Characterization of the interaction of phorbol esters with the C1 domain of MRCK (myotonic dystrophy kinase-related Cdc42 binding kinase) alpha/beta

doi:10.1074/jbc.M707463200

.2008年4月18日；283(16):10543-9.

doi:10.1074/jbc。M707463200。 Epub 2008年2月7日。

佛波酯与MRCK（强直性肌营养不良激酶相关Cdc42结合激酶）α/βC1结构域相互作用的表征

宋熙乔（Sung Hee Choi）¹, 加布里埃拉·齐夫拉, 诺埃米·凯迪, 南希·勒温, 约瑟夫·拉扎尔, 永美铺, 维克托·马尔克斯, 彼得·布鲁姆伯格

附属公司

PMID： 18263588
预防性维修识别码： PMC2447637型
内政部： 10.1074/jbc。M707463200型

佛波酯与MRCK（强直性肌营养不良激酶相关Cdc42结合激酶）α/βC1结构域相互作用的表征

宋熙乔（Sung Hee Choi）等。生物化学杂志. 2008.

.2008年4月18日；283(16):10543-9.

doi:10.1074/jbc。M707463200。 Epub 2008年2月7日。

作者

宋熙乔（Sung Hee Choi）¹, 加布里埃拉·齐夫拉, 诺埃米·凯迪, 南希·勒温, 约瑟夫·拉扎尔, 永美铺, 维克多·E·马尔克斯, 彼得·布鲁姆伯格

附属

¹美国马里兰州贝塞斯达国立卫生研究院癌症研究中心癌症生物学和遗传学实验室，邮编：20892。

PMID： 18263588
预防性维修识别码： PMC2447637型
内政部： 10.1074/jbc。M707463200型

摘要

C1结构域通过蛋白激酶C（PKC）和其他一些信号传递蛋白家族（如嵌合蛋白或RasGRP）介导对二酰甘油和佛波酯的识别和随后的信号反应。MRCK（强直性肌营养不良激酶相关的Cdc42结合激酶）是肌营养不良症肌强直蛋白激酶家族的成员，在Cdc42下游发挥作用，包含一个C1结构域，与二酰甘油/佛波酯反应C1结构域具有实质性同源性，并据报道与佛波酯结合。我们在这里描述了两种MRCK亚型α和β的C1结构域与佛波酯的相互作用。MRCK C1结构域与[20-（3）H]佛波醇12，13-丁酸结合，K（d）值分别为10和17nm，反映出与蛋白激酶CδC1b结构域相比弱60-90倍的亲和力。与PKCdelta的C1b结构域结合相反，MRCKα和β的C1结构域结合完全依赖于磷脂酰丝氨酸的存在。配体结合选择性与PKCalpha的C1b结构域相似，与PKCdelta的C1b区域显著相反。在完整细胞中，如结合分析中一样，MRCK C1结构域需要50-100倍的佛波酯浓度才能诱导细胞膜移位。我们得出结论，如果MRCK的C1结构域对佛波酯的反应浓度与调节PKC的浓度相当，那么MRCK结构中的额外结构元素是必要的。

PubMed免责声明

数字

**图1。**
**MRCKα和**β.A类，示意图MRCKα和β的结构。*科科斯群岛*，线圈；*C1类*,富含半胱氨酸结构域；*酸碱度*，pleckstrin同源结构域；中国,柠檬酸同源结构域；*PBD（PBD）*，p21 GTPase结合域。B类,MRCKα和β的C1结构域与PKCα和δ。

**图2。**
**磷脂组成对[^三H] PDBu绑定到MRCK的C1域**α. 特定的绑定[^三H] PDBu（9n个米)在0.1 m处进行米氯化钙₂增加PS:PC浓度（100:0、80:20或20:80，如图所示）(A类)或增加PS在PS:PC中的比例磷脂总量为100、300或1000μg/ml的混合物(B类). 值表示四个独立实验的平均值。瑞典。值由*误差线*在每个个体中实验，最大平均比[^三H] 的PDBu绑定值特异性脂质条件设定为100%，平均特异性[^三H] 其他脂质条件下的PDBu结合值为标准化为该值。因为在B类相同比例的PS并不总是代表最佳结合在这种情况下，最大平均值并不总是100%。*PS（聚苯乙烯）*磷脂酰丝氨酸；*个人计算机*磷脂酰胆碱。

**图3。**
**PMA诱导MRCKαC1结构域和LNCaP细胞中PKCδ的C1b结构域。**转染LNCaP细胞带有GFP标记的MRCKαC1结构域(A类)或GFP标签PKCδ的C1b结构域(B类)并用指定的PMA浓度（0.001–30μ米)30分钟。细胞然后通过超速离心分离成细胞溶质和膜组分如“实验程序”所述不同组分在SDS-聚丙烯酰胺上进行电泳凝胶和免疫印迹抗GFP抗体。类似结果如下在另外四个独立实验中获得。

**图4。**
**GFP标记的MRCKαC1结构域的亚细胞再分布在活LNCaP细胞中进行PMA处理。**LNCaP细胞用GFP标记的MRCKαC1结构域瞬时转染(A类)或PKCδ的GFP标记的C1b结构域(B类). 现场用不同浓度的PMA处理细胞20或40分钟(0.01–6 μ米)和绿色的转移在添加如图所示，使用蔡司LSM 510激光扫描共焦显微镜的化合物在“实验程序”下(*比例尺*在每个图形上表示10μm）。每个面板中的时间表示药物管理。图像来自单个具有代表性的实验。每个实验重复了至少三次结果。

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