节祖细胞分化和上皮形态发生中的新功能，并首次证明了Par3-aPKC相互作用的基本要求。

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数字

图1。
图1。
原代小鼠乳腺上皮细胞和干细胞中Par3的敲除。(A类)用两种不同的抗小鼠Par3的shRNA慢病毒转导NIH 3T3细胞。转导后第7天用免疫印迹法检测Par3和微管蛋白水平。(B类)Par3敲除的定量A类数据表示两个独立实验的平均值。Tubulin被用作内部对照。(C类)在MOI等于1、5、10、20或50的情况下，用对照或shPar3慢病毒转导原代小鼠MEC。慢病毒转导后第10天用免疫印迹法检测Par3和微管蛋白水平。(D类)中Par3击倒的量化C类数据表示两个独立实验的平均值。Tubulin被用作内部对照。误差条，SD(E类)初级小鼠MEC中慢病毒击倒Par3的时间进程。在MOI=20时用shPar3-1慢病毒转导细胞。在慢病毒转导后的指定时间，用免疫印迹法检测Par3蛋白水平。(F类)中Par3击倒的量化E类点表示两个独立实验的平均值。Tubulin被用作内部控制。误差条，SD(G公司)移植后8周，对照组和shPar3乳腺石蜡切片。切片进行Par3和ZO1免疫染色。棒材，20μm。
图2。
图2。
Par3对乳腺的正常发育至关重要。(A类,B类)8周后对照组乳腺的胭脂红明矾染色全身图像。箭头输入B类在发育中的腺体中有一个端芽。棒材，0.5 mm(C类,D类)再生8周后shPar3乳腺的胭脂红明矾染色整体图像。箭头在D类在单个脂肪垫中显示多个独立的小突起。中的开放箭头D类图中显示了缺乏突出端芽的无组织小导管区域。棒材，0.5 mm(E类)对照组填充脂肪垫的百分比(n个=6）和Par3已完成(n个=8）乳腺定量。误差条，SD。（*）P（P）=0.00004。(F类)控制中的风管直径分布(n个=6）和Par3已完成(n个=8）乳腺。测量对照组和Par3缺失腺体的所有导管的直径，并以20μm的增量进行分类。(G公司)对照组和Par3缺失乳腺的端芽大小分布。测量对照组和Par3缺失腺体所有末端的直径，并以50μm的增量进行分类。(H（H）)对照组和Par3缺失腺体的组织切片染色，以检测裂解的Caspase-3（红色）和Hoechst 33342（蓝色）。棒材，20μm。(我)对照导管（黑条，n个=5），控制端芽（灰色条，n个=5），Par3已完成（白色条，n个=5）压盖。误差条，SD。（*）P（P）=0.034控制导管与控制端芽；(**)P（P）=0.001 shPar3与控制管道；（**）P（P）=0.37 shPar3与对照端芽。(J型)对对照组和Par3缺失腺体的组织切片进行Ki67（红色）和Hoechst 33342（蓝色）染色。棒材，20μm。(K（K）)Ki67的量化+控制管道中的电池（黑色条，n个=5），控制端芽（灰色条，n个=4），Par3已完成（白色条，n个=5）压盖。误差条，SD。（*）P（P）=0.0004，控制导管与控制端芽；(**)P（P）=0.016，shPar3与控制管道；(**)P（P）=0.20，shPar3与对照端芽。
图3。
图3。
乳房发育需要Par3的PKC结合域。(A类)人体Par3b和人体Par3c的示意图。显示的结构域为保守区（CR）、PSD95/Dlg/ZO1结构域（PDZ）和非典型蛋白激酶C结合结构域（aPKC-BD）。数字表示氨基酸的数量。(B类)双顺反子慢病毒质粒表达shRNA和cDNA的示意图。（LTR）长末端重复；（EF1α）EF1α启动子；（H1）H1 RNA聚合酶III启动子。(C类)乳腺上皮裂解物的免疫印迹来自表达对照/YFP-hPar3b、shPar3/YFP-hPar3b、对照/YFPhPar3c和shPar3/YFPhPar3c双顺反子慢病毒的细胞。使用抗Par3抗体检测斑点。这个顶部频带为YFP-hPar3底部带为内源性Par3。(D类,E类)shPar3-YFPhPar3b的胭脂红明矾染色全山图像(D类)和shPar3/YFPhPar3c(E类)8周后乳腺。小箭头显示末端芽D类。打开的箭头显示中无组织的风管E类.棒材，0.5 mm(F类)shPar3–hPar3b和shPar3-hPar3c乳腺导管直径的分布(n个= 3). 测量导管直径，并以25μm为增量进行分类。(G公司)shPar3–hPar3b和shPar3-hPar3c乳腺末端大小的分布(n个= 3). 测量终端的直径，并按50μm的增量进行分类。
图4。
图4。
Par3缺失扰乱乳腺祖细胞分化并破坏肌上皮层。(A类)移植后8周，对对照组和shPar3乳腺石蜡切片进行K8（绿色）和K14（红色）免疫染色。（面板c（c）)箭头显示多层风管。面板内e（电子）：（te）终端；（d） 管道。棒材，10μm。(B类)K8的量化+，K14+和K8+K14号公路+细胞。对所有图像应用统一的阈值，并计算单阳性和双阳性上皮细胞的比例。误差条，SD(n个= 5). (*)P（P）= 0.00003; （**）P（P）= 0.009; (***)P（P）=0.02与对照端芽；(***)P（P）=0.1相对于控制管道。
图5。
图5。
Par3缺失的乳腺基底层紊乱，被帽细胞包围。(A类)移植后8周，对对照组或Par3缺失乳腺石蜡切片进行K8（绿色）和SMA（红色）免疫染色。（面板b条,d日)箭头表示SMA+腔室内的细胞团。（面板b条)箭头显示管腔内的细胞。棒材，10μm。(B类)移植后8周，对对照组或Par3缺失乳腺石蜡切片进行K14（绿色）和SMA（红色）免疫染色。箭头显示K14负极/座椅模块组件+帽细胞。箭头表示管腔K14+细胞。棒材，20μm。
图6。
图6。
Par3和aPKC在亚细胞分布上相互依赖。(A类)对shPar3-YFPhPar3b和shPar3-YFPhPar3c乳腺组织切片进行YFP（绿色）和Hoechst 33342（H33342，蓝色）染色。箭头显示hPar3c位于侧膜上。(B类)对对照组和Par3缺失的乳腺进行YFP（标记转基因细胞，绿色）和aPKC（红色）染色。(C类)对shPar3-YFPhPar3b和shPar3-Y FPhPar3 c乳腺进行YFP（绿色）和aPKC（红色）染色。箭头显示aPKC和hPar3c在侧膜上的定位错误。棒材，20μm。
图7。
图7。
Par3和aPKC调节祖细胞分化。(A类)对照组或Par3缺失的COMMA-1D细胞培养7天，并对K8和K14进行染色。(B类)量化A类. (*)P（P）=0.005（对照组vs.shPar3）；(**)P（P）=0.01（对照组vs.shPar3）。(C类)每隔48 h用40μM肉豆蔻酰化aPKCζ假底物处理COMMA-1D细胞7 d，然后对K8和K14进行染色。(D类)量化C类. (*)P（P）=0.003（对照组vs.shPar3）。(E类)对照或Par3缺失的COMMA-1D细胞生长7天，并染色K6。(F类)量化E类. (*)P（P）= 1.2 × 10−13（对照组vs.shPar3）。(G公司)每隔48 h用40μM肉豆蔻酰化aPKCζ假底物处理COMMA-1D细胞7 d，然后进行K6染色。(H（H）)量化G公司. (**)P（P）= 5.8 × 10−7（对照组与aPKCζ-ps）。棒材，100μm；误差条，SD；n个= 4. (我)MECs中Par3/aPKC功能的模型。Par3允许将构成性aPKC/Par6复合体招募到紧密接合处（面板一)复合物被传递给顶端蛋白质（面板b条; 顶端蛋白[A？]），磷酸化顶端靶点（面板c（c）; 心尖靶[T？]）。（面板d日)在缺乏Par3的情况下，aPKC不会被征募到质膜上，也不能磷酸化顶端靶点。（面板e（电子）)Par3c变异体可以将aPKC募集到质膜上，但不能适当地传递aPKC，因此这两种蛋白质都保持结合并扩散到顶端和侧面，但aPKC不能磷酸化其正常靶点。有关其他详细信息，请参阅讨论。
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参考文献

    1. Atwood SX、Chabu C、Penkert RR、Doe CQ、Prehoda KE。Cdc42作用于Bazooka下游，通过Par-6 aPKC调节成神经细胞极性。细胞科学杂志。2007;120:3200–3206.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Benton R，St Johnston D.果蝇PAR-1和14–3–3抑制Bazoka/PAR-3在极化细胞中建立互补的皮层区域。细胞。2003;115:691–704.-公共医学
    1. Costa MR、Wen G、Lepier A、Schroeder T、Gotz M.Par-complex蛋白促进发育中小鼠大脑皮层的增殖祖细胞分裂。发展。2008;135:11–22.-公共医学
    1. Danielson KG、Oborn CJ、Durban EM、Butel JS、Medina D。体内正常形态发生和体外功能分化的上皮性小鼠乳腺细胞系。国家科学院院刊。1984;81:3756–3760.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Debnath J，Brugge JS公司。在三维培养中模拟腺上皮癌。Nat Rev癌症。2005;5:675–688.-公共医学

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