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.2006;1(3):1267-72.
doi:10.1038/nprot.2006.186。

体内单细胞电穿孔法转移DNA和大分子

附属公司

体内单细胞电穿孔法转移DNA和大分子

珍妮弗·贝斯特曼等。 Nat协议. 2006.

摘要

单细胞电穿孔允许使用改良的贴片电极和普通电生理设备将质粒DNA或大分子转染到单个活细胞中。该协议针对非洲爪蟾蝌蚪大脑与DNA、右旋糖酐、吗啉酸及其组合的快速体内电穿孔进行了优化。有经验的用户每小时可以电击大约40只蝌蚪。该技术可以适用于其他带电转移材料以及其他系统和组织,在这些系统和组织中,细胞可以用微量移液管靶向。在视觉引导下,将一个充满转移材料的电极放置在蝌蚪大脑富含细胞体的区域,并施加一系列电压脉冲,对附近的细胞进行电穿孔。我们展示了成功电穿孔单细胞的示例、常见问题的实例和故障排除建议。单细胞电穿孔是一种负担得起的荧光标记和基因操纵单个细胞的方法。这种强大的技术可以在正常环境下观察单个细胞。

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