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.2008;3(11):1718-28.
doi:10.1038/nprot.2008.171。

快速Percoll梯度法制备突触体

附属公司

快速Percoll梯度法制备突触体

彼得·伦克利等人。 Nat协议. 2008.

摘要

新鲜脑组织在等渗介质中的均质化会剪切质膜,导致神经末梢与其轴突和突触后连接分离。然后,神经末梢膜重新密封,形成突触体。这里描述的非连续Percoll梯度程序旨在在最短时间内从脑匀浆中分离突触体,以便进行功能实验。使用中速离心机分离突触体,同时保持等张条件并尽量减少机械损伤的再悬浮步骤。该方案在速度和产生相对均匀的突触体方面优于其他程序,最大限度地减少了突触和胶质质膜以及突触体外线粒体的存在。纯化的突触体是可行的,能够非常有效地吸收和释放神经递质。突触体的典型产量为每克大鼠大脑中2.5到4毫克突触体蛋白。从大脑均质到从Percoll梯度收集突触体悬浮液,该过程大约需要1小时。

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