Mosquitoes inoculate high doses of West Nile virus as they probe and feed on live hosts

doi:10.1371/journal.ppat.0030132

.2007年9月14日；3(9):1262-70.

doi:10.1371/journal.ppat.0030132。

蚊子在探测活宿主并以其为食时，会接种高剂量的西尼罗河病毒

琳达·M·斯泰尔¹, 金·A·肯特, 丽贝卡·奥尔布赖特, 科里·J·贝内特, 劳拉·德·克莱默, 克里斯汀·伯纳德

附属公司

PMID： 17941708
预防性维修识别码：项目经理1976553
内政部： 10.1371/日志.ppat.0030132

蚊子在探测活宿主并以其为食时，会接种高剂量的西尼罗河病毒

琳达·M·斯泰尔等。公共科学图书馆-病理学. 2007.

.2007年9月14日；3(9):1262-70.

doi:10.1371/journal.ppat.0030132。

作者

琳达·M·斯泰尔¹, 金·A·肯特, 丽贝卡·奥尔布赖特, 科里·J·贝内特, 劳拉·德·克莱默, 克里斯汀·伯纳德

附属

¹美国纽约州斯林格兰市纽约州卫生部沃兹沃斯中心虫媒病毒实验室。

PMID： 17941708
预防性维修识别码：项目经理1976553
内政部： 10.1371/日志.ppat.0030132

摘要

西尼罗河病毒（WNV）是由蚊子在吸血时传播给脊椎动物宿主的。蚊子以活宿主为食时接种的西尼罗河病毒数量尚不清楚。此前对蚊子接种的西尼罗河病毒数量（10（1.2）-10（4.3）PFU）的估计基于体外试验，这些试验不允许蚊子进行探测或自然进食。在这里，我们开发了一种体内试验，以确定蚊子在探测和捕食小鼠或鸡的外周组织时接种的西尼罗河病毒数量。通过我们的分析，我们回收了大约三分之一已知量的病毒接种到小鼠组织中。考虑到未被发现的病毒，四种蚊子接种WNV的平均和中位剂量分别为10（4.3）PFU和10（5.0）PFU（针对tarsalis库蚊）、10（5.9）PFU、10（6.1）PFU，10（4.7）PFU10（针对日本伊蚊）、以及10（3.6）PFU与10（3.4）PFU。在直接比较中，由眼镜猴Cx接种的病毒剂量的体内估计值比通过体外毛细管传输测定获得的估计值大大约600倍。病毒没有迅速传播，因为99%以上的病毒都是从蚊子叮咬或探测的部位回收的。此外，76%（22/29）的蚊子在进食时将少量病毒（约10（2）PFU）直接接种到血液中。将病毒直接引入血液可能会改变病毒的嗜性，导致病毒血症的早期发展，并导致共同喂养蚊子的感染率较低。我们的数据表明，蚊子在探测和取食活宿主的同时，在血管外接种高剂量西尼罗河病毒，在血管内接种低剂量西尼罗病毒。准确估计蚊子接种的病毒剂量对于在疫苗、宿主能力和发病机制研究中向动物施用适当的接种剂量至关重要。

PubMed免责声明

利益冲突声明

利益竞争。提交人声明，不存在相互竞争的利益。

数字

**图1。蚊子在不同实验条件下体内接种高剂量西尼罗河病毒**
（A）通过蚊子在血管外接种西尼罗河病毒剂量。x个-轴线标签表示蚊子感染方法（Inoc=胸腔内接种，口腔=口腔感染）、蚊子种类（Tar=*Cx.跗关节炎*，匹普=*淡色库蚊*，日语=*日本伊蚊*，三个=*三体伊蚊*)以及蚊子探测或进食的组织（尾巴=老鼠尾巴，耳朵=老鼠耳朵，脚趾=鸡脚趾）。显示了斑块分析的检测限（LOD）。（B）数据与（A）相同，但按组织类型、蚊子种类和感染方法汇总。在每个较大的分组（组织类型、蚊子种类或感染方法）中，用不同小写字母（上图）指定的组之间存在显著差异(第页<0.05（通过Mann-Whitney或Kruskal-Wallis试验）。实线表示各组的平均滴度，虚线表示中位滴度。

**图2。蚊虫尾部取食部位的病毒运动**
蚊子接种的大多数病毒都是从蚊子探测并取食的尾部（取食点）中回收的。从每个尾部回收的总病毒百分比。每个老鼠尾巴的数据被移动以对齐喂食位置。如果蚊子分两部分进行探测或取食，则将这些部分汇总并合并为一个取食点。相对于喂食部位，朝向尾端的尾巴部分标记为−1和−2。相对于喂食部位，朝向身体的尾部标记为+1到+4。包括来自口腔和肠道感染的数据*Cx.跗关节炎*，*日本伊蚊*、和*三体伊蚊*以老鼠尾巴为食。

**图3。蚊子吸血时血管内接种少量病毒**
蚊虫取食远端组织后动物血清中的西尼罗河病毒数量。蚊子要么探测组织和吸收的血液（Fed），要么探测不吸血（Unfed）。实线表示各组血清中WNV的平均滴度。显示了斑块分析的LOD。

**图4。蚊子向小鼠尾部接种的西尼罗河病毒量随探测时间增加**
图表中包括来自探针时间实验（开圆圈）和其他实验（填充三角形）的数据，这些实验中有肠外或口腔感染*Cx.跗关节炎*探测并喂食老鼠尾巴。实线表示最拟合的单点绑定模型，虚线表示最佳拟合曲线的95%置信区间。斑块检测的LOD为5 PFU。小于LOD的值报告为0。

**图5。蚊子将WNV注射到小鼠尾部的剂量高于注射到玻璃毛细管中的剂量**
胸腔内接种*Cx.跗关节炎*女性(n个=15）用老鼠尾巴探测/喂食；去除尾部并浸渍，并测定WNV滴度（小鼠尾部）。2–4小时后，通过体外毛细管传递试验（毛细管–Fed）从这些蚊子的唾液分泌物中收集。同时，收集胸腔内接种的女性唾液分泌物*Cx.跗关节炎*来自没有吃过老鼠尾巴的同一组(n个=44）（毛细管–未折叠）。所示为两项独立研究的综合数据。每列中WNV滴度的平均值和中位数由水平实线和虚线表示。显示了斑块分析的LOD。

**图6。*库莱克斯*蚊子含有大量西尼罗河病毒**
经口（口服）或经肠（Inoc）感染者头部（H）、胸部（T）、腹部（A）和腿部（L）的几何平均WNV滴度*Cx.跗关节炎*和肠外感染*淡色库蚊*.在第16天检测口腔感染蚊子，在第7天检测肠道感染蚊子。条形图中的字母表示身体片段滴度彼此之间存在显著差异(第页<0.05）。横条上方的字母表示蚊子的种类，它们之间存在显著差异(第页<0.05）。误差条显示标准偏差。斑块检测的LOD为5 PFU。

**图7。静脉接种后WNV从血清中的清除**
老鼠(n个=4）静脉接种10⁵在不同时间采集PFU和血清样本。对于每只小鼠，将血清中的WNV滴度标准化为5分钟血清滴度，并报告为WNV血清滴度的对数变化。实线表示最佳拟合线性回归（R²= 0.90,第页<0.0001）；虚线表示回归线的95%置信区间。

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1. 疾病控制和预防中心。CDC西尼罗河病毒主页。2007年推出：http://www.cdc.gov/ncidod/dvbid/westnile/index.htm。2007年8月15日查阅。
1. Granwehr BP、Lillibridge KM、Higgs S、Mason PW、Aronson JF等。西尼罗河病毒：我们现在在哪里？柳叶刀传染病。2004;4:547–556。-公共医学
1. Styer LM、Bernard KA、Kramer LD。受蚊虫叮咬感染的雏鸡早期西尼罗河病毒感染增强：病毒剂量的影响。Am J Trop医学杂志。2006;75:337–345.-公共医学
1. Reisen WK、Fang Y、Martinez VM。鸟类宿主和蚊子（双翅目：蚊科）媒介的能力决定了西尼罗河和圣路易斯脑炎病毒传播的效率。医学昆虫学杂志。2005;42:367–375.-公共医学
1. Colton L，Nasci RS。美国南部库蚊唾液中西尼罗河病毒的定量。J Am Mosq控制协会，2006年；22:57–63.-公共医学

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[1] 疾病控制和预防中心。CDC西尼罗河病毒主页。2007年推出：http://www.cdc.gov/ncidod/dvbid/westnile/index.htm。2007年8月15日查阅。

[2] 疾病控制和预防中心。CDC西尼罗河病毒主页。2007年推出：http://www.cdc.gov/ncidod/dvbid/westnile/index.htm。2007年8月15日查阅。

[3] Granwehr BP、Lillibridge KM、Higgs S、Mason PW、Aronson JF等。西尼罗河病毒：我们现在在哪里？柳叶刀传染病。2004;4:547–556。-公共医学

[4] Granwehr BP、Lillibridge KM、Higgs S、Mason PW、Aronson JF等。西尼罗河病毒：我们现在在哪里？柳叶刀传染病。2004;4:547–556。-公共医学

[5] Styer LM、Bernard KA、Kramer LD。受蚊虫叮咬感染的雏鸡早期西尼罗河病毒感染增强：病毒剂量的影响。Am J Trop医学杂志。2006;75:337–345.-公共医学

[6] Styer LM、Bernard KA、Kramer LD。受蚊虫叮咬感染的雏鸡早期西尼罗河病毒感染增强：病毒剂量的影响。Am J Trop医学杂志。2006;75:337–345.-公共医学

[7] Reisen WK、Fang Y、Martinez VM。鸟类宿主和蚊子（双翅目：蚊科）媒介的能力决定了西尼罗河和圣路易斯脑炎病毒传播的效率。医学昆虫学杂志。2005;42:367–375.-公共医学

[8] Reisen WK、Fang Y、Martinez VM。鸟类宿主和蚊子（双翅目：蚊科）媒介的能力决定了西尼罗河和圣路易斯脑炎病毒传播的效率。医学昆虫学杂志。2005;42:367–375.-公共医学

[9] Colton L，Nasci RS。美国南部库蚊唾液中西尼罗河病毒的定量。J Am Mosq控制协会，2006年；22:57–63.-公共医学

[10] Colton L，Nasci RS。美国南部库蚊唾液中西尼罗河病毒的定量。J Am Mosq控制协会，2006年；22:57–63.-公共医学

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