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.2007年3月至4月;11(2):315-26.
doi:10.1111/j.1582-4934.2007.0024.x。

硫化氢在急性胰腺炎中作为炎症介质:使用分离的小鼠胰腺腺泡细胞的体外研究

附属公司

硫化氢在急性胰腺炎中作为炎症介质:使用分离的小鼠胰腺腺泡细胞的体外研究

拉马萨米·塔米日塞尔维等。 细胞与分子医学杂志. 2007年3月至4月.

摘要

以L-半胱氨酸为原料,通过胱硫醚-γ-淀粉酶(CSE)和胱硫苷-β-合成酶(CBS)的作用合成硫化氢(H(2)S)。我们早些时候已经证明H(2)S是炎症介质。然而,其机制尚不清楚。在本研究中,我们研究了分离的小鼠胰腺腺泡中H2S的存在和H2S合成酶CSE和CBS的表达。将小鼠胰腺腺泡细胞与或不与氯化物(10(-7)M)孵育30和60分钟。Caerulein增加了H(2)S和CSE mRNA表达水平,而CBS mRNA表达降低。此外,用CSE抑制剂DL-前列腺素甘氨酸(PAG,3 mM)预处理的细胞减少了蓝绿色处理细胞中H(2)S的形成,这表明CSE可能是参与小鼠腺泡细胞中H2S形成的主要酶。此外,P物质(SP)在腺泡中的浓度以及SP基因(前胰激肽-A,PPT-A)和神经激肽-1受体(NK-1R)的表达,即SP的主要受体,在促分泌型青霉素处理的腺泡细胞中增加。PAG抑制内源性H(2)S生成显著抑制腺泡中SP浓度、PPT-A表达和NK1-R表达。为了确定H(2)S本身是否引起腺泡细胞的炎症,用H(2 S)供体药物硫化钠(NaHS)(10、50和100μM)处理细胞,这导致腺泡细胞中SP浓度和PPT-a和NK1-R的表达显著增加。这些结果表明,H2S的促炎作用可能通过SP-NK-1R相关途径在小鼠胰腺腺泡细胞中介导。

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数字

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硫化氢(H2S) 氯霉素诱导的小鼠胰腺腺泡细胞中的浓度。将新鲜制备的胰腺腺泡细胞与或不与蓝绿色素(10−7M持续30分钟和60分钟)。H(H)2按照“材料和方法”一节中的描述测量S浓度。结果显示为至少六次单独测定的平均值±标准误差***当蓝精灵处理的细胞(60分钟)与对照细胞(60分钟)比较时,P<0.001。
2
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对照组和氯霉素处理的小鼠胰腺腺泡细胞中胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)和胱硫苷-β-合成酶(CBS)mRNA的表达。(A类)对照组CSE和氯霉素(10)的RT-PCR−7M处理30和60分钟)。这些图表示由六个独立实验产生的CSE带的光密度,这些实验用18S的表达式进行了归一化***当蓝精灵处理的细胞(60分钟)与对照细胞(60分钟)比较时,P<0.001。(B类)对照组和氯霉素处理的腺泡细胞中CBS的RT-PCR。这些图表示由六个独立实验生成的CBS带的光密度,这些实验用18S的表达式进行了归一化***与对照细胞(0小时)相比,当用蓝绿色素处理的细胞(60分钟)时,P<0.001。
三
DL-丙二醇甘氨酸(PAG)对H的影响2氯化物处理的小鼠胰腺腺泡细胞的S合成活性。(A类)将新鲜制备的胰腺腺泡细胞与不同浓度的PAG(2-5 mM)在37°C下培养30和60分钟。之后,使用颗粒检测H2S合成活性。结果显示为至少六次单独测定的平均值±标准误差***当3 mM PAG处理的细胞(60分钟)与对照细胞(60 min)进行比较时,P<0.001。(B类)新鲜制备的胰腺腺泡细胞在caerulein(10−7M治疗30和60分钟)。评估胰腺腺泡细胞匀浆合成H的能力2S来自外源性L-半胱氨酸。结果显示为至少六次单独测定的平均值±标准误差***与对照细胞(60分钟)相比,当蓝绿色处理细胞(60 min)时,P<0.001***与PAG预处理细胞(60分钟)相比,当蓝绿色处理细胞(60min)时,P<0.001。
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PAG治疗减弱了氯霉素诱导的小鼠胰腺腺泡细胞中P物质(SP)水平的升高。新鲜制备的胰腺腺泡细胞在caerulein(10−7M持续60分钟)。按照“材料和方法”一节所述测量P物质水平。结果显示为至少六次单独测定的平均值±标准误差***与对照细胞(60分钟)相比,当蓝绿色处理细胞(60 min)时,P<0.001*与PAG预处理细胞(60min)相比,当蓝绿色素处理细胞(60 min)时,P<0.05。
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PAG治疗抑制了由氯霉素诱导的小鼠胰腺腺泡细胞中前胰激肽-A(PPT-A)和神经节素-1受体(NK-1R)mRNA表达的上调。(A类)对照组、氯霉素治疗组(10−7M处理60分钟)和PAG预处理(3 mM)细胞(氯霉素处理前30分钟)。这些图表示PPT-A谱带的光密度,这些谱带是由六个独立实验生成的,并用18S的表达式进行了归一化***对照组和经蓝绿色素处理的细胞之间P<0.001。(B类)对照组、青霉素治疗组(10−7M持续60分钟)和PAG预处理的(3mM)(在银合欢素处理前60分钟)细胞。这些图表示NK-1受体条带的光密度,这些条带是由六个独立的实验产生的,这些实验用18S的表达进行了标准化***caerulein和PAG预处理细胞之间的P<0.001。
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H的影响2供者硫氢化钠(NaHS)对胰腺腺泡细胞SP水平的影响。用NaHS(10、50和100μM)处理新鲜制备的胰腺腺泡细胞30分钟。按照材料和方法中的描述测量P物质水平。结果显示为至少六次单独测定的平均值±标准误差**对照组和NaHS诱导的细胞之间P<0.01。
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H(H)2硫供体氢硫酸氢钠(NaHS)诱导小鼠胰腺腺泡细胞中PPT-A和NK-1R mRNA的表达。(A类)对照细胞和NaHS处理的(10、50和100μM)细胞中PPT-A mRNA的表达。这些图表示PPT-A条带的光密度,这些条带是由六个独立的实验产生的,这些实验用β-肌动蛋白的表达进行了归一化*对照组和NaHS处理的细胞之间P<0.05。(B类)对照细胞和NaHS处理的(10、50和100μM)细胞中NK-1R mRNA的表达。这些图表示NK-1R条带的光密度,这些条带是由六个独立实验产生的,这些实验用β-肌动蛋白的表达进行了归一化***对照组和NaHS诱导的细胞之间P<0.001。

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