跳到主页面内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2009年1月；49(1):185-94.
doi:10.1002/hep.22589。

腺苷通过抑制Rho诱导肌动蛋白应激纤维的损失并抑制肝星状细胞的收缩

穆罕默德·阿索海尔 1, Ardeshir Z Hashmi公司, 怀尔·哈基姆, 渡边Azuma, 亚历山大·齐普里奇, 罗伯托·格罗兹曼, 乔纳森·德拉诺夫, 娜塔莉·托罗, Wajahat Z Mehal公司
附属公司

腺苷通过Rho抑制诱导肝星状细胞肌动蛋白应激纤维丢失和收缩

穆罕默德·阿索海尔等人。 肝病学. 2009年1月.

摘要

Rho/ROCK通路在分化的肝星状细胞（HSC）中被激活，是肌动蛋白应激纤维组装、收缩性和趋化性所必需的。尽管该途径在HSC生物学中具有重要意义，但尚不清楚HSC中Rho/ROCK途径的生理抑制剂。我们证明腺苷诱导LX-2细胞系和原代HSC中肌动蛋白应激纤维的丢失，其方式与Rho/ROCK抑制无法区分。肌动蛋白应力纤维的损失通过A2a受体在高于10μM的腺苷浓度下发生，腺苷浓度存在于组织损伤期间。我们进一步证明肌动蛋白应激纤维的丢失是由于环磷酸腺苷、蛋白激酶a介导的途径导致Rho抑制所致。此外，组成活性Rho结构可以抑制腺苷诱导肌动蛋白应激纤维丢失的能力。肌动蛋白应激纤维是HSC收缩所必需的，我们证明腺苷抑制内皮素-1和溶血磷脂酸介导的HSC收缩。我们认为腺苷是HSC中Rho途径的生理抑制剂，具有功能性后果，包括HSC收缩功能的丧失。

PubMed免责声明

利益冲突声明

潜在的利益冲突：无需报告。

数字

图1
图1
腺苷诱导LX-2和原发性HSC中肌动蛋白应激纤维的星状化和丢失。（A） 相衬下的LX-2细胞呈现典型的扁平立方结构。暴露于（B）腺苷（10）30分钟后μM） 或（C）NECA（10μM） 细胞呈圆形并形成突起，维持细胞间的接触。（D） LX-2细胞染色显示F-actin（绿色）和细胞核（Topro 3蓝色），显示扁平形态和肌动蛋白应力纤维。暴露于（E）腺苷或（F）NECA 30分钟后，细胞失去肌动蛋白应激纤维，向上聚集，形成F-actin阳性投射。（G） 原代大鼠HSC染色显示F-actin（绿色）和细胞核（Topro 3蓝色），显示扁平形态和肌动蛋白应激纤维。暴露于腺苷（H）或NECA（I）一小时后，细胞失去肌动蛋白应激纤维，向上聚集，形成F-actin阳性投射。
图2
图2
HSC星状化在腺苷的病理生理浓度下发生，并通过A2aR信号传导发生。（A） 添加腺苷后1小时LX-2细胞中星状化的剂量-反应曲线表明，在腺苷浓度介于1到10之间时出现最大星状化μM.（B）通过不可水解的腺苷类似物NECA（添加NECA后1小时）在LX-2细胞中复制恒星化，表明HSC恒星化不需要腺苷代谢产物。（C） 受体亚型特异性拮抗剂表明A2aR在原发性HSC中发生星状化的必要性。添加受体拮抗剂20分钟，然后添加NECA 1小时。DPCPX（A1受体拮抗剂）1μM、 MRS1706（A2b拮抗剂）10 nM，MRS1523（A3拮抗剂）5μM不能拮抗腺苷（10μM） 。仅Zm241385（A2a受体阻滞剂）1μM和8-PST（泛受体拮抗剂）1μM和所有四种拮抗剂都阻断了腺苷诱导星状细胞生成的能力(*P（P）< 0.05).
图3
图3
腺苷诱导的HSC星状化通过cAMP、PKA介导的途径发生。（A） 10岁时用NECA（腺苷激动剂）和forskolin处理LX-2细胞μForskolin诱导了与NECA相同的星状化，并且是在A2a受体拮抗的情况下诱导的。（B） LX2和原发性HSC中的F-actin染色表明，肌动蛋白应力纤维在forskolin的作用下丢失，与NECA的作用无明显区别。（C） 用NECA、腺苷或forskolin处理LX-2细胞，测定cAMP水平，证明细胞内cAMP升高，NECA组使用A2a受体拮抗剂可部分降低cAMP。（D） 用空间PKA抑制剂ST-H31（25μM持续4小时）和NECA（10μM） 添加了1小时。PKA拮抗剂对形态学无影响，但显著抑制NECA诱导的HSC星状化。
图4
图4
NECA抑制RhoA，NECA诱导的星状化依赖于RhoA抑制。（A） 培养基中的原代HSC具有RhoA活性，如RhoA下拉分析（对照通道）所示。接触NECA（10μM） 导致RhoA活性在15分钟内丧失，这在30分钟内非常显著。用A2aR抑制剂进行预处理会阻止NECA降低RhoA的能力。Forskolin复制NECA降低RhoA活性的能力。（B） 在转染有组成活性RhoA（RhoQ63L）的LX-2细胞中，NECA诱导的HSC星状化显著减少。（C） NECA不会导致转染组分活性RhoA的LX-2细胞中肌动蛋白应激纤维的丢失。
图5
图5
NECA抑制ET-1和LPA诱导的原发性HSC收缩。（A） 添加血管活性物质6小时后拍摄水合胶原蛋白晶格。控制，NECA（10μM） 、ET-1（10 nM）和LPA（10μM） 。胶原凝胶与NECA（10）预孵育60分钟后ET-1和LPAμM） 。（B） 在与（A）相同的组中，在塑料上培养的原代HSC中肌动蛋白应力纤维的状态，表明NECA在ET-1和LPA的存在下诱导肌动蛋白应激纤维的丢失。（C） 与缓冲液孵育后的初始表面积相比，胶原蛋白凝胶的平均凝胶表面积百分比，10μM NECA，10 nM ET-1，10μM LPA和10μM NECA 1小时，然后是10 nM ET-1和10μM LPA持续6小时(*,#P（P）< 0.05). （D） 胶原蛋白凝胶暴露于10μM NECA和10 nM ET-1，10μ与暴露于10 nM ET-1和10μ仅M LPA(*,#P（P）< 0.05). （E） NECA降低LPA治疗的原发性HSC的Rho A活性。（F） NECA减少原发性HSC中磷酸化肌球蛋白轻链，减少最早发生在5分钟，20分钟后显著。福斯科林（10μM孵育20分钟）也减少磷酸化肌球蛋白轻链。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Rockey DC、Housset CN、Friedman SL。培养和体内大鼠肝脂肪细胞的激活依赖性收缩性。临床投资杂志。1993;92:1795–1804.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Kawada N，Klein H，Decker K.二十烷酸介导的肝星状细胞收缩性。《生物化学杂志》1992；285:367–371.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Sakamoto M、Ueno T、Kin M、Ohira H、Torimura T、Inuzuka S等。内皮素-1和P物质引起的伊藤细胞收缩。肝病学。1993;18:978–983.-公共医学
    1. Pinzani M、Failli P、Ruocco C、Casini A、Milani S、Baldi E等。脂肪储存细胞作为肝脏特异性周细胞。激动剂刺激的细胞内钙瞬变的空间动力学。临床投资杂志。1992;90:642–646.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Bataller R、Nicolas JM、Gines P、Esteve A、Nieves Gorbig M、Garcia-Ramallo E等。精氨酸加压素诱导培养的人类肝星状细胞收缩并刺激其生长。胃肠病学。1997;113:615–624.-公共医学

出版物类型