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.2009年4月17日；284(16):10361-6.
doi:10.1074/jbc。M900956200。 Epub 2009年2月13日。

DBC1抑制SUV39H1甲基转移酶活性

李振宇 1, 陈丽红, 尼哈·卡布拉, 王传贵, 贾芳, 陈建东
附属公司

DBC1抑制SUV39H1甲基转移酶活性

李振宇等。 生物化学杂志. .

摘要

SUV39H1是一种组蛋白H3K9特异性甲基转移酶，对异染色质的形成、基因表达的调节和诱导癌前细胞衰老至关重要。SUV39H1与SirT1形成复合物，其活性受到SirT1-结合的刺激。在这里，我们提供证据表明DBC1（在乳腺癌1中删除）基因的产物破坏了SUV39H1-SirT1复合物。此外，DBC1与SUV39H1催化结构域结合，并抑制其在体内外甲基化组蛋白H3的能力。内源性DBC1的敲除增加了细胞H3K9甲基化的水平。正如预期的那样，DBC1也与SirT1结合，并抑制SirT1的脱乙酰酶活性。这些结果表明DBC1是SUV39H1活性的新型细胞抑制剂。DBC1通过破坏SUV39H1-SirT1复合物并使这两种酶失活，可能是异染色质形成和基因组稳定性的重要调节器。

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数字

图1。
图1。
DBC1和SUV39H1之间的相互作用。 一，H1299细胞为用所示质粒瞬时转染48小时。内源性DBC1用抗DBC1抗体免疫沉淀。共沉淀的SUV39H1通过抗Myc蛋白质印迹检测(工作分解结构). DBC1、Myc-MDX和通过抗DBC1和抗Myc证实了WCE中Myc-SUV39H1的表达水平抗体。b条，用抗体10E4免疫沉淀SirT1，而SUV和MDMX用抗Myc抗体免疫沉淀。用抗DBC1蛋白印迹法检测共沉淀DBC1。SUV39H1和通过抗Myc Western印迹检测MDMX。c（c），HA-DBC1是用FLAG标记的组蛋白甲基转移酶和用抗HA抗体免疫沉淀。检测到共沉淀酶通过反FLAG Western印迹。检测到HA-DBC1在WCE中的表达带有抗DBC1抗体。d日，瞬时转染H1299细胞带有指示的质粒。小鼠免疫沉淀SUV39H1抗SUV39H1抗体。共沉淀SirT1和DBC1用抗体10E4和抗DBC1抗体。SUV39H1被检测用兔抗SUV抗体复制。
图2。
图2。
SUV39H1-DBC1和SirT1-DBC1中涉及的DBC1域的映射互动。H1299细胞瞬时转染质粒48h。一，DBC1用抗FLAG免疫沉淀抗体。抗SUV39H1 Western检测到SUV39H2共沉淀吸墨剂(工作分解结构).重量，野生型。b条,在里面体外-翻译的SUV39H1与GST-DBC1截短突变体孵育与谷胱甘肽珠结合。通过SDS-PAGE和放射自显影术。c（c）、DBC1和截断突变体用M2珠免疫沉淀。兔检测到SirT1共沉淀抗SirT1抗体，而DBC1由兔抗FLAG抗体检测。d日，图表总结了中的结果a–c.荷兰统计局,核定位信号；LZ公司，亮氨酸拉链。
图3。
图3。
SUV39H1-DBC1交互中涉及的SUV39H2域的映射。 一用抗HA抗体免疫沉淀DBC1。SUV39H1型用兔抗FLAG抗体检测共沉淀。重量,野生型；工作分解结构，Western blot。b条，图表总结了结果如图所示。色度，色域。
图4。
图4。
DBC1通过其N末端抑制SUV39H1甲基转移酶活性域。H1299细胞瞬时转染质粒48h。一、不同数量的SUV39H1（相对水平1×、2×、4×、8×和16×）进行免疫沉淀用抗Myc抗体。用抗体10E4免疫沉淀SirT1；MDM2型用抗FLAG抗体免疫沉淀SUV39H1。珠子是用于在体外组蛋白H3甲基化的检测三H放射自显影术。通过Western blotting检测到SUV39H1。考马斯染色显示细胞膜上的组蛋白H3。b条,SUV39H1以与一.用抗FLAG抗体免疫沉淀DBC1和缺失突变体。这个珠子用于在体外组蛋白H3的甲基化。表达式DBC1突变体水平和SUV39H1的共沉淀通过蛋白质印迹(工作分解结构).重量，野生型。
图5。
图5。
DBC1禁用SUV39H1体内. 一，H1299细胞为用DBC1 siRNA或对照siRNA转染。提取组蛋白用抗H3K9me3抗体检测H3K9 me3水平，并用抗H3抗体。用抗DBC1抗体检测WCE中的DBC1。b条，293T细胞瞬时转染提取48 h的质粒组蛋白，并用抗H3K9me3抗体。用抗DBC1抗体检测WCE中的DBC1。用抗Myc抗体检测WCE中的SUV39H1。c（c），H1299用所示质粒转染细胞48小时。相对荧光素酶活性通过共转染进行测定和标准化lacZ公司控件。d日，瞬时转染H1299细胞与所示质粒作用48小时。p53 Lys乙酰化382是用抗Ac-K382抗体检测，用p53抗体DO1重复。e（电子），将H1299与所示质粒转染48小时对裂解液进行组蛋白脱乙酰酶分析(HDAC公司)活动使用三H标记的乙酰化H3肽作为底物。（f），一个模型显示了SUV39H1-SirT1综合设施的DBC1法规。误差线代表三个实验中的S.D。
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