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.2007年12月；27(24):8510-21.
doi:10.1128/MCB.01615-07。 Epub 2007年10月8日。

T-bet调节单个靶基因的能力需要保守的T-box结构域来募集组蛋白甲基转移酶活性和一个单独的家族成员特异性反式激活结构域

梅根·D·刘易斯 1, 萨拉·米勒, 迈克尔·米亚兹戈维奇, 克里斯汀·贝玛, 艾米·斯温曼
附属公司

T-bet调节单个靶基因的能力需要保守的T-box结构域来募集组蛋白甲基转移酶活性和一个单独的家族成员特异性反式激活结构域

梅根·D·刘易斯等。 分子细胞生物学. 2007年12月.

摘要

适当的细胞分化和规范依赖于关键发育转录因子精确建立基因表达模式的能力。这些转录因子通常调节表观遗传事件。然而，目前尚不清楚这是否是它们在功能性调节发育基因表达途径中发挥的唯一作用，或者它们是否也参与了同一启动子的下游反式激活事件。T-box转录因子家族在许多发育系统中的细胞规范事件中非常重要，并且确定该家族调节基因表达网络的分子机制值得关注。在这里，我们研究了免疫系统中的关键T-盒蛋白T-bet影响转录的机制。T-bet在CXCR3和IFN-gamma启动子处诱导组蛋白H3-K4二甲基修饰是必要且充分的。T-bet结构-功能分析表明，具有小C末端部分的保守T-box结构域是向启动子募集组蛋白甲基转移酶活性所必需的。有趣的是，这种功能在T盒家族中是保守的，对于诱导转录来说是必要的，但还不够，还需要独立的反式激活活性。对两种可分离功能活性的要求可能最终导致T-box蛋白在建立特定发育基因表达途径中发挥严格的作用。

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数字

图1。
图1。
T-bet对于在CXCR3型和干扰素-γ发起人。（A） 所示为ChIP实验的代表性结果，该实验检测了CD4中不同启动子处的H3-K4二甲基（H3K4me2）和三甲基（H3Gme3）修饰+从野生型（WT）或T-bet分离的T细胞−/−（敲除[KO]）小鼠并在Th1-倾斜条件下培养。用组蛋白H3-K4Me2和H3-K4Me3修饰特异性抗体或非特异性免疫球蛋白G（IgG）对照进行ChIP测定，如下图所示。如上图所示，使用启动子特异性引物进行定量PCR分析。这个年每个图的轴表示相对于每个细胞类型的总输入控制的特定抗体沉淀水平。（B） 用对照pcDNA3.1（1至4道）或T-bet（5至8道）表达载体转染EL4 T细胞。对细胞进行交联，并使用组蛋白H3-K4Me3（第1和第5道）或H3-K4Me2（第2和第6道）的特异性抗体或非特异性IgG抗体对照（第4和第8道）进行ChIP分析。图中还显示了总染色质输入的等分（第3和第7道）。如凝胶图像左侧所示，在分析的PCR部分使用了启动子特异性引物。
图2。
图2。
T-bet删除构造的示意图。所有T-bet表达结构均克隆到pcDNA3.1载体中，并带有一个用于监测蛋白表达水平的C末端V5表位标签。在所有情况下，以黑色表示的T-box DNA结合域包含在构建物中，以允许与内源性T-bet靶基因结合。指出了每个突变体的初始N端和最终C端氨基酸。
图3。
图3。
T-bet的N端和C端结构域都含有反激活电位。EL4 T细胞转染了对照pcDNA3.1表达载体或T-bet C端（A和B）或N端（C和D）缺失结构体，如图所示。处理转染样品的等分样品进行RNA和定量RT-PCR分析（A和C），并通过Western分析评估蛋白质表达，使用V5抗体（αV5）检查构建表达或甘油醛-3-磷酸脱氢酶抗体（αGapdh）作为负荷对照（B和D）。使用基因特异性引物进行定量RT-PCR分析，以监测野生型和突变T-bet结构对图底部所示内源性靶基因表达的影响。这个年轴表示将所有样本的值归一化为β-actin作为对照后，每个缺失突变相对于野生型T-bet 1-530转染的表达水平。通过监测转染细胞中目标基因表达和突变蛋白表达水平的典型实验，显示了C末端（A和B）和N末端（C和D）缺失结构的结果。
图4。
图4。
T-bet的N-和C-末端结构域对于在CXCR3型发起人。（A） 所示为代表性ChIP实验的结果，该实验检测了H3-K4二甲基修饰对T-bet缺失突变体过度表达的反应状态。EL4 T细胞转染对照pcDNA3.1载体（1至4道）或凝胶图像上所示的以下T-bet表达结构之一：T-bet 1-530（5至8道）、T-bet 1至468（9至12道）、T bet 1-402（13至16道）、T-bet 1-331（17至20道）或T-bet 120-530（21至24道）。对转基因样品进行交联，并使用H3-K4三甲基（H3K4me3；1、5、9、13、17和21道）、H3-K4-二甲基（2、6、10、14、18和22道）或非特异性IgG对照（4、8、12、16、20和24道）的特异性抗体进行ChIP检测。还显示了每次转染的总输入染色质的等分（3、7、11、15、19和23道）。针对以下启动子的引物CXCR3型,干扰素-γ,JMJD1A公司，或白介素-4如凝胶图像左侧所示使用。（B） 如图1A图例所示，对A组样品进行定量PCR分析。
图5：。
图5：。
T-bet的N端和C端结构域的丢失导致交易激活潜能的完全缺失。使用了删除N末端的T-bet删除结构，以及C末端结构域的渐进删除。如图3和图4的图例所示，用T-bet突变结构转染（A和B）EL4 T细胞。（A） 通过定量RT-PCR监测突变体构建物激活内源性靶基因表达的能力。（B） 显示了对A组转染细胞中构建物表达水平的西方分析。αV5、V5抗体；αGAPDH，甘油醛-3-磷酸脱氢酶抗体。
图6。
图6。
甲基转移酶活性功能募集所需的结构域定位到CXCR3型和干扰素-γ发起人。（A） 如图4图例所示，ChIP监测了双截短突变蛋白诱导H3-K4二甲基（H3K4me2）修饰的能力。EL4 T细胞转染pcDNA3.1控制载体（1至5道）、T-bet 120-468（6至9道）、T-bet 120-402（10至13道）或T-bet 120至331（14至17道）。用H3-K4三甲基（H3K4me3；第1、6、10和14道）、H3-K4-二甲基（第2、7、11和15道）、H-3K9乙酰基（H3AcK9）（第3道）或IgG对照（第5、9、13和17道）特异性抗体沉淀转染样品。图中还显示了总输入染色质的等分（第4、8、12和16道）。（B） 图示为面板A图例中所述样本的定量PCR分析。构造符号键与图5中的相同。（C） 进行ChIP分析以确定双截短突变蛋白是否保留与干扰素-γ发起人。EL4 T细胞转染pcDNA3.1对照（1至3道）、T-bet 120-468（4至6道）、T-bet 120-402（7至9道）、T bet 120-331（10至12道）或T-bet 1-530（13至15道）。对转染的样品进行标准ChIP分析，并用V5表位标签抗体（1、4、7、10和13道）或IgG对照物（3、6、9、12和15道）沉淀。还显示了每次转染的输入染色质的等分（第2、5、8、11和14道）。
图7。
图7。
向靶基因募集组蛋白甲基转移酶活性的能力是T-box家族的保守功能。（A） Brachyury（Brach.）能够与T-bet靶基因关联。所示为对人类721 B细胞系进行的ChIP分析。染色质用Brachury（泳道1）、T-bet（泳道2）或非特异性IgG对照（泳道4）特异性抗体沉淀。总输入染色质也显示在图中（第3栏），PCR中使用的启动子特异性引物显示在凝胶图像的左侧。（B） 如图所示，用pcDNA3.1控制载体（1至4道）、Tbx6（5至8道）、Eomes（9至12道）或Brachyury（13至16道）转染EL4 T细胞。通过ChIP监测T-box家族成员诱导H3-K4二甲基（H3K4me2）修饰的能力。用抗H3-K4三甲基（H3K4me3；第1、5、9和13道）、H3-K4-二甲基（第2、6、10和14道）或非特异性IgG对照（第4、8、12和16道）的抗体沉淀转基因样品，并显示总输入染色质的等分分析（第3、7、11和15道）。如凝胶图像左侧所示，启动子特异性引物用于分析的PCR部分。（C和D）通过定量RT-PCR（C）检测这些T-box家族成员调节内源性靶基因表达的能力，并进行西方分析以监测蛋白质表达水平，如图3（D）的图例所示。
图8。
图8。
T-bet与组蛋白甲基转移酶活性相关。进行co-IP实验，并监测组蛋白甲基转移酶活性。（A） EL4 T细胞转染pcDNA 3.1控制载体（通道1）、T-bet 1-530（通道2）或SET7/9（通道3）。T-bet 1-530和SET7/9结构包含一个C末端V5表位标签。从单个样品中提取全细胞提取物，并用V5抗体沉淀（1到3道）。用沉淀样品进行甲基转移酶活性测定，随后对沉淀样品进行西方分析，以监测H3-K4二甲基特异性甲基转移酶的活性。重组组蛋白H3的量等于甲基转移酶反应中使用的量，也作为对照（−；通道4）。如图所示，用组蛋白H3-K4二甲基（αH3K4Me2）特异性抗体探测膜。（B） 然后剥离膜并用V5特异性抗体（αV5）重新处理，以确认转染的构建体的沉淀。星号表示的次要带代表与重链的交叉反应性。（C） 如A组所述，进行了监测甲基转移酶活性的co-IP实验。721 B细胞用佛波醇12-肉豆蔻酸13-醋酸盐和离子霉素（P/I）刺激。用对照Cdk6抗体（通道1）或T-β特异性抗体（通道2）沉淀核提取物。对co-IP样品进行甲基转移酶活性测定，并使用H3-K4二甲基特异性抗体进行Western分析。
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    1. Afkarin，M.、J.R.Sedy、J.Yang、N.G.Jacobson、N.Cereb、S.Y.Yang、T.L.Murphy和K.M.Murphi。T-bet是STAT1诱导的幼稚CD4+T细胞中IL-12R表达的调节因子。自然免疫学。3:549-557.-公共医学
    1. 阿加瓦尔、S.和A.Rao。染色质结构的调节调节T细胞分化过程中细胞因子基因的表达。豁免9:765-775。-公共医学
    1. Ansel、K.M.、I.Djuretic、B.Tanasa和A.Rao。2006.Th2分化和IL4位点可及性的调控。每年。免疫学评论。24:607-656.-公共医学
    1. Avni，O.、D.Lee、F.Macian、S.J.Szabo、L.H.Glimcher和A.Rao。T（H）细胞分化伴随着细胞因子基因组蛋白乙酰化的动态变化。自然免疫学。3:643-651.-公共医学
    1. Baala，L.、S.Briault、H.C.Etchevers、F.Laumonnier、A.Natiq、J.Amiel、N.Boddaert、C.Picard、A.Sbiti、A.Asermouh、T.Attie-Bitach、F.Encha-Razavi、A.Munnich、A.Sefiani和S.Lyonnet。2007.T-box转录因子EOMES纯合沉默导致小头畸形伴多小脑回和胼胝体发育不全。自然遗传学。39:454-456.-公共医学

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