Nucleotide sequence requirements at the 5' end of the influenza A virus M RNA segment for efficient virus replication

doi:10.1128/JVI.02513-08

.2009年4月；83(7):3384-8.

doi:10.1128/JVI.02513-08。 Epub 2009年1月21日。

甲型流感病毒M RNA片段5'末端的核苷酸序列要求，用于有效的病毒复制

小泽真本¹, 前田俊科, 岩手清子-本本, 渡边信治, Hideo Goto先生, 大辅和本, 川冈义弘

附属公司

PMID： 19158245
预防性维修识别码：第655591页
内政部： 10.1128/JVI.02513-08

甲型流感病毒M RNA片段5'末端的核苷酸序列要求，用于有效的病毒复制

小泽真本等。 J维罗尔. 2009年4月.

.2009年4月；83(7):3384-8.

doi:10.128/JVI.02513-08。 Epub 2009年1月21日。

作者

小泽真本¹, 前田俊科, 岩手清子-本本, 渡边信治, Hideo Goto先生, 大辅和本, 川冈义弘

隶属关系

¹日本东京大学微生物与免疫学系病毒学系，东京都Minato-ku Shirokanedai，东京108-8639。

PMID： 19158245
预防性维修识别码：项目经理2655591
内政部： 10.1128/JVI.02513-08

摘要

甲型流感病毒基因组被包装成病毒的机制尚不完全清楚。除M片段外，病毒RNA片段包装所需的编码区和非编码区已经确定。在这里，我们通过将报告病毒RNA并入病毒，并通过产生在M段区域具有突变的病毒，来描绘M段区域。我们发现，与其他片段一样，M片段编码区对病毒结合至关重要，编码区5'端的核苷酸长度而非核苷酸序列很重要。

PubMed免责声明

数字

**图1。**
鉴定M vRNA 3′或5′编码区中对基因组包装和病毒形成重要的结构域。（A）测试M vRNAs的示意图。括号中的数字表示M编码区的核苷酸编号。非编码区和编码区分别用灰色和绿色条表示，而虚线表示从M编码区删除的核苷酸。GFP开放阅读框（绿色条）被插入到M开放阅读框中。所有突变体都显示为负向。（B）基因组包装和病毒形成的效率。为了产生具有面板A中给出的测试M vRNAs的WSN菌株感染性VLP，将每个测试M vRNA的质粒转染到293T细胞中，其中7个质粒用于剩余的vRNA，6个质粒用于表达PB2、PB1、PA、NP、M1和M2。转染48小时后，将上清液转移至MDCK细胞。测定感染后24小时WSN病毒抗原表达（代表感染性VLP的总数）和GFP表达（代表具有试验M vRNA的VLP的数量）细胞的数量，将M vRNA-阳性VLP的数量除以VLP的总数，计算每个测试M vRNA到VLP的封装效率。带有和不带测试M vRNAs的VLP数量分别以绿色和灰色条显示。所显示的结果代表了三个独立的实验。

**图2。**
突变M vRNAs的构建及其在病毒中的包装效率。（A）野生型和突变型M vRNAs示意图。显示了野生型、Mstop、Mrdm、Mstop-cc、M-27U、Mdel和Mscr-1、-2和-3 vRNAs的5′端（位置972至1013）的核苷酸序列。为了构建Mrdm-vRNA质粒库，我们以Mdel-vRNA质粒为模板，以含有随机核苷酸的引物在979-1007位进行了反向PCR。使用自连接的PCR产物转化*大肠杆菌*DH5α，导致5.0×10^三转化者。InvivoGen小干扰RNA向导(http://www.sirnawird.com/scramdd.php)用于创建Mscr-1、-2和-3 vRNA的随机序列。非编码区域和编码区域分别用灰色和黑色表示。来自真实序列的终止密码子和改变的核苷酸分别以红色和蓝色显示。请注意，除了野生型M vRNA外，所列M vRNA上编码的M2氨基酸序列是相同的。（B）野生型和突变型M vRNAs的转录/复制效率。将一个用于M vRNA合成的RNA聚合酶I驱动质粒与四个用于表达PB2、PB1、PA和NP的质粒一起转染到293T细胞中，这四个质粒对于vRNA转录和复制是必要的和充分的。转染后2小时，通过Western blotting分析细胞裂解液中M1、M2和β-肌动蛋白（作为内部对照）的表达，并使用针对每个蛋白的单克隆抗体进行分析。所示结果代表了三个独立的实验。

**图3。**
在其M vRNAs中具有扰乱序列的突变病毒的特征。（A） Mstop和Mscr-1、-2和-3病毒的生长比较。MDCK细胞感染每种病毒的感染倍数为0.01。感染后指定时间采集的培养上清液在MDCK细胞上进行斑块分析。误差条表示三个独立实验的标准偏差。（B）将HA、NP和M vRNAs的效率打包为野生型、Mstop和Mscr-1、-2和-3病毒。MDCK细胞被指示的病毒感染，感染倍数较低（<0.1）。感染后12小时，用4%多聚甲醛在磷酸盐缓冲液（PBS）中固定30分钟，用抗M1、-NP或-HA单克隆抗体鉴定M1、NP或HA-表达细胞；用抗WSN病毒多克隆抗体鉴定病毒感染的细胞。通过将单克隆抗体阳性细胞的数量（分别代表具有M、NP或HA vRNA的感染性病毒的数量）除以多克隆抗体阳性的细胞的数量来确定每个vRNA的包装效率（代表所有感染性病毒数量）。误差条表示三个独立实验的标准偏差。（C）具有野生型、Mstop、Mdel和Mscr-1、-2和-3病毒的感染性病毒的形成效率。所示病毒是通过反向遗传学在293T细胞中产生的，使用的是NA vRNA质粒，该质粒在C末端具有从赖氨酸到精氨酸的突变。用转染病毒感染MDCK细胞并用4%多聚甲醛固定在PBS中，用WSN病毒抗血清鉴定病毒感染细胞。误差条表示三个独立实验的标准偏差。

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[4] Dos Santos Afonso，E.、N.Escriou、I.Leclercq、S.van der Werf和N.Naffakh。2005年。为了产生表达PB2融合蛋白的重组甲型流感病毒，需要保存与PB2片段5′端编码区和非编码区重叠的包装信号。病毒学34134-46。-公共医学

[5] Fujii，K.、Y.Fujii、T.Noda、Y.Muramoto、T.Watanabe、A.Takada、H.Goto、T.Horimoto和Y.Kawaoka。2005.甲型流感病毒NS片段的编码区和片段特异性非编码区对其有效并入病毒的重要性。J.维罗尔。793766-3774.-项目管理咨询公司-公共医学

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[7] Fujii，Y.、H.Goto、T.Watanabe、T.Yoshida和Y.Kawaoka。2003年流感病毒RNA片段选择性并入病毒。程序。国家。阿卡德。科学。美国1002002-2007。-项目管理咨询公司-公共医学

[8] Fujii，Y.、H.Goto、T.Watanabe、T.Yoshida和Y.Kawaoka。2003年流感病毒RNA片段选择性并入病毒。程序。国家。阿卡德。科学。美国1002002-2007。-项目管理咨询公司-公共医学

[9] Gog，J.R.、S.Afonso Edos、R.M.Dalton、I.Leclercq、L.Tiley、D.Elton、J.C.von Kirchbach、N.Naffah、N.Escriou和P.Digard。2007年。甲型流感病毒基因组中的密码子保护定义了RNA包装信号。核酸研究351897-1907。-项目管理咨询公司-公共医学

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