跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

政府意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2008年1月10日；451(7175):202-6.
doi:10.1038/nature06468。

肿瘤抑制基因p15的反义RNA表观沉默

于文强 1, 大卫·吉斯, 帕特里克·奥尼亚戈, 克里斯蒂·马尔登-雅各布斯, 朱迪思·卡普, 安德鲁·P·范伯格, 崔恒美
附属公司

肿瘤抑制基因p15的反义RNA表观沉默

于文强等人。 自然. .

摘要

抑制正常细胞生长的肿瘤抑制基因（TSG）在癌症中经常表观遗传学沉默。DNA甲基化通常与TSG沉默有关，但致癌过程中DNA甲基化启动和识别机制的突变尚不清楚。基因调控的一个有趣的可能机制涉及广泛的非编码RNA，如microRNA、Piwi相互作用RNA和反义RNA。哺乳动物细胞中广泛存在的正反义转录物已经被系统地鉴定出来，全球转录组分析表明，多达70%的转录物具有反义伴侣，并且反义RNA的扰动可以改变正义基因的表达。例如，研究表明，反义转录物不是自然产生的，而是由基因突变诱导的，会导致基因沉默和DNA甲基化，从而导致患者出现地中海贫血。在这里，我们显示许多TSG具有附近的反义RNA，并且我们关注一个RNA在沉默p15中的作用，p15是一种与白血病有关的细胞周期素依赖性激酶抑制剂。我们发现白血病中p15反义（p15AS）和p15正义表达之间存在反向关系。p15AS表达结构通过异染色质形成而非DNA甲基化诱导顺式和反式p15沉默；p15AS被关闭后，这种沉默持续存在，尽管甲基化和异染色质抑制剂逆转了这一过程。p15AS诱导的沉默是非依赖性的。外源性p15AS在小鼠胚胎干细胞中的表达通过异染色质形成以及胚胎干细胞分化后的DNA甲基化，导致p15沉默并增加生长。因此，天然反义RNA可能是肿瘤发生过程中TSG沉默中异染色质形成和DNA甲基化的触发因素。

PubMed免责声明

数字

图1
图1。第15页白血病细胞的反义表达
一，本机第15AS页在白血病细胞系中发现了转录物。通道1和3为阴性对照，无逆转录酶。通道2和通道4显示了97 bp的条带，这些条带是通过白血病细胞系KG-1和Kasumi-1的一条特异性引物从RNA逆转录的cDNA中扩增出来的。M是一个100 bp的阶梯标记。b条,第15页和第15AS页白血病的表达(n个=16）和正常淋巴细胞(n个=16），通过实时RT-PCR分析。白血病样本显示第15页反义和低表达第15页比正常淋巴细胞多。两者第15页其反义表达水平用GAPDH公司误差线，s.e.m。；a.u.，任意单位*P（P）< 0.05.
图2
图2。第15页启动子被表达的第15页转染HCT116细胞的反义转录
一，构件的映射。箭头指示转录的方向。b条、GFP下调（受控第15页启动子）。用FACS分析转染细胞。GFP阳性细胞百分比第15页反义表达低于无反义表达（0.3%对5.8%和6.6%）(P（P）< 0.001).c（c），第二个FACS显示GFP在从b条再培养3周。GFP阳性细胞百分比第15页反义表达仍低于无反义表达（11.0%对51.1%和59.3%）(P（P）< 0.0001).d日，用四环素诱导的pP15-AS-Tre下调细胞中的GFP。加入四环素后，表达降低了68%，四环素停药后持续存在。
图3
图3。异染色质的形成第15AS页
一，反义表达诱导外源性H3K9二甲基化增加，H3K4二甲基化减少第15页启动子区。使用实时PCR测量ChIP富集度，并用输入DNA进行归一化。通过定点突变修饰后转染的正反义载体特异探针（pP15′）和反义载体（pP15-AS′）区分内源性和外源性基因（见图9）。b条，反义表达诱导外源性H3K9二甲基化增加，H3K4二甲基化减少第15页外显子1区域。c（c），反义表达诱导近端内源性H3K4二甲基化减少第15页启动子，通过ChIP检测，然后在六个位置进行实时PCR，并通过输入DNA进行标准化。上的数字x个轴表示相对于的转录起始位点的PCR位点第15页.通过载体检测转录起始位点附近的位点（+253），以区分内源性和外源性基因，如a.天，反义表达诱导了H3K9二甲基化在大区域（约6 kb）的内源性序列中的增加第15页转录起始位点。e、 反义寡核苷酸的再激活第15页启动子由5-氮杂-2′-脱氧胞苷（aza）和曲古菌素A（TSA）启动。第15页用FACS检测5-氮杂-2′-脱氧胞苷和曲古菌素A处理后GFP的启动子活性。顶部的两个面板代表阴性对照：仅HCT116细胞和未经处理的HCT116带有pP15-AS的细胞。底部三个面板显示了用5-氮杂-2′-脱氧胞苷或曲古菌素A或5-氮杂2′-脱氧胞苷+曲古菌肽A处理pP15-AS转染细胞的结果第15页发起人。与pP15相比，差异显著(n个= 3). 误差线，s.d*P（P）<0.05**P（P）< 0.01; ***P（P）< 0.001.
图4
图4。第15页诱导的沉默、异染色质形成和DNA甲基化第15页小鼠胚胎干细胞的反义转录
一，通过pP15-AS构建物转染的小鼠胚胎干细胞中GFP的下调。用FACS分析转染细胞。顶部面板为阴性对照，小鼠胚胎干细胞无转染；中间面板显示转染pP15的小鼠胚胎干细胞；底部是带有pP15-AS的小鼠胚胎干细胞。R2区域的绿点代表GFP阳性细胞。括号中的数字表示GFP阳性细胞的百分比。b条，反义表达诱导外源性p15启动子区H3K4二甲基化减少，H3K9二甲基化增加（蓝色，pP15小鼠胚胎干细胞；红色，pP15-AS小鼠胚胎干电池）。c（c），通过亚硫酸氢盐焦磷酸氢盐测序分析小鼠胚状体中外源性p15启动子区DNA甲基化的变化。顶部的两个面板代表转染了pP15-AS和pP15的小鼠胚胎干细胞。底部的两个面板代表从转染pP15-AS和pP15的小鼠胚胎干细胞分化而来的小鼠类胚体。六个被检测的胞嘧啶-鸟苷位点（CpG）被标记，甲基化百分比显示在顶部。注意，高甲基化仅在从转染pP15-AS构建物的小鼠胚胎干细胞分化而来的小鼠类胚体中观察到。与mES-pP15细胞相比，差异显著(n个= 3). 误差线，s.d*P（P）<0.05**P（P）< 0.01.
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. 崔H，等。与H19和IGF2低甲基化相关的结直肠癌印迹缺失。2002年癌症研究；62:6442–6446.-公共医学
    1. Ren B等。DNA结合蛋白的全基因组定位和功能。科学。2000;290:2306–2309.-公共医学
    1. Jones PA，Laird PW。癌症表观遗传学成熟了。自然遗传学。1999;21:163–167.-公共医学
    1. Feinberg AP，Tycko B.癌症表观遗传学史。《自然·癌症评论》。2004;4:143–153。-公共医学
    1. 诺维纳CD，夏普PA。RNAi革命。自然。2004;430:161–164.-公共医学

出版物类型

MeSH术语