跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2009年3月13日；104(5):609-18.
doi:10.1161/CIRCRESAHA.108.186064。 Epub 2009年1月22日。

氧化磷脂诱导VIII型胶原表达和血管平滑肌细胞迁移

奥尔加A切雷帕诺娃 1, 娜塔莉亚·皮德科夫卡, 奥尔加·F·萨门托, Tadashi吉田, 琼干, 埃塞尔·阿迪古泽尔, 米歇尔·本德克, 朱迪思·柏林, 诺伯特·雷廷格, 加里·欧文斯
附属机构

氧化磷脂诱导VIII型胶原表达和血管平滑肌细胞迁移

奥尔加·A·切里帕诺娃等。 循环研究. .

摘要

众所周知，血管平滑肌细胞（VSMC）的表型转换在动脉粥样硬化的发展中起着关键作用。然而，病变中存在的介导VSMC表型转换的因素尚不清楚。氧化磷脂（OxPL），包括1-棕榈酰-2-（5-氧代戊酰基）-sn-甘油-3-磷酰胆碱（POVPC），是最小修饰的低密度脂蛋白的活性成分，先前已被证明可在内皮细胞和巨噬细胞中诱导多种促动脉粥样硬化事件，但它们对VSMC的影响直到最近才得到很大程度的研究。我们之前发现OxPLs诱导VSMC的表型转换，包括SMC分化标记基因的抑制。本研究的目的是验证OxPLs改变细胞外基质生成和VSMC迁移的假设。结果表明，POVPC激活了VSMC中几种细胞外基质蛋白的表达。POVPC使培养的VSMC和大鼠颈动脉体内VIII型胶原α1链（Col8a1）mRNA的表达分别增加了9倍和4倍。小干扰RNA介导的Krüppel样因子4（Klf4）和Sp1的抑制降低了POVPC诱导的Col8a1基因表达的激活，并在Klf4敲除的VSMCs中被消除。根据染色质免疫沉淀分析，在大鼠颈动脉和培养的VSMC中，POVPC增加了Klf4与Col8a1基因启动子的结合。此外，在Klf4或VIII型胶原蛋白敲除的VSMC中，POVPC诱导的VSMC迁移显著减少。鉴于有证据表明OxPLs存在于动脉粥样硬化病变中，有意思的是，OxPL诱导的VSMC表型变化可能至少部分通过细胞外基质组成的变化促进动脉粥样硬化的发病。

PubMed免责声明

数字

图1
图1
实时定量RT-PCR测定OxPLs诱导培养大鼠主动脉平滑肌内源性VIII型胶原的表达。用OxLDL（A）、OxPAPC（B）、POVPC或PGPC（C）和PEIPC（D）或载体治疗VSMC 24小时#*P（P）<0.05; **P（P）与车辆相比<0.01。
图2
图2
POVPC诱导培养的大鼠主动脉平滑肌中VIII型胶原蛋白的合成和分泌。对于Western blot分析，用POVPC（10μg/mL）（P）或溶媒（V）48至72小时。收集并浓缩条件培养基，20μg总蛋白在7.5%聚丙烯酰胺凝胶（a）上的非变性条件下电泳或在10%凝胶（B）上的变性条件下分离。用豚鼠多克隆抗体（B）或鼠单克隆抗体（a）检测牛VIII型胶原蛋白。为了验证抗VIII型胶原抗体的特异性，将培养的VSMC转染第8a1列siRNA寡核苷酸（sicol8#3）或对照siRNA（siControl），然后POVPC或载体治疗24小时（C）。的表达式第8a1列通过实时定量RT-PCR检测基因*P（P）与车辆相比<0.05。用siRNA转染并用任一POVPC（10μg/mL）（P）或载体（V）48小时后，通过用针对牛VIII型胶原的豚鼠多克隆抗体（D）探测Western blots，在VSMC条件培养基中检测到VIII型胶原蛋白。
图3
图3
基于Pluronic凝胶的POVPC递送增加了体内内源性VIII型胶原基因的表达。含有POVPC（30μg） 将orvehicle涂抹于大鼠右侧颈总动脉外膜表面。从POVPC治疗、车用治疗和未治疗动物的右侧和左侧天然颈动脉（A）、肝脏（B）和主动脉（C）中分离出总RNA。的表达式第8a1列通过实时定量RT-PCR检测基因*P（P）与车辆相比<0.05。
图4
图4
Klf4是POVPC诱导大鼠主动脉平滑肌细胞VIII型胶原基因表达所必需的。A、 转染VSMCsKlf4公司siRNA寡核苷酸（siKLF4）或对照siRNA（siControl），然后是POVPC（10μg/mL）或溶媒处理24小时。B、 从主动脉中分离出VSMCKlf4公司-用表达Crerecombinase（Klf4 KO）的腺病毒或对照腺病毒感染小鼠。KO和对照组VSMC用POVPC或载体治疗24小时。的表达式第8a1列通过实时定量RT-PCR检测基因#*P（P）与车辆相比<0.05**P（P）与车辆相比<0.01。对于Western blot分析，用对照siRNA（siControl）、siSp1或siKLF4转染大鼠主动脉平滑肌细胞并用POVPC（10μ在变性条件下，在10%聚丙烯酰胺凝胶（C）上分馏48小时。用抗牛VIII型胶原的豚鼠多克隆抗体检测VIII型胶原蛋白。
图5
图5
POVPC诱导的Klf4公司和第8a1列这些基因至少部分由Sp1介导。将培养的大鼠主动脉平滑肌细胞转染转速1siRNA寡核苷酸（siSp1）或对照siRNA（siControl），然后POVPC或载体治疗24小时。的表达式第8a1列（A） 和Klf4公司（B） 通过实时定量RT-PCR检测基因*P（P）<0.05; **P（P）与车辆相比<0.01。
图6
图6
Klf4与第8a1列通过ChIP测定POVPC处理的大鼠主动脉SMC和大鼠颈动脉段体内完整染色质中的基因。A、 用POVPC（10μg/mL）或溶媒24小时。Klf4与第8a1列通过ChIP分析测定基因。B、 Klf4与第8a1列在大鼠颈动脉应用含有30μg POVPC或车辆8小时。主动脉作为对照。用抗Klf4抗体（Klf4 AB）或无抗体（无抗体）沉淀的染色质进行实时RT-PCR。结果被归一化为总输入，并显示为车辆的倍增*P（P）<0.05.
图7
图7
POVPC通过Klf4和VIII型胶原依赖机制刺激VSMC迁移。Boyden小室试验用于测量VSMC通过8-μm聚碳酸酯膜。A、 无血清培养基（150-μL体积），含0.1%BSA，5μ将g/mL纤维连接蛋白和指示浓度的POVPC、PEIPC或PGPC添加到底部室中。大鼠主动脉平滑肌细胞悬液（1×105细胞/mL，150μ五十） 在含有0.1%BSA的无血清培养基中添加到上部微孔中。将培养箱在37°C下培养18小时。数据表示随机选择的8到10个高功率场的平均值±SEM*P（P）<0.05 POVPC与车辆#P（P）<0.05 PEIPC与车辆。B、 用特异性siRNA转染大鼠主动脉平滑肌细胞第8a1列（sicoll8#3），Klf4公司（siKLF4）或对照siRNA靶向荧光素酶（sicontr）并进行迁移分析，如图7A图例所示*P（P）与车辆相比<0.05。通过I型胶原覆盖膜进行迁移试验，以比较小鼠主动脉的迁移Klf4公司KO与对照细胞（C）和小鼠主动脉VIII型胶原KO与WT细胞（D）。
图8
图8
内源性mRNA水平第8a1列和Klf4公司主动脉增加载脂蛋白E与WT小鼠相比，西式饮食13周后KO。从胸主动脉或肝脏中分离出总RNA作为对照。的表达式第8a1列（A） ，Klf4公司（B） 实时RT-PCR检测SM-MHC（C）和心肌蛋白（D）mRNA。数值代表每组5只动物的平均值±SEM*P（P）与车辆相比<0.05。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Berliner J、Leitinger N、Watson A、Huber J、Fogelman A、Navab M。动脉粥样硬化中的氧化脂质：形成、破坏和作用。血栓止血。1997年；78:195–199.-公共医学
    1. Chatterjee S.氧化人血浆低密度脂蛋白在动脉粥样硬化中的作用——对平滑肌细胞增殖的影响。分子细胞生物化学。1992;111:143–147。-公共医学
    1. Furnkranz A、Schober A、Bochkov VN、Bashtrykov P、Kronke G、Kadl A、Binder BR、Weber C、Leitinger N。氧化磷脂在小鼠动脉中引发动脉粥样硬化炎症。动脉硬化肌瘤血管生物学。2005;25:633–638.-公共医学
    1. Subbanagounder G，Leitinger N，Schwenke DC，Wong JW，Lee H，Rizza C，Watson A，Faul K，Fogelman A，Berliner J.氧化磷脂生物活性的决定因素：sn-2位置的特定氧化脂肪酰基。动脉硬化肌瘤血管生物学。2000年；20:2248–2254.-公共医学
    1. Watson AD、Leitinger N、Navab M、Faul KF、Horkko S、Witztum JL、Palinski W、Schwenke D、Salomon RG、Sha W、Subbanagounder G、Fogelman AM、Berliner JA。通过质谱对诱导单核细胞/内皮细胞相互作用的最低氧化低密度脂蛋白中氧化磷脂的结构鉴定及其在体内存在的证据。生物化学杂志。1997年；272:13597–13607.-公共医学

出版物类型

MeSH术语