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。2009年1月23日；284(4):1982-9.
doi:10.1074/jbc。M807651200。 Epub 2008年11月10日。

妊娠期胆碱供应调节大鼠胎肝和胎脑中组蛋白H3甲基化、组蛋白甲基转移酶G9a（Kmt1c）和Suv39h1（Kmt1a）的表达及其基因的DNA甲基化

杰西卡·戴维森 1, 蒂凡尼·J·梅洛特, 维塞拉·P·科瓦切娃, Jan Krzysztof Blusztajn公司
附属公司

妊娠期胆碱供应调节大鼠胎肝和胎脑中组蛋白H3甲基化、组蛋白甲基转移酶G9a（Kmt1c）和Suv39h1（Kmt1a）的表达及其基因的DNA甲基化

杰西卡·戴维森等。 生物化学杂志。 。

摘要

胆碱是一种必需的营养素，通过其代谢产物甜菜碱，作为胎儿发育中用于建立表观遗传DNA和组蛋白甲基化模式的甲基的供体。在胚胎期（E）11-17天，大鼠补充胆碱可以提高成年期的记忆能力，防止与年龄相关的记忆衰退，而胆碱缺乏会损害某些认知功能。我们之前曾报道，胆碱缺乏胎儿大脑和肝脏中的全局和基因特异性DNA甲基化增加，这些DNA甲基化变化与DNA甲基转移酶Dnmt1表达的明显代偿性上调相关。在当前的研究中，在E11-17期间，给怀孕大鼠喂食含有不同数量胆碱（mmol/kg：0（缺乏）、8（对照）或36（补充））的饮食，并在E17上评估肝和额叶皮质的组蛋白甲基化指数。组蛋白甲基转移酶G9a和Suv39h1的mRNA和蛋白表达与胆碱的有效性直接相关。G9a和Suv39h1基因的DNA甲基化因胆碱缺乏而上调，表明这些酶的表达受其基因甲基化的负控制。胆碱补充上调了转录抑制染色质标签H3K9Me2和H3K27Me3的水平，而与活性启动子相关的H3K4Me2的水平在胆碱缺乏大鼠中最高。这些数据表明，母亲在怀孕期间的胆碱供应会改变胎儿组蛋白和DNA甲基化，这表明一种一致的表观基因组机制有助于子宫内不同胆碱摄入的长期发育影响。

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数字

图1。
图1。
肝脏中的H3K9Me2(A类)和皮层(B类).H3K9Me2型通过免疫印迹分析E17上的蛋白质水平，并将其归一化为总量组蛋白3（参见印迹嵌件). 参见“结果”了解统计数据。条形和污点标签：S公司，补充胆碱；C类，控制；D类，胆碱缺乏。
图2。
图2。
肝脏中的H3K27Me3(A类)和皮层(B类).H3K27Me3型通过免疫印迹分析E17上的蛋白质水平，并将其归一化为总量组蛋白3（参见印迹嵌件). 参见“结果”了解统计数据。条形和污点标签：S公司，补充胆碱；C类，控制；D类，胆碱缺乏。
图3。
图3。
肝脏中的H3K4Me2。E17肝脏中H3K4Me2蛋白水平为通过免疫印迹分析并标准化为总组蛋白3（参见印迹嵌件). 有关统计信息，请参阅“结果”。棒材和螺栓标签：S公司，补充胆碱；C类，控制；D类，胆碱缺乏。
图4。
图4。
G9a在肝脏和皮层。 A类，RNA是从E17胚胎的肝脏并用于RT-PCRG9a公司并标准化为β-肌动蛋白（参见中的示例凝胶嵌入物).B类，G9A通过免疫印迹分析E17肝脏中的蛋白质水平，并将其归一化为β-肌动蛋白（参见印迹嵌件).C类，RNA是从E17胚胎皮层分离并用于RT-PCRG9a公司并归一化为β-肌动蛋白（参见凝胶嵌入物).D类用免疫印迹和归一化为β-肌动蛋白水平（参见印迹嵌件).有关统计信息，请参阅“结果”。条形标签：S公司，胆碱补充；C类，控件；D类，胆碱缺乏。
图5。
图5。
Suv39h1存在于肝脏和皮层。 A类，RNA是从E17胚胎的肝脏，并用于Suv39h1型和归一化为β-肌动蛋白（参见中的示例凝胶嵌入物).B类免疫印迹分析E17肝脏中SUV39H1蛋白水平并归一化为β-肌动蛋白（参见印迹嵌件).C类，从E17胚胎皮层中分离出RNA，用于的RT-PCRSuv39h1号机组并归一化为β-肌动蛋白（请参见中的示例凝胶嵌入物).D类E17中SUV39H1蛋白质水平通过免疫印迹分析大脑皮层，并将其归一化为β-肌动蛋白（参见印迹嵌件). 查看“结果”用于统计。条形标签：S公司，补充胆碱；C类，控制；D类，胆碱缺乏。
图6。
图6。
甲基化特异PCR(MSP公司)分析G9a公司和Suv39h1型启动子CpG岛。 A–C，基因组DNA从E17肝脏分离(A类和B类)或皮层(C类)是用亚硫酸氢钠处理并用甲基化特异性PCR进行分析。这个插图显示了使用引物获得的PCR产物的实例旨在放大甲基化(米)和非甲基化(u个)DNA模板。有关统计信息，请参阅“结果”。棒材和PCR产品标签：S公司，补充胆碱；C类，控制；D类，胆碱缺乏。
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