跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

HTTP服务器

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并且被安全地传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2009年3月3日；106(9):3207-12.
doi:10.1073/pnas.0808042106。 Epub 2009年2月6日。

p53通过诱导肿瘤抑制因子miR-145抑制c-Myc

Mohit Sachdeva公司 1, 朱寿民, 吴方亭, 吴海龙, 维杰·瓦利亚, 萨米特·库马尔, 伦道夫·埃尔布尔, Kounosuke Watabe公司, 尹元墨
附属公司

p53通过诱导肿瘤抑制因子miR-145抑制c-Myc

莫希特·萨赫德瓦等。 美国国家科学院程序. .

摘要

抑癌基因p53除了激活许多其他基因外，还负调控许多基因，包括原癌基因c-Myc。p53介导的c-Myc抑制的一种机制可能涉及转录调控。然而，尚不清楚microRNAs（miRNAs）是否在p53介导的c-Myc转录后调控中发挥作用。在这项研究中，我们发现一种假定的肿瘤抑制因子miR-145通过磷酸肌醇-3激酶（PI-3K）/Akt和p53途径表达。重要的是，p53通过与miR-145启动子中潜在的p53反应元件（p53RE）相互作用，在转录上诱导miR-145的表达。我们进一步证明c-Myc是miR-145的直接靶点。虽然miR-145沉默了c-Myc的表达，但抗miR-145-增强了其表达。miR-145对c-Myc的这种特异性沉默至少部分解释了miR-145-介导的体内外肿瘤细胞生长抑制。最后，抗miR-145阻断miR-145-能够逆转p53介导的c-Myc抑制。总之，这些结果确定了miR-145在p53对c-Myc转录后调控中的作用，并表明，作为p53调控网络的一个新成员，miR-145在该基因调控网络中提供了p53和c-Myc之间的直接联系。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

数字

图1。
图1。
的表达式miR-145型通过Akt和p53途径。(A类)的表达式miR-145型分别在匹配的乳腺和结肠肿瘤标本中。在乳腺肿瘤组织中miR-145型占正常组织的31%；在结肠肿瘤组织中，相应数量为19%。(B类)诱导miR-145型通过血清饥饿。细胞（HCT-116和HCT-8）在含有10%或不含FBS的培养基中生长24小时(C类)诱导miR-145型PI-3K抑制剂LY294002。用50μM LY294002处理HCT-116细胞16小时(D类)显性阴性Akt（Akt-DN）诱导miR-145型表达式。将HCT-116细胞单独转染载体（pCMV）或Akt-DN 24 hB–D类是3个单独实验的平均值±SE，并归一化为各自的控制值1.**，P（P）< 0.01.
图2。
图2。
诱导miR-145型通过p53。(A类)用腺病毒pAd-GFP（Vector）或pAd-GFP-p53（p53）转导MCF-7细胞24小时，然后收获用于提取蛋白质或RNA。插入，检测p53表达。(B类)HCT-116（p53−/−）或HCT-114（+/+）用Doxo以0.5或1.0μg/ml处理16 h。分别采集细胞以获取蛋白质或RNA。p21用作阳性对照。(C类)用载体（pCMV）或突变型p53（R175H）瞬时转染MCF-7细胞并培养24小时。插入突变型p5 3检测。中的值A类,B类、和C类是3个单独实验的平均值±SE，并归一化为各自的控制值1.**，P（P）< 0.01.
图3。
图3。
p53诱导miR-145型与p53RE-2结合的启动子活性。(A类)假设的示意性描述miR-145型与p53RE一致意见相比，具有2个潜在p53反应元件的启动子p53RE-1和p53RE-2以及突变的p53RE2（p53RE-2-mut），其中R=A+G；W=A+T和Y=C+T。小写字母表示偏离共识。保守核苷酸C和G以红色突出显示。两个半位点之间的序列以蓝色表示。在p53RE-2-mut中，保守的C和G分别被T和A取代。(B类)和C，分别用pMIR-145p-Luc-1在NIH/3T3和MCF-7细胞中进行荧光素酶分析。pMIR-205p-Luc用作阴性对照。(v（v）)向量。(D类)删除和定点突变分析确定了miR-145型p53介导的萤光素酶活性的诱导中的p53RE-2。(E类)ChIP分析显示p53与p53RE-2特异性相互作用。p21作为阳性对照。无p53结合位点的人钙激活氯通道蛋白2基因上游区域的序列作为阴性对照。145-p，mir-145型发起人；p21-p，p21启动子。中的值B–D类是3个单独实验的平均值±SE，并归一化为各自的控制值1(B类和C类)或100%(D类). **,P（P）< 0.01.
图4。
图4。
miR-145型直接靶向c-Myc并抑制其表达。(A类)Western blot显示c-Myc蛋白被miR-145型但不是突变体miR-145型(miR-145型-公吨）。细胞单独转染载体或miR-145型或miR-145型-mt处理24小时后采集进行蛋白质提取。(B类)封锁miR-145型通过反-145百万兰特（抗-145）导致c-Myc上调。HCT-116细胞被打乱的寡核苷酸或抗-miR-145型24小时后收获寡核苷酸，用于提取蛋白质或RNA。将相同的转染细胞分别用于Western blot或TaqMan实时PCR。(C类)c-Myc下游靶基因eIF4E和CDK4的抑制作用miR-145HCT-116细胞中。(D类)的影响miR-145型细胞周期。用载体控制或miR-145型表达式向量。两天后，收集细胞进行细胞周期分析。(E类)假定的miR-145型c-Myc 3′-UTR和突变体中的结合位点miR-145其中种子序列发生突变。(F类)的影响miR-145型或突变型miR-145型关于Luc-c-Myc-UTR和Luc-c-My-UTR-d的荧光素酶活性miR-145型绑定站点已删除。对于荧光素酶分析，293T细胞转染载体或miR-145型表达载体转染后2天收集细胞进行裂解。F中的值是3个单独实验的平均值±SE，并归一化为各自的控制值100%。**，P<0.01。
图5。
图5。
的作用miR-145型p53介导的c-Myc抑制。(A类)野生型p53和突变型p53（R175H）以及Doxo诱导的p53对c-Myc表达的影响。用p53转导HCT-116细胞或用突变型p53转染24小时，然后收获用于提取蛋白质。对于内源性p53的诱导，实验的执行与图2相同B类使用1μg/ml Doxo。(B类)用0.5或1.0μg/ml的Doxo处理HCT-116（p53−/−）和HCT-116（p53+/+）细胞16小时。(C类)抗p53介导的c-Myc抑制的阻断作用-miR-145型HCT-116（p53−/−）和HCT-116（p53+/+）细胞首先转染抗-miR-145型或控制寡核苷酸。10小时后，在提取蛋白质或RNA之前，用1.0μg/ml的Doxo处理细胞16小时-miR-21型作为额外的阴性对照。不含Doxo的空白作为c-Myc的基线，用于比较Doxo治疗组和Doxo对照组，或-miR-145型和阴性对照（加扰寡糖或抗-miR-21型)。通过相同的无寡核苷酸转染实验进行模拟对照，以证实Doxo/p53对c-Myc的抑制是特异性的。底部：相对c-Myc水平是3个单独实验的平均值±SE，并标准化为100%的无Doxo对照。反的值-miR-145型HCT-116（p53+/+）细胞中的lane为92%。**，P（P）与空白对照组相比<0.01。(D类)c-Myc-siRNA和/或抗-miR-145型c-Myc、p21和Bax。用打乱寡核苷酸或c-Myc-siRNA转染HCT-116细胞24小时，然后用或不用Doxo（0.5μg/ml）处理16小时赖特在不同的处理中，暴露时间比左侧1长，以检测不同数量的c-Myc蛋白。(E类)miR-145型也抑制p53−/−细胞中的c-Myc。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

参考文献

    1. Levy N，Yonish-Rouach E，Oren M，Kimchi A.白细胞介素-6野生型p53对M1细胞作用的补充：诱导细胞周期退出以及与c-myc抑制的协同作用。分子细胞生物学。1993;13:7942–7952.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Pelengaris S，Khan M。c-MYC的许多面孔。生物化学与生物物理学Arch Biochem Biophys。2003;416:129–136.-公共医学
    1. McNeil CM等。乳腺癌中c-Myc过度表达和内分泌抵抗。类固醇生物化学分子生物学杂志。2006;102:147–155.-公共医学
    1. Ragimov N等。野生型而非突变型p53可以通过干扰基础转录因子与TATA基序的结合来抑制体外转录启动。致癌物。1993;8:1183–1193.-公共医学
    1. Ho JS，Ma W，Mao DY，Benchimol S.p53——G1细胞周期阻滞需要c-myc的依赖性转录抑制。分子细胞生物学。2005;25:7423–7431.-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型