跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

点政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

网站是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2009年3月；296（3）:C422-32。
doi:10.11152/ajpcell.00381.2008。 Epub 2008年12月31日。

Nox4 NADPH氧化酶介导TNF-α诱导的脑血管内皮细胞氧化应激和凋亡

什亚马利·巴苏里 1, 苏霍伊·巴塔查里亚, 查尔斯·莱夫勒, 海伦娜·帕芬诺娃
附属公司

Nox4 NADPH氧化酶介导TNF-α诱导的脑血管内皮细胞氧化应激和凋亡

什亚马利·巴苏里等。 美国生理学杂志细胞生理学. 2009年3月.

摘要

炎症性脑疾病可能会损害脑血管内皮，导致脑血流失调。促炎细胞因子TNF-α导致新生猪脑微血管内皮细胞（CMVEC）的氧化应激和凋亡。我们研究了活性氧的主要细胞来源对内皮炎症反应的贡献。一氧化氮合酶和黄嘌呤氧化酶抑制剂（N（omega）-硝基-l-精氨酸和别嘌呤醇）没有作用，而线粒体电子传递抑制剂（CCCP、2-噻吩酰基三氟丙酮和鱼藤酮）减弱了TNF-α诱导的超氧化物（O（2）（*-））和细胞凋亡。NADPH氧化酶抑制剂（二苯碘鎓和罗布麻素）极大地减少了TNF-α诱发的O（2）（*-）生成和细胞凋亡。TNF-α快速增加CMVEC中NADPH氧化酶的活性。Nox4是NADPH氧化酶的细胞特异性催化亚单位，在CMVEC中高度表达，有助于基础O（2）（*-）的生成，并解释了TNF-α引起的氧化应激爆发。Nox4小干扰RNA（而非Nox2）的敲除可防止CMVEC中TNF-α引起的氧化应激和凋亡。Nox4与血红素加氧酶（HO）的组成亚型HO-2共定位，HO-2对内皮细胞抵抗TNF-α毒性至关重要。HO活性产物胆红素和一氧化碳（CO，作为一种CO释放分子，CORM-A1）抑制了Nox4生成的O（2）（*-）和TNF-α刺激引起的细胞凋亡。我们得出结论，Nox4是炎症和TNF-α诱导的氧化应激导致脑内皮细胞凋亡的主要来源。CO和胆红素通过抑制Nox4活性和/或O（2）（*-）清除来对抗TNF-α诱导的氧化应激，再加上脑血管内皮细胞内HO-2和Nox4的紧密细胞内分隔，可能有助于HO-2细胞对炎症性脑血管病的保护。

PubMed免责声明

数字

图1。
图1。
活性氧（ROS）抑制剂对TNF-α诱导O的影响2•−脑微血管内皮细胞（CMVEC）的生成。用TNF-α（15 ng/ml，1 h）处理新生仔猪的CMVEC，在不含或含有二苯基碘铵（DPI；5μM）、载脂蛋白（Apo，500μM），NSC-23766（NSC，50μM）和CCCP（5μM，N个ω-硝基-我-精氨酸(我-国家核管理局；0.5 mM）或别嘌呤醇（Allo，50μM）。O（运行）2•−通过二氢乙硫磷（DHE）产生的乙硫磷荧光测量产量，并用基线对照的百分比表示。数据代表11个独立实验的平均值。数值为平均值±SE*P（P）与基线控制值相比<0.05†P（P）与单独TNF-α相比，<0.05。
图2。
图2。
ROS抑制剂对肿瘤坏死因子-α诱导的CMVEC caspase-3活化的影响。在没有或存在NADPH氧化酶抑制剂DPI（5μM）、Apo（500μM）和NSC（50μM）以及线粒体抑制剂CCCP（5μM）和TTFA（5μL）的情况下，用TNF-α（15 ng/ml，3 h）处理新生仔猪的CMVEC。通过形成Caspase-3（17kDa）的活性蛋白组分，免疫检测细胞裂解液中的Caspase-2活性。作为负荷控制，重制印迹肌动蛋白。A类：代表性污点。B类：密度测定(n个=3个独立实验）。数值为平均值±SE*P（P）与对照值相比<0.05†P（P）与单独TNF-α相比，<0.05。
图3。
图3。
ROS抑制剂对TNF-α诱导CMVEC细胞凋亡的影响。在不含或含有DPI（5μM）、Apo（500μM）和Rac1抑制剂NSC（50μM）的情况下，用TNF-α（15 ng/ml，3 h）处理新生仔猪的CMVEC。A类：DNA片段。B类：细胞分离。数据表示4个独立实验的平均值。数值为平均值±SE*P（P）与基线控制值相比<0.05†P（P）与单独TNF-α相比，<0.05。
图4。
图4。
CMVEC中NADPH氧化酶亚基的定位。第4个(A类)，第22页凤凰（phox）(B类)和第47页凤凰（phox）(C类)在融合静止CMVEC中通过免疫荧光观察。
图5。
图5。
CMVEC中Nox4和Nox2的小干扰RNA（siRNA）敲除。用对照siRNA、Nox4 siRNA转染CMVEC(A类–C类)，或Nox2 siRNA(天和E类).A类,B类,天、和E类：通过免疫印迹检测Nox4和Nox2。A类和天：代表性斑点。B类和E类：密度测定(n个=3个独立转染*P（P）与对照组相比<0.05）。C类：转染对照siRNA或Nox4 siRNA的CMVEC中的Nox4免疫荧光：用FITC-结合二级抗体（绿色）观察Nox4；用罗丹明-球蛋白（红色）观察F-actin。
图6。
图6。
TNF-α对O的影响2•−Nox4 siRNA和Nox2 siRNA-敲低CMVEC的产生。用TNF-α（15 ng/ml，1 h）处理CMVEC（未转染并转染对照siRNA、Nox4 siRNA或Nox2 siRNA）。O（运行）2•−通过DHE产生的乙炔荧光测量产量，并以基线对照的百分比表示。数值为平均值±SE*P（P）与基线对照值相比<0.05。
图7。
图7。
TNF-α对Nox4敲低CMVEC中caspase-3活性的影响。在没有或存在DPI（5μM）、Apo（500μM）或聚乙二醇（PEG）-SOD（1000单位）的情况下，用TNF-α（15 ng/ml，3 h）处理转染对照siRNA或Nox4 siRNA的新生仔猪的CMVEC。免疫印迹法检测caspase-3活性片段（17kDa）并归一化为肌动蛋白。A类：代表性污点。B类：密度测定(n个=2个独立实验）。数值为平均值±SE*P（P）与对照值相比<0.05†P（P）与单独TNF-α相比，<0.05。
图8。
图8。
TNF-α对Nox4-siRNA-和Nox2-siRNA-敲低CMVEC中DNA片段的影响。在没有或存在DPI（5μM）、Apo（500μM）或PEG-SOD（1000单位）的情况下，用TNF-α（15 ng/ml，3 h）处理CMVEC（未转染或转染对照siRNA、Nox4 siRNA或Nox2 siRNA）。ELISA检测DNA片段。数值为平均值±SE(n个=2个独立实验，一式三份）*P（P）与基线控制值相比<0.05†P（P）与单独TNF-α相比，<0.05。
图9。
图9。
CMVEC中Nox4和血红素加氧酶亚型2（HO-2）的克隆化。静态CMVEC免疫染色Nox4（绿色荧光）和HO-2（红色荧光）；细胞核用4′，6-二氨基-2-苯基吲哚（DAPI；蓝色）染色。
图10。
图10。
胆红素（BR）和CO释放分子CORM-A1（CORM）对TNF-α诱导的CMVEC凋亡的保护作用。在不存在或存在BR（1μM）或CORM（50μM）的情况下，用TNF-α（15 ng/ml，3小时）处理新生仔猪的汇合静止CMVEC。细胞凋亡由DNA片段决定。数值为平均值±SE*P（P）与基线控制值相比<0.05†P（P）与单独TNF-α相比，<0.05。
图11。
图11。
BR和CO释放分子（CORM-A1）对TNF-α诱导的NADPH氧化酶衍生O的影响2•−CMVEC的生产。在不存在或存在BR（1μM）、CORM（50μM），Apo（500μM）和DPI（5μM）的情况下，用TNF-α（15 ng/ml，1 h）处理分馏的融合静止CMVEC。NADPH氧化酶活性测定为O2•−NADPH（100μM）的生成量通过增强的荧光素发光测量，归一化为蛋白质量，并表示为基线对照的百分比。数值为平均值±SE*P（P）与对照值相比<0.05†P（P）与单独TNF-α相比，<0.05。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“引用者”文章

工具书类

    1. Abraham NG，Kappas A.血红素加氧酶的药理和临床方面。药理学修订版60:79-1272008。-公共医学
    1. Abramov AY，Jacobson J，Wientjes F，Hothersall J，Canevari L，Duchen MR哺乳动物星形胶质细胞中NADPH氧化酶的表达和调节。《神经科学杂志》40:9176-9184，2005年。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Ago T、Kitazono T、Ooboshi H、Iyama T、Han YH、Takada J、Wakisaka M、Ibayashi S、Utsumi H、Iida M.Nox4是内皮NAD（P）H氧化酶的主要催化成分。发行量109:227–2332004。-公共医学
    1. 巴龙足球俱乐部、阿文·B、怀特·RF、米勒·A、韦伯·CL、威利特·RN、莱斯科·PG、费尔斯坦·GZ。肿瘤坏死因子-α。局部缺血性脑损伤的介质。中风28:1233-12441997年。-公共医学
    1. Basuroy S、Bhattacharya S、Tcheranova D、Qu Y、Regan RF、Leffler CW、Parfenova H.HO-2对脑血管内皮细胞中TNF-α引起的氧化应激和凋亡提供内源性保护。美国生理学杂志《细胞生理学》291:C897–C9082006。-公共医学

出版物类型

MeSH术语