跳到主页面内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2008年1月；28(2):732-42.
doi:10.1128/MCB.01623-07。 Epub 2007年11月19日。

RPEL基序通过肌动蛋白结合将血清反应因子辅因子MAL而非心肌蛋白与Rho信号联系起来

塞巴斯蒂安·盖特勒 1, 玛丽亚·K·瓦尔蒂安, 法兰西斯科·米拉雷斯, 巴纳菲·拉里贾尼, 理查德·特里斯曼
附属公司

RPEL基序通过肌动蛋白结合将血清反应因子辅因子MAL而非心肌蛋白与Rho信号联系起来

塞巴斯蒂安·盖特勒等。 分子细胞生物学. 2008年1月.

摘要

心肌素（MC）家族蛋白是血清反应因子（SRF）的转录辅激活因子。每个家族成员都有一个保守的N末端区域，包含三个RPEL基序（“RPEL域”）。MAL/MKL1/心肌相关转录因子A是细胞质，在Rho-GTPase信号传导激活后在细胞核内积聚，改变G-actin和RPEL结构域之间的相互作用。我们证明MC是核的，它不穿梭于细胞质中，MAL和MC的核质穿梭特性是由它们的RPEL结构域定义的。我们发现MAL RPEL结构域比MC结构域更容易结合肌动蛋白，并且RPEL基序本身是一个肌动蛋白结合元件。与MAL相比，MC的RPEL1和RPEL2结合肌动蛋白的能力较弱，而RPEL3在这两种蛋白中具有可比性和低亲和力。MAL调控需要所有三个基序的肌动蛋白结合。MAL和MC的不同行为由RPEL1-RPEL2单元指定，而RPEL3可以在它们之间交换。我们认为多个RPEL基序的差异肌动蛋白占据调节MAL的核质转运和活性。

PubMed免责声明

数字

图1。
图1。
MAL和MC通过其N末端RPEL结构域进行差异调节。（A） 到SRF的Rho-actin信号的示意图。G-肌动蛋白池的消耗由肌动蛋白结合SRF辅因子MAL感知。C3转移酶阻断Rho介导的肌动蛋白动力学变化；CD破坏MAL-actin复合物；LatB通过阻断肌动蛋白聚合增加G-actin库。（B） MAL和MC.B1的域组织，基本区域1；Q、 富Q区；SAP、SAF-AIB、Acinus、Pias域、LZ、亮氨酸拉链图案；TAD，转录激活域。B2为黄色。（C） 通过免疫荧光显微镜检测血清缺乏的NIH 3T3成纤维细胞中瞬时表达的MAL、MC和RPEL结构域相互交叉产生的嵌合体的定位，如图B所示。定量见图6B。（D） 通过在缺乏血清的NIH 3T3成纤维细胞中表达不含（−C3）和（+C3）共表达C3转移酶的MAL和MC衍生物激活SRF荧光素酶报告子。报告者激活被标准化为SRF-VP16或SRF-VP16+C3转移酶（100%）所赋予的激活。进行了三个独立的实验。误差条，SEM。（E）MC不穿梭于细胞质中。在指定条件下，用FLIP测量MAL-GFP、MC-GFP和嵌合体的核输出率。细胞质被反复漂白，细胞核荧光被监测。左，核荧光漂白动力学；对，初始漂白速率（每种条件>10个细胞）。误差线、标准偏差（SD）。
图2。
图2。
MAL的RPEL结构域足以进行核质穿梭。（A） PK融合蛋白示意图。（B） PK融合蛋白的免疫荧光显微镜。瞬时转染细胞被血清饥饿、饥饿和刺激，或按指示处理（PK衍生物，绿色；F-actin，红色）。底部，免疫荧光显微镜定量：MAL、MAL（2-204）-PK、MC和MC（2-150）-PK在150至200个细胞中的定位评分如下：N，核；N/C，细胞核和细胞质中强度相当；C、 细胞质（例如，另请参见图5B）。进行了三个独立的实验。误差线，SEM；FCS，胎牛血清；Jasp，茉莉酸内酯；R62D，β-肌动蛋白R62D的共表达。xxx指通过R→A交换所有三个RPEL基序的突变（图5A）。MAL（2-204）-PK的表达见图补充材料中的图S4。
图3。
图3。
MAL RPEL结构域足以介导MAL的动态核质穿梭。（A）2GFP融合蛋白的示意图。（B） 指示刺激下MAL（1-204）-2GFP的核积累动力学；顶部，代表性显微照片；底部，核荧光定量（每个条件至少12个细胞；误差条，SD）。t[s]，时间单位为秒。（C） MAL RPEL domin通过阻止核出口，导致血清和CD-诱导的核聚积。如图1D所示进行FLIP分析。MAL（1-204）-2GFP和MC（1-150）-2GFP的定位见补充材料中的图S1。
图4。
图4。
RPEL基序对肌动蛋白有不同的亲和力。（A） GST下拉分析。所示的GST融合蛋白用于在不存在或存在0.5%TX-100的情况下固定NIH 3T3细胞总裂解液中的内源性肌动蛋白。WB，Western blot检测β-肌动蛋白（显示两次接触）。Ponceau染色显示GST融合蛋白膜。（B） MAL-GFP或MC-GFP（供体）与Cy3-免疫标记的MYC-β-actin（受体）相互作用的FRET分析。左侧，显微照片：顶部，施主强度；蓝色的供体荧光寿命较高，红色的供体萤光寿命较低的中寿命图；显示FRET效率中值；底部，受体强度。0.3%，血清饥饿细胞。右，在一个盒子和胡须图中，显示了中位值（18个细胞）。（C） ClustalX生成的小鼠MAL和MC的RPEL基序的顶部多序列比对（版本1.81（22））。RPEL基序的Pfam定义用括号表示。“x”表示R→A突变靶向的RPEL基序的第一个和最保守的R残基。底部，相应的谱系图也包含由ClustalW生成的MAL16（3）。谱系图基于Pfam定义的RPEL基序。到最近节点的距离为：MAL RPEL1，0.06250；MAL16 RPEL1，0.07468；MC RPEL1，0.19805；MAL RPEL2，0.08807；MAL16 RPEL2，0.13920；MC RPEL2，0.24148；MAL RPEL3，0.0；MAL16 RPEL3，0.0；MC RPEL3，0.05114。（D） GST下拉试验如面板A所示，但仅在没有TX-100的情况下进行。与GST融合的肽包含32个氨基酸，如图C所示。R→A突变是指RPEL1中的R81、RPEL2中的R125和RPEL3中的R169（见图C）。RR→DD指RPEL1中的RR81/82。（E） 荧光各向异性分析。在LatB-actin浓度范围内测量了0.5μM的FITC-共轭32氨基酸RPEL肽（如面板C所示）的各向异性。各向异性值乘以1000。K（K）D类使用GraFit（右下角）通过非线性回归确定RPEL-肌动蛋白相互作用的值。显示了三个平行实验的数据。误差条，SD。
图5：。
图5：。
RPEL基序在MAL调控中起协同作用。（A） 生成突变体的示意图。x23，R81A；1x3，R125A；12x、R169A及其组合；MAL-1型尽职调查，RR81/82D。（B） 左侧，免疫荧光显微镜定量：在200个缺乏血清的细胞中对显示的C-末端HA-标记的MAL衍生物进行定位评分。N、 核；N/C，细胞核和细胞质中强度相当；C、 细胞质。显示了三个独立实验的数据。误差条，扫描电镜。右侧，本地化评分系统的示意图。MAL衍生物，灰度；F-actin，红色；DAPI，蓝色。（C和E）通过表达所示的MAL衍生物激活SRF荧光素酶报告子，如图1D所示进行分析。（D） 如图B所示，免疫荧光显微镜定量。有关表达水平，请参阅补充数据中的图S4，有关代表性显微照片，请参阅辅助数据中的表S2。
图6。
图6。
MAL调控需要MAL RPEL基序1和2的完整单元。（A） MAL-MC嵌合体氨基末端的示意图。命名：N，N扩展；数字是指RPEL图案的位置。B2区域为黄色。（B、E和G）免疫荧光显微镜定量：如图5B所示，在150至200个缺血清细胞中对所示的C末端HA-标记的MAL和MC衍生物进行定位。表达水平见补充材料中的图S4，代表性显微照片见补充材料的图S3。（C、F和H）通过所示MAL和MC衍生物的表达激活SRF荧光素酶报告子，如图1D所示进行分析。（D） 用FLIP测量MAL-MC嵌合体的核输出，如图1E所示。
图7。
图7。
肌动蛋白与RPEL基序相互作用调节MAL核质穿梭和转录活性的模型。肌动蛋白以暗红色显示，RPEL基序以红色（MAL）或绿色（MC）显示，具有相对亲和力。在静息细胞中，肌动蛋白的浓度足够高，以确保肌动蛋白依赖性募集假定的输出因子。肌动蛋白结合也可能在高G-Actin浓度下阻断MAL B2核导入信号（黄色）（23）。肌动蛋白与MAL的RPEL3的相互作用以一种依赖于肌动蛋白和RPEL1-RPEL2单位的相互作用的方式进行调节。因此，调控可能涉及高阶肌动蛋白-MAL复合物。为了简单起见，该图显示了一个综合体，其中三个主题都被占据了；然而，不能排除其他绑定可能性。相反，MC或肌动蛋白结合缺陷型MAL RPEL突变体不结合肌动蛋白，是导入而非导出的底物。在受刺激细胞中，G-actin池的耗竭会导致核输出受阻，而输入不会受到影响。在这种复合物中，肌动蛋白可能仍然与RPEL基序的子集结合。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. 巴塔查里亚、R.P.、A.雷蒙尼、B.J.Yeh和W.A.Lim。2006.域、基序和支架：模块化交互作用在细胞信号电路进化和布线中的作用。每年。生物化学评论。75655-680.-公共医学
    1. Cen，B.、A.Selvaraj、R.C.Burgess、J.K.Hitzler、Z.Ma、S.W.Morris和R.Prywes。巨核细胞白血病1是血清反应因子（SRF）的一种有效转录辅激活因子，是SRF靶基因的血清诱导所必需的。摩尔细胞。生物.236597-6608。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Chenna，R.、H.Sugawara、T.Koike、R.Lopez、T.J.Gibson、D.G.Higgins和J.D.Thompson。2003.与Clustal系列程序进行多序列比对。核酸研究313497-3500。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Conibear，P.B.和M.A.Geeves。1998年。兔骨骼肌重肌球蛋白与肌动蛋白结合的两个头之间的合作性。生物物理学。期刊75926-937。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Du，K.L.，M.Chen，J.Li，J.J.Lepore，P.Mericko和M.S.Parmacek。巨核细胞白血病因子-1转导细胞骨架信号并诱导未分化胚胎干细胞向平滑肌细胞分化。生物学杂志。化学。27917578-17586.-公共医学

出版物类型

MeSH术语