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.2008年2月；50(2):274-9.
doi:10.1002/pbc.21213。

急性淋巴细胞白血病细胞株中天冬酰胺酶敏感性与天冬酰胺合成酶蛋白含量而非mRNA含量的相关性

南苏 1, 袁Xiang Pan, 米周, 理查德·C·哈维, 史蒂芬·P·饥饿, 迈克尔·基尔伯格
附属公司

急性淋巴细胞白血病细胞株中天冬酰胺酶敏感性与天冬酰胺合成酶蛋白含量而非mRNA含量的相关性

南苏等。 小儿血癌. 2008年2月.

摘要

背景：天冬酰胺酶（ASNase）是大多数儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）治疗方案的重要组成部分。尽管天冬酰胺合成酶（ASNS）表达增加可能导致ASNase耐药性，但患者样本中ASNS mRNA含量与ASNase敏感性之间的相关性存在矛盾。

程序：用ASNase处理T细胞和B细胞衍生的ALL细胞系，然后监测细胞增殖、细胞死亡以及ASNS mRNA和蛋白表达。

结果：尽管ASNase治疗后ASNS mRNA升高，但不同的ALL细胞系在向ASNS蛋白的转化方面差异很大。尽管ASNS mRNA水平并不一致地反映ASNase敏感性，但ASNS蛋白与ASNase诱导的细胞死亡呈负相关。ASNS在ASNase敏感细胞系中的表达导致ASNase耐药性增强，相反，siRNA介导的ASNS表达抑制促进了药物敏感性的增加。

结论：这些观察为ALL细胞的ASNase敏感性提供了解释，并证明了测量ASNS蛋白而非mRNA在预测ASNase反应性中的重要性。

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数字

图1。
图1。
所有细胞株都显示出不同的生长模式和对ASNase治疗的敏感性。将5个ALL衍生细胞系稀释至50×104细胞/ml，用1 IU/ml的ASNase处理指定时间。处理36小时后，给细胞注入新鲜培养基。绘制总活细胞数（顶面板）或细胞存活率百分比（底面板）与ASNase治疗时间的关系。结果显示为三个独立实验的平均值±标准偏差。
图2。
图2。
ASNase浓度对ALL细胞株细胞死亡的影响。ALL细胞稀释至50×104毫升−1然后将100μl的等分试样放入96 well板的每个孔中。用ASNase处理72小时后，测定细胞存活率。显示的结果是三个独立实验的平均值±标准偏差，为了清楚起见，ASNase低于0.1 IU/ml的治疗数据显示为插入数据。
图3。
图3。
ASNase治疗期间ALL细胞系中ASNS mRNA和蛋白的表达。将所有细胞稀释至50×104细胞/ml，用1 IU/ml的ASNase处理指定时间。治疗后36小时更换培养基。（A组）在每个时间点收集RNA，并使用ASNS和GAPDH特异性引物进行定量RT-PCR。将ASNS mRNA水平标准化为GAPDH水平，并绘制时间0时相对于MOLT-4P细胞的倍数诱导。（B组和C组）收集全细胞提取物，并对ASNS或肌动蛋白进行免疫印迹（B组），并通过密度测定法对结果进行量化（B组与C组）。在图B中，免疫印迹和定量数据，标准化为肌动蛋白水平，显示了ASNS蛋白的基础量（时间=0小时）。在面板C中，数据是相对于MOLT4-P细胞在时间=0小时时的值绘制的。显示的结果是三个独立实验的平均值+标准偏差，以及那些显著不同的值(P（P）<0.05）。面板D显示了ASNase IC之间的关系50ASNS蛋白或mRNA表达。对于三个亲本细胞系（MOLT-4P、NALM-6和REH），估计IC50将图2数据中的ASNase敏感性值与面板A和C中显示的ASNS蛋白（上部）或ASNS mRNA（下部）的相对量进行比较。
图4。
图4。
儿童ALL主要患者样本中ASNS蛋白含量。从最初诊断时获得的所有患者样本中制备全细胞提取物。样本（15μg/lane）通过免疫印迹分析ASNS或肌动蛋白水平。作为相对丰度的参考，还包括来自MOLT-4P和MOLT-4R细胞的细胞提取物。
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