跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2007年12月；81(23):12899-910.
doi:10.1128/JVI.01280-07。 Epub 2007年9月19日。

肉豆蔻酰化是人类免疫缺陷病毒1型Gag-Gag在哺乳动物细胞中多重聚合所必需的

华立1, 杜军（Jun Dou）, 丁玲梅, 保罗·斯皮尔曼
附属公司

肉豆蔻酰化是人类免疫缺陷病毒1型Gag-Gag在哺乳动物细胞中多重聚合所必需的

华立等。 J维罗尔. 2007年12月.

摘要

人类免疫缺陷病毒1型的Gag蛋白指导病毒粒子的组装过程。在球形未成熟病毒外壳的形成过程中，Gag蛋白必须发生广泛的多重聚合。在体外，缺乏N-末端肉豆蔻酸修饰或核衣壳蛋白（NC）的Gag蛋白可以生成病毒样颗粒。然而，在哺乳动物细胞中存在的条件下，Gag-Gag多重聚合的精确要求尚未完全阐明。在本研究中，采用测量荧光共振能量转移的Gag-Gag多聚分析来确定Gag结构域，这些结构域对均聚反应至关重要。共鉴定出三个基本成分：衣壳蛋白（CA）N端和C端结构域中残基的蛋白质相互作用、NC中的基本残基以及肉豆蔻酸的存在。使用v-src中的异源肉豆蔻酰化序列再现了肉豆蔻酸的多重聚合需求。只有当亮氨酸拉链二聚化基序位于NC的位置时，才有一种非糖苷化的Gag蛋白能够多重聚合。这些结果支持Gag-Gag多重聚合的三组分模型，包括Gag的肉豆蔻酰化N末端介导的膜相互作用、CA结构域之间的蛋白-蛋白质相互作用和NC-RNA相互作用。

PubMed免责声明

数字

图1。
图1。
本研究中描述的Gag-CFP和Gag-YFP结构的示意图。左侧是与图顶部全长Gag中所示域相对应的示意图。图中蛋白质N端的深色波浪线代表肉豆蔻酸。CA中的点表示NTD或CTD丙氨酸替换；NC中的星号表示NC15A。右侧的表格总结了扫描荧光测定的结果，描述为强FRET（左栏）、中等FRET，或在某些情况下，轻微可检测FRET（+/-）（中栏），或未检测到FRET（右栏）。
图2。
图2。
Gag-Gag FRET的肉豆蔻酰化要求。图为细胞悬浮液在433nm激发后的发射扫描；527 nm处的峰值代表CFP/YFP FRET。右边的横线表明，每次比较中YFP受体浓度大致相等。每个面板下面都提供了符号的图例。
图3。
图3。
膜浮选离心SrcCANC（A）和Myr（−）SrcCANCB（B）。细胞裂解物分层在50%-40%-10%碘克沙醇梯度的底部，并进行平衡浮选离心以将膜（40%-10%界面）与细胞液（6至12组分）分离。顶栏表示CFP荧光是膜或胞浆中总Gag蛋白的标记。底部曲线表示每个梯度分数的发射扫描。
图4。
图4。
Gag-CFP/YFP成对结构面板的发射扫描结果。SrcCANC在每个帧中充当FRET正向控制。由于空间考虑，YFP发射值未显示在该面板中，但每次比较的强度大致相同。每个面板都包含一个键，指示所检查的特定构造。结果中提供了A到J中每次比较的详细信息。
图5：。
图5：。
膜浮选离心分离SrcCASP1LZ（A）和Myr（−）SrcCASP2LZ（B）。将细胞裂解物分层到50%-40%-10%碘克沙醇梯度的底部，并进行平衡浮选离心以将膜（40%-10%界面）与细胞液（6至12组分）分离。顶栏表示CFP荧光是膜或胞浆中总Gag蛋白的标记。底部曲线表示433 nm光刺激后每个梯度部分的发射扫描。
图6。
图6。
FRET救援实验。将SrcCANC-CFP与与YFP融合的每个指定的非淀粉化结构体共转染，并进行发射扫描以检测FRET。符号键位于YFP强度条下方。除Myr（−）SrcCA（M39A/W184A）NC15A和Myr（–）SrcCA（M39A/W184A/M185A）NC15 A外，所有结构均显示FRET被肉豆蔻酰化结构所拯救，这两个结构分别表示为垂直线和菱形。
图7。
图7。
关键Gag融合蛋白的激光扫描共聚焦荧光显微镜。图中显示的是使用蔡司LSM 510共焦显微镜检测的与配对结构的YFP融合伙伴转染的HeLa细胞。肉豆蔻酰化结构如左图所示，非肉豆蔻醇化结构如右图所示。DAPI（4′，6′-二氨基-2-苯基吲哚）复染用于提供核染色。（A）MACANC；（B）Myr（−）MACANC；（C）SrcCANC；（D）Myr（−）SrcCANC；（E）SrcCASP1LZ；（F）Myr（−）SrcCASP1LZ；（G）ScrCA（M39A/W184A/M185A）NC15A；（H）Myr（−）ScrCA（M39A/W184A/M185A）NC15A。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

工具书类

    1. Accola，M.A.、S.Hoglund和H.G.Gottlinger。1998年。与人类免疫缺陷病毒1型Gag前体衣壳p2边界重叠的假定α-螺旋结构对病毒颗粒组装至关重要。J.维罗尔。72:2072-2078.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Accola，M.A.、B.Strack和H.G.Gottlinger。2000.通过保留人类免疫缺陷病毒1型衣壳p2的羧基末端结构域和晚期组装结构域的最小Gag构建物高效生产粒子。J.维罗尔。74:5395-5402.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Borsetti，A.、A.Ohagen和H.G.Gottlinger。1998年。人类免疫缺陷病毒1型Gag前体的C末端一半足以进行有效的粒子组装。J.维罗尔。72:9313-9317.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Bowzard，J.B.、R.P.Bennett、N.K.Krishna、S.M.Ernst、A.Rein和J.W.Wills。1998年。核衣壳序列中基本残基对逆转录病毒Gag组装和互补救援的重要性。J.维罗尔。72:9034-9044.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Briggs，J.A.、T.Wilk、R.Welker、H.G.Krausslich和S.D.Fuller。2003.真实、成熟HIV-1病毒粒子和核心的结构组织。EMBO期刊22:1707-1715.-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型

物质