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.2008年5月1日；317(1):59-71.
doi:10.1016/j.ydbio.2008.02.009。 Epub 2008年2月20日。

果蝇fusome的新成分表明它在信号传递和运输中起着新的作用

丹尼尔五世灯塔 1, 迈克尔·巴斯扎克, 艾伦·C·斯普拉德林
附属公司

果蝇fusome的新成分表明它在信号传递和运输中起着新的作用

丹尼尔五世灯塔等。 求文献一篇. .

摘要

融合体在果蝇等昆虫的卵丘前生殖细胞发育中起着重要作用。α-特异蛋白和类加合蛋白Hu-li tai-shoo（Hts）需要维持融合体完整性，同步不对称的囊胚细胞有丝分裂，形成相互连接的16细胞生殖系囊肿，并指定初始细胞为卵母细胞。通过筛选一个蛋白陷阱系文库，我们鉴定了14个新的富含镰刀菌素的蛋白质，包括许多与其特征性囊泡相关的蛋白质。我们的研究表明，梭形体在发育过程中发生变化，并且在雌性体内包含再循环的内体和溶酶体隔室，而在雄性体内没有。大量的融合体成分是可有可无的，因为肌钙蛋白、铁蛋白-1重链或涂鸦的遗传破坏不会改变融合体结构或女性生育能力。相反，rab11需要维持种系干细胞，并维持光谱体的囊泡含量，这表明融合体介导依赖于再循环内体的细胞间信号。

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数字

图1
图1
早期成年雌性（A）和雄性（B）生殖细胞（粉红色）含有分光体和融合体的阶段。（A） 卵巢前部生殖孔。生殖干细胞（GSC）、成囊细胞（CB）和有丝分裂囊肿位于区域1。GSC和CB有一个圆形的、不分枝的融合体，称为光谱体（红色）。GSC通过粘附连接（黄色）与体细胞龛（cap）细胞（绿色）相连。完整的16细胞囊肿具有厚的分支梭形体（红色），当囊肿通过区域2a和2b时，梭形体变薄。（B） 睾丸尖端附近的GSC和年轻囊肿图。与雌性一样，含有分光体的GSC分裂产生带有梭形体的囊肿，梭形体生长并向后移动（右）。星号=中心体。有关更多详细信息，请参见（Fuller和Spradling，2007），该图是从中修改的。
图2
图2
携带基因融合株的卵巢GFP表达。每个面板显示了一个细菌库，如图1所示，并对GFP（绿色）和Hts（洋红色）进行了染色。共同定位区域用白色表示。A、D和N中的插图是Hts（洋红）染色的梭形体和指示蛋白质的抗体（绿色）的图像。M中的插图是方框区域的放大图。所有图像都是z轴的投影，选择z轴可以包括生殖囊肿发育的多个阶段。表达模式（表1）是通过比较多个生殖细胞中分离的通道来确定的，而不是来自这些合并的投影（见图3的例子）。标尺：10μm。
图3
图3
携带基因融合菌株的睾丸GFP表达。每个面板显示一个睾丸尖端，前部位于左侧。（A-F）合并图像，显示睾丸被标记为指示的捕获基因（绿色）和Hts（洋红色）。（A′-C′，E′-F′）GFP通道单独出现在相应的图中。（B-B′）PAR-1在早期的梭形体中表达，但在晚期的梭形体内不表达（箭头所示）。（C-C′）Fer1HCH在雄性融合体中没有富集（箭头）。（D-D′）CG12163（组织蛋白酶F）标记位于融合体附近的大细胞质点，通常位于融合体内的“孔”中（箭头，插图）。（E-E′）PDI与年轻的分支梭形体有关（箭头）。（F-F′）Rtnl1在雄性梭形体中没有特异性富集（箭头）。A-D中的比例尺：25μm。E-F中的比例尺：10μm。
图4
图4
新融合体蛋白的生殖系克隆分析。种系克隆tmod（tmod）PZ00848页（A-B），划线器1（C-D）或Fer1HCH公司d00634号诱导16天后显示（E-F）。（A、C、E）融合体结构不受Tmod、Fer1HCH或Scrib种系损失的影响（比较突变囊肿中的圆圈融合体和指示野生型融合体的箭头）。Hts（洋红色），GFP（绿色）。克隆缺乏GFP表达。仅（A′，C′，E′）Hts通道。（B，D，F）在所有三种测试基因型中，卵泡发育正常。带有突变生殖系的10期卵泡显示，每个卵泡正好包含15个护理细胞（15N）和一个后卵母细胞（OOC）。DNA（蓝色）、GFP（绿色）。A中的标尺：10μm，C中的标杆：50μm
图5
图5
Rab11是卵子发生（A）早期事件所必需的，在克隆诱导7天后解剖Germarium，并对GFP（绿色）和Rab11（洋红色）进行染色。（A′）Rab11通道。拉布11突变体克隆显示Rab11蛋白表达量减少（比较圆形突变体囊肿和指示野生型囊肿的箭头）比例尺：10μm。（B-C）保险丝盒拉布11突变克隆畸形。在克隆诱导12天后，将马赛克生殖细胞解剖，并对其进行克隆标记（绿色）、Alpha spectrin（C中的品红色）或Hts（D中的品黄色）染色。箭头指示突变囊肿中的融合体。（E） 生殖系干细胞半衰期减少拉布11突变体。在克隆诱导后，绘制了含有标记GSC的生殖菌百分比随时间变化的曲线。所有三个测试的GSC克隆拉布11与野生型对照相比，等位基因（d04643，灰色；e03152，红色；E（to）3，蓝色）的半衰期缩短了约4倍(FRT82B型，黑色）和代表性等位基因tmod（tmod）（f04997，金色），划线器（c00019，粉红色），以及Fer1HCH公司（PZ00451，绿色）。
图6
图6
Rab11是融合体中小泡堆积所必需的，但不是粘附结合处E-cadherin积聚所必需的。（A-A′）拉布11在克隆诱导7天后，用E-cadherin抗体标记花叶病菌。E-cadherin（洋红色），GFP（绿色）。箭头表示E-cad定位到GSC/cap单元边界。（B-B′）拉布11克隆诱导9天后，用犰狳抗体标记花叶病菌。箭头指示Arm到GSC/帽细胞边界的定位。犰狳（洋红色），GFP（绿色）。比例尺：10μm（C-E）所示基因型GSC融合体（“分光体”）的电子显微照片。光谱体来自拉布11与对照组相比，突变GSC含有数量大大减少的囊泡结构（D，E）（C.比例尺：1μm）。
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