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.2008年7月30日;130(30):9638-9.
doi:10.1021/ja802355u。 Epub 2008年7月8日。

靶向荧光探针成像活细胞线粒体中的过氧化氢

附属公司

一种靶向荧光探针,用于对活细胞线粒体中的过氧化氢进行成像

布莱恩·迪金森等。 美国化学会志. .

勘误表in

  • 《美国化学学会杂志》,2008年8月27日;130(34):11561

摘要

我们介绍了线粒体过氧黄1(MitoPY1)的设计、合成和生物应用,这是一种新型的双功能荧光探针,用于成像活细胞线粒体内的过氧化氢水平。MitoPY1结合了化学选择性硼酸盐开关和线粒体靶向磷部分,用于检测定位于细胞线粒体的过氧化氢。对多种哺乳动物细胞类型进行的共焦显微镜和流式细胞术实验表明,MitoPY1可以可视化氧化应激情况下产生的线粒体过氧化氢浓度的局部变化。

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数字

图1
图1
5µM MitoPY1对各种活性氧物种(ROS)的荧光响应。条形图表示添加每个活性氧后0、5、15、30、45和60分钟的相对反应。所示数据适用于10 mM O2、200µM NO和100µM用于所有其他ROS。在25°C下,在pH为7的20 mM HEPES中采集数据,激发λ=503 nm,发射收集在510至750 nm之间。
图2
图2
线粒体H增加的活HeLa细胞的共焦荧光图像2O(运行)2使用MitoPY1可视化的级别。显示的图像表示MitoPY1在510 nm激发时在527–601 nm之间的光学窗口中收集的发射强度。HeLa细胞在37°C下用5µM MitoPY1培养60分钟,并用MitoPY1(a)、MitoTracker Red和Hoechst(叠加,b)和MitoPJ1用MitoTracher Red(叠加,C)成像。HeLa细胞与5µM MitoPY1在37°C和100µM H下孵育60分钟2O(运行)2在最后40分钟内添加,并使用MitoPY1(d)、MitoTracker Red和Hoechst(叠加,e)、Mito PY1和MitoTracher Red(叠加,f)以及带有20µm比例尺的亮场(g)进行成像。HeLa细胞在37°C下用5µM MitoPY1孵育60分钟,并用MitoPY1(h)、MitoTracker Red和Hoechst(叠加,i)和MitoPJ1用MitoTracher Red(叠加,j)成像。HeLa细胞用1mM百草枯孵育24小时,然后洗涤并用5µM MitoPY1在37°C下孵育60分钟,并用MitoPY1(k)、MitoPTracker Red和Hoechst(overlay,l)、MitoPY1和MitoPTracker Red(overlay,M)以及具有20µM比例尺的明场(n)成像。
方案1
方案1
MitoPY1的合成与活化

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