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.2008年3月19日；28(12):2959-64.
doi:10.1523/JNEUROSCI.3189-07.2008。

聚焦离子束铣削成人脑组织连续切片扫描电镜

格雷厄姆·诺特 1, 赫歇尔·马尔赫曼, 大卫·沃尔, 本·李奇
附属公司

聚焦离子束铣削成人脑组织连续切片扫描电镜

格雷厄姆·诺特等。 神经科学. .
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数字

图1。
图1。
一，树脂块的三维图，显示镓离子束（白色）的排列，镓离子光束平行于块扫描（用双头箭头表示），并磨掉一层树脂，形成一个成像面。然后使用与该垂直面成52°角的电子成像束（灰色）对该表面的嵌入组织进行成像。b条，组织块的扫描电子显微照片，与一用虚线表示铣削区域，如所示c（c）相反。比例尺，20μm。
图2。
图2。
一，研磨成像面的反向对比背散射电子显微照片，以暴露～120×115μm的视野。在这个初始准备阶段，可以在右下角看到少量的“窗帘”。一旦开始串行铣削和成像，就可以消除这种成像伪影。在束流电压为5keV、束流电流为0.40nA、像素驻留时间为10μs的条件下拍摄图像。图像的分辨率为30 nm/像素。在这张图片中，细胞体（cb）和血管（bv）很容易被看到。b条，从成像面拍摄的反向对比背散射扫描电子显微照片，如所示一，表示为cb的神经元细胞体，使用相同的束参数，但分辨率为10nm/像素。通过这些设置，显微镜可以生成清晰显示染色膜和神经膜内许多特征的图像，例如树突（de）。c（c），中白色方框内区域的相同图像b条，它已经被放大，以说明可以通过这些成像参数看到的细节。图像显示轴突隆起（ab）和树突棘头（sp）。比例尺：一，20微米；b条，5微米。
图3。
图3。
一神经膜区域的反向对比背散射电子显微照片，分辨率为4 nm/像素。电子束能量为5keV。图像显示染色膜和细胞间隙之间的对比度有限。这种效果会使图像模糊。b条，成像面部相同区域的反向对比显微照片一。除了电子束能量降低到2keV外，所有成像参数都相同。在这张图像中，薄膜对比度提高，成像深度降低。两幅图像中的箭头均显示有髓轴突。两个面板中的插图都显示了树突棘头（sp），但只有在b条可以看到小泡簇以及突触前和突触后密度（箭头）吗。
图4。
图4。
a–c，每次研磨40 nm树脂时，从成像面上拍摄的连续扫描电子显微照片。束流电压为2keV，束流为0.4nA，驻留时间为100μs。放大倍数设置为4 nm/像素，场宽为8.4μm。在每张图片中，插图显示了一个数字放大的区域，该区域用白色方块表示，表示一个树冠形成不对称突触（白色箭头），一个树突形成对称突触（黑色箭头）。中的虚线c（c）表示从补充电影1（可在网址：www.jneurosci.org作为补充材料）。
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