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.2007年8月；13(8):1172-8.
doi:10.1261/rna.586807。 Epub 2007年6月21日。

miR-200b介导ZFHX1B转录后抑制

南娜·伦比杰尔·克里斯托弗森 1, 阿斯利·西拉塔罗格鲁, Ulf Andersson Orom公司, 萨卡里·考皮宁, 安德斯·隆德
附属公司

miR-200b介导ZFHX1B转录后抑制

南娜·伦比杰尔·克里斯托弗森等。 核糖核酸. 2007年8月.

摘要

microRNA通过对同源mRNA靶点的转录后调节，在动物发育和体内稳定过程中发挥重要作用。ZFHX1B是一种转录阻遏物，通过调节E-cadherin参与TGF-β信号通路和上皮-间充质转化过程。我们发现Zfhx1b和miR-200b在成年小鼠大脑中区域共表达，并且miR-200b通过3'-非翻译区中存在的多个序列元件抑制Zfhx1b的表达。miR-200b的过度表达导致内源性ZFHX1B的抑制，而miR-200b-的抑制减轻了ZFHX1B的抑制。根据这些发现，miR-200b调节E-cadherin启动子的活性。

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数字

图1。
图1。
miR-200b结合位点Zfhx1b型3′-UTR在物种间是保守的。鼠标的示意图Zfhx1b型基于互补miR-200b种子区CAGUAUU的出现，3′-UTR包含miR-200b5（S1–S5）的五个潜在结合位点。数字是指合奏成绩单ENSMUST00000076836中的位置。预测的miR-200b结合位点（S3）在ZFHX1B型3′-UTR在三种哺乳动物物种中得到完全保护，如图所示。miR-200b的成熟序列在所示物种中保持不变。miR-200b的种子区域以粗体显示。
图2。
图2。
miR-200b和Zfhx1b型大脑中的mRNA。(顶部面板）成年小鼠脑矢状切面与反义RNA探针杂交Zfhx1b型（艾伦脑图谱2004）。(底部面板）成年小鼠脑矢状切面与miR-200b的反义LNA修饰寡核苷酸探针杂交。这两个基因都在海马结构的新皮质、锥体细胞层、齿状回以及小脑颗粒层中表达。（Py）金字塔细胞层；（DG）齿状回。
图3。
图3。
miR-200b调节Zfhx1b型. (一个)将含有五个miR-200b结合位点的荧光素酶报告子构建物与miR-200b+突变miR-200b-+或miR-10a共转染到HEK293细胞中。5到30 nM miR-200b压制了记者(*P（P）<0.001，学生吨-测试）。（模拟）单独转染荧光素酶报告体的细胞。数据显示为平均值±标准偏差六个或七个重复，是三个独立实验的代表。(B类)单个miR-200b结合位点分析。将含有miR-200b结合位点1–5、1–2或3–5的荧光素酶报告基因构建物与10 nM miR-200b-或突变miR-200b.共同转染到HEK293细胞中。作为对照，将空pGL3载体与10 nM miR-200b共转染。miR-200b抑制了所有含有miR-200b-结合位点的记者(*P（P）<0.001，学生吨-测试），但不是空向量。数据显示为六个或七个重复的平均值±SD，代表三个独立实验。(C类)miR-200b降低荧光素酶报告基因mRNA水平。将含有miR-200b结合位点1–5、1–2或3–5的荧光素酶报告基因构建物与10 nM miR-200bHEK293细胞共转染。miR-200b导致所有报告结构的mRNA水平显著下降(*P（P）<0.001，学生吨-测试）。数据显示为三个重复的平均值±SD，代表五个独立实验。(D类)内源性ZFHX1B蛋白由miR-200b调节。用30 nM转染MDA-MB-435S细胞ZFHX1B型siRNA、miR-200b、突变的miR-200b、miR-10a或miR-200b的LNA抑制剂。仅用转染试剂处理模拟转染细胞。48小时后，用Western blotting分析ZFHX1B水平，并用同一blot检测作为负荷对照的Vincullin。显示了ZFHX1B相对于文丘林表达的定量之间并参考模拟转染细胞的表达水平。印迹是三个独立实验的代表。(E类)miR-200b导致内源性ZFHX1B型mRNA。用30 nM转染MDA-MB-435S细胞ZFHX1B型siRNA、miR-200b或突变的miR-200b。仅用转染试剂处理模拟转染细胞。miR-200b显著降低ZFHX1B型转染48小时后用定量PCR测定mRNA水平(*P（P）<0.001，学生吨-测试）。ZFHX1B型显示的级别与RPLP0型并引用了ZFHX1B/RPLP0型模拟转染细胞的比率。数据显示为三个重复的平均值±SD，代表三个独立实验。
图4。
图4。
miR-200b增加E-钙粘蛋白启动子活性。一种含有人的一部分的萤光素酶构建体E-钙粘蛋白启动子，包括E-boxes，与HEK293细胞共转染Zfhx1b型，siRNA对抗ZFHX1B型、miR-200b或miR-10a。miR-200b取消按下E-钙粘蛋白启动子结构(P（P）<0.001，学生吨-测试），而miR-10a没有。仅转染荧光素酶构建物的（模拟）细胞。作为对照，pGL2构建物的E盒中有点突变E-钙粘蛋白启动子与Zfhx1b型或miR-200b(正确的图的一部分）。仅用突变荧光素酶构建物转染的（突变模拟）细胞。数据显示为六个或七个重复的平均值±SD，代表三个独立实验。
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    1. 艾伦大脑图谱。西雅图，华盛顿州：艾伦脑科学研究所。2004网址：http://www.brain-map.org.
    1. Ambros，V.动物microRNA的功能。自然。2004;431:350–355.-公共医学
    1. Bagga，S.，Bracht，J.，Hunter，S.、Massirer，K.、Holtz，J.、Eachus，R.、Pasquinelli，A.E.let-7和lin-4 miRNA的调节导致靶mRNA降解。单元格。2005年；122:553–563。-公共医学
    1. Bassez，G.、Camand，O.J.、Cacheux，V.、Kobetz，A.、Dastot-Le Moal，F.、Marchant，D.、Catala，M.、Abitbol，M.和Goossens，M.小鼠和人类发育过程中ZFHX1B基因转录物的多效性和多样性表达支持“Mowat–Wilson”综合征的各种临床表现。神经生物学。数字化信息系统。2004;15:240–250.-公共医学
    1. Bohnsack，M.T.，Czaplinski，K.，Gorlich，D.Exportin 5是一种RanGTP依赖的dsRNA-结合蛋白，可调节前miRNAs的核输出。RNA。2004;10:185–191.-项目管理咨询公司-公共医学

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