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.2009:507:305-23.
doi:10.1007/978-1-59745-522-022。

甲基化特异PCR

附属公司

甲基化特异PCR

朱利安·D·F·利切西等。 摩尔生物法. 2009.

摘要

甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)是一种有助于检测细胞系和临床样本(包括新鲜/冷冻组织)中CpG岛启动子超甲基化的技术。MSP区分甲基化胞嘧啶和非甲基化胞嘧啶的能力取决于亚硫酸氢钠对DNA的处理,该处理保留胞嘧啶的甲基化标记,以及使用仅与先前的甲基化或非甲基化等位基因互补的引物组特异性扩增该修饰的DNA。嵌套质谱分析法(MN-SP)是一种替代方法,它克服了MSP的局限性,特别是在分析起始DNA质量/数量低的样品(例如石蜡包埋样品)时。MN-MSP包括使用对单个(MN-MSP)或多个(多重MN-MSP)基因的甲基化状态无偏见的引物进行第一轮扩增,然后进行常规MSP。虽然MSP和NM-MSP是简单的技术,可以很容易地纳入大多数分子生物学实验室,但准确确定基因启动子甲基化状态的能力在很大程度上取决于MSP引物的仔细设计以及本章概述的其他步骤。

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