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.2007年4月9日；177(1):151-62.
doi:10.1083/jcb.200701086。 Epub 2007年4月2日。

c-Met对皮肤伤口愈合至关重要

Jolanta Chmielowiec公司 1, 马尔戈扎塔·博罗威克, 马库斯·莫克尔, Theresia斯特拉达尔, 芭芭拉·蒙兹, 萨宾·沃纳, 尤尔根·威兰德, 卡门·伯奇梅尔, 沃尔特·伯奇梅尔
附属公司

c-Met对皮肤伤口愈合至关重要

Jolanta Chmielowiec公司等。 J细胞生物学. .

摘要

皮肤的伤口愈合是成年哺乳动物的一个重要再生过程。我们检测了条件突变小鼠的伤口愈合情况，其中编码肝细胞生长因子/分散因子受体的c-Met基因通过cre重组酶在表皮中突变。c-Met缺乏的角质形成细胞无法促进皮肤伤口的上皮化。在条件c-Met突变小鼠中，伤口闭合稍有减弱，但仅由少数（5%）逃脱重组的角质形成细胞发生。这表明创伤过程选择并扩增了表达功能性c-Met受体的残余细胞。我们还培养了条件c-Met突变小鼠皮肤的原代角质形成细胞，并在划痕试验中对其进行了检测。此外，残留的少量c-Met阳性细胞也能闭合划痕。我们的数据表明，c-Met信号传导不仅控制胚胎发生过程中的细胞生长和迁移，而且对皮肤伤口中过度增殖上皮的产生至关重要，从而对成人的基本再生过程至关重要。

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数字

图1。
图1。
创面愈合过程中HGF/SF和c-Met的表达。（A） 受伤后3-5天的伤口部分计划。伤口边缘的角质形成细胞（红色）增殖并沿受伤真皮向下迁移，形成所谓的HE（箭头）。D、 真皮；Es，焦痂；F、 脂肪组织；G、 肉芽组织。（B和C）损伤后1（B）和3 d（C）用HGF/SF探针对受伤皮肤进行原位杂交。请注意，第一天的HGF/SF在毛囊和血栓周围表达，而血栓是炎症细胞积聚和浸润伤口的地方。伤后3d，HGF/SF在HE中高表达。（E和F）损伤后用c-Met探针1（D）和3d（E）进行原位杂交。请注意，c-Met在表皮、毛囊和受伤后第3天的HE中表达。（D和G）用HGF/SF（F）和c-Met（G）的感觉探针进行原位杂交。棒材，50μm。
图2。
图2。
皮肤特异性c-Met突变小鼠的产生和分析。（A） c-Met非结合等位基因和重组等位基因的示意图。编码ATP结合位点（红框）的c-Met基因的外显子15两侧是loxP位点（三角形），在K14-cre诱导重组后被切除。蓝色方框表示外显子14和16。指出重组前后BamHI消化产生的限制性片段的大小。B、 BamHI；P、 压力。（B） 对不同年龄（12周龄、E17.5和P8）的对照和条件c-Met突变小鼠的表皮进行Southern blot分析。（C） 条件C-Met突变小鼠不同器官的Southern blot分析。（D–G）Z/AP皮肤切片双重染色；K14-cre小鼠（Lobe等人，1999；Huelsken等人，2001）lacZ公司（蓝色，非合成）和碱性磷酸酶活性（黄色，重组）。（E） 高倍镜下显示一个未结合的表皮角质形成细胞区域（蓝色斑块）。更高的放大倍数也显示了两个独立的毛囊（F和G）；注意，凸起区域包含重组（黄色）细胞。毛囊周围的起毛肌细胞是非结合的（蓝色）。（H） Z/AP伤口切片碱性磷酸酶和β-半乳糖苷酶活性的双重染色；K14-cre小鼠。注意，在未损伤的表皮和HE中观察到K14-cre诱导的重组。（一） 使用针对K14（红色）和纤维连接蛋白（绿色）的抗体对对照小鼠伤口切片进行免疫组织学分析。（J） 对照组和条件c-Met突变组的毛囊周期。用苏木精/伊红染色的对照和条件c-Met突变皮肤的矢状面切片，位于P1（第一生长期）、P5（第一生长期）、P8（第一生长发育期）、P18（第一分化期）、P20（第一休止期）和P30（第二生长期）。棒材：（D）50μm；（E–F）20μm；（G-I）100μm。
图3。
图3。
对照和条件c-Met突变小鼠的伤口愈合。（A和D）受伤后3（A）和5（D）天，对照和突变小鼠伤口边缘切片的苏木精/伊红染色。只显示了一半伤口（完整伤口的示意图见图1）。（B和E）伤后第3（B）和第5（E）天伤口切片的Masson三色染色。（C和F）使用针对角蛋白6（红色）和纤维连接蛋白（绿色）的抗体，对受伤后3（C）和5（F）天的对照和突变小鼠的伤口切片进行免疫组织学分析。箭头标记HE。Es，焦痂；F、 脂肪组织；G、 肉芽组织；HF，毛囊。棒材，100μm。
图4。
图4。
对照和条件c-Met突变小鼠伤口愈合的量化。（A） 对照小鼠和突变小鼠的伤口闭合动力学（见材料和方法）。（B） 对照和突变小鼠创伤后第3、5和7天HE面积的定量；仅使用伤口中部的切片进行定量。（C） 受伤后3、5和7天，对照组和突变组小鼠HE中角质形成细胞的增殖，通过上皮细胞中磷酸化H istone 3阳性细胞核的比例进行评估（见材料和方法）。A类t吨伤后3d，对照组和突变体之间观察到显著差异。P=0.01。（D） 损伤后3、5和7天，对照组和突变组小鼠HE中角质形成细胞的增殖，通过上皮中BrdU阳性细胞核的比例进行评估。损伤后5天，对照组和突变体之间观察到显著的统计差异。P=0.01。误差条代表SD。
图5。
图5。
在条件c-Met突变小鼠中，只有残留的c-Met阳性角质形成细胞对伤口HE有贡献。（A和B）通过激光捕获显微切割分离HE。显示了激光捕获显微切割（A）之前和之后的伤口截面。（C） 条件C-Met突变小鼠后表皮和增生上皮的Southern blot分析。收集伤后第3天（中部）和第5天（右侧）创面的显微解剖无底表皮和显微解剖增生上皮。图中显示了来自不同池显微解剖组织的两种独立制剂的Southern印迹。注意，条件c-Met突变小鼠损伤后第5天的HE仅由含有非结合c-Met的细胞形成弗洛克斯等位基因，但不是重组c-MetΔ等位基因。第3天，可以看到重组细胞和非重组细胞的1:1混合物（中间）。c-Met公司无效的等位基因也存在，因为杂合子c-Metflox/null采用小鼠进行条件诱变。（D–G）损伤后5天，使用抗磷酸化-c-Met抗体（D和E中的红色免疫荧光，F和G中的棕色免疫组织化学）对对照和条件突变小鼠的伤口切片进行免疫组织学分析。注意，在条件c-Met突变小鼠的皮肤中，HE（概述）中的细胞呈磷酸化c-Met阳性。箭头标记低增殖上皮层中的磷酸化-c-Met阳性细胞。棒材，100μm。
图6。
图6。
原代角质形成细胞细胞培养中的划痕愈合：c-Met阳性的原代角质细胞优先迁移到划痕中。从对照组（A）和条件c-Met突变小鼠（B和c）的新生皮肤中分离出原代角质形成细胞。划痕损伤后，在HGF/SF或TGFα存在下进一步培养细胞。分别在划伤后0、24、48和96小时拍摄照片。注意，来自条件突变小鼠的培养物中的伤口只有在HGF/SF存在的情况下96小时后才愈合。（D） 用HGF/SF刺激24小时后，来自对照组和条件c-Met突变小鼠的原代角质形成细胞的增殖，通过磷酸化-胆固醇3抗体染色（红色）进行评估。一条虚线标记划痕边缘。用鬼笔肽（绿色）进行反染色。（E） 在D中所述的实验中，用HGF/SF刺激伤口边缘的原代角质形成细胞增殖的定量。误差条代表SD。（F和G）从对照皮肤和条件c-Met突变皮肤分离的原代角朊细胞被划伤，并与HGF/SF进一步培养。24、48和96小时后，用抗磷酸化c-Met抗体（绿色）对细胞进行染色。通过YO-PRO染色（红色）观察细胞核。值得注意的是，对照组（F）中的许多细胞在质膜上显示出磷酸-c-Met染色的鹅卵石图案。在来自条件突变小鼠（G）皮肤的群体中，含有磷酸化-c-Met的细胞最初很少见（在24小时时），但在96小时后，它们在抓伤区域大量存在（用箭头标记）。划痕的原始边缘用虚线标记。棒材：（A–D）100μm；（F和G）50μm。
图7。
图7。
在HGF/SF存在的情况下，来自条件c-Met突变小鼠的角质形成细胞不会在划伤边缘重新排列其细胞骨架。刮伤后24小时，用针对vinculin（A）、halloidin（A和D）、VASP（B）、paxillin（c）、RhoA（D）和γ-微管蛋白（E）的抗体对来自对照和条件c-Met突变小鼠的角质形成细胞进行染色。箭头标记细胞后部新形成的焦点接触（A–C）和RhoA（D）。箭头标记突变体中RhoA的细胞质和核周定位（图7D，右）。虚线表示伤口的边缘。棒材：（A–D）50μm；（E） 20微米。
图8。
图8。
来自条件c-Met突变小鼠的角质形成细胞经HGF/SF治疗后，信号传导被阻断，但TGFα未治疗。（A） 对来自对照和条件c-Met突变小鼠的角质形成细胞中的磷酸化Erk1/2、总Erk1/2，磷酸化Akt、总Akt，磷酸化Gab1和磷酸化PAK1/2进行Western blot分析。用HGF/SF或TGFα刺激细胞0、10或30分钟。注意，HGF/SF刺激后，条件突变小鼠培养的角质形成细胞中的Erk1/2、Akt、Gab1和PAK1/2未被激活（磷酸化）。（B） A中所示的蛋白质印迹上磷酸化-PAK1/2信号的定量，通过像素强度进行评估。
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    Mullin JA、Rahmani E、Kiick KL、Sullivan MO。 Mullin JA等人。 Bioeng Transl Med.2023年12月28日；9（3）：e10642。doi:10.1002/btm2.10642。电子采集2024年5月。 Bioeng Transl Med.2023年。 PMID：38818118 免费PMC文章。 审查。
  • 皮肤伤口愈合的细胞和分子机制。
    佩尼亚OA，Martin P。 Peña OA等人。 Nat Rev Mol细胞生物学。2024年8月；25(8):599-616. doi:10.1038/s41580-024-00715-1。Epub 2024年3月25日。 Nat Rev Mol细胞生物学。2024 PMID：38528155 审查。
  • 脂肪间充质干细胞衍生条件培养基和TGF-β1对体外人角质形成细胞的影响。
    Ademi H、Michalak-Micka K、Moehrlen U、Biedermann T、Klar AS。 Ademi H等人。 国际分子科学杂志。2023年9月29日；24(19):14726. doi:10.3390/ijms241914726。 国际分子科学杂志。2023 PMID：37834173 免费PMC文章。
  • 生长因子在糖尿病创面治疗中的作用。
    郑SY，万XX，宾夕法尼亚州坎贝，罗Y，胡XM，刘YF，单JQ，陈YW，熊K。 郑SY等。 世界糖尿病杂志。2023年4月15日；14(4):364-395. doi:10.4239/wjd.v14.i4.364。 世界糖尿病杂志。2023 PMID：37122434 免费PMC文章。 审查。
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    Bubin R、Uljanovs R、Strumfa I。 Bubin R等人。 国际分子科学杂志。2023年4月10日；24(8):7030. doi:10.3390/ijms24087030。 国际分子科学杂志。2023 PMID：37108193 免费PMC文章。 审查。
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    1. Amendt，C.、A.Mann、P.Schirmacher和M.Blessing。角质形成细胞对TGF-β介导的生长限制和凋亡诱导的抵抗加速了皮肤伤口的再上皮化。细胞科学杂志。115:2189–2198.-公共医学
    1. Ashcroft、G.S.、X.Yang、A.B.Glick、M.Weinstein、J.L.Letterio、D.E.Mizel、M.Anzano、T.Greenwell Wild、S.M.Wahl、C.Deng和A.B.Roberts。1999。缺乏Smad3的小鼠表现出加速的伤口愈合和受损的局部炎症反应。自然细胞生物学。1:260–266.-公共医学
    1. Bevan，D.、E.Gherardi、T.P.Fan、D.Edwards和R.Warn。2004年。HGF/SF在皮肤伤口修复中的多种有效活性。《病理学杂志》。203:831–838.-公共医学
    1. C.伯奇迈尔和E.格拉迪。HGF/SF及其受体c-Met酪氨酸激酶的发育作用。趋势细胞生物学。8:404–410.-公共医学
    1. 伯奇迈尔、C.、W.伯奇迈耶、E.Gherardi和G.F.Vande Woude。2003年。Met、转移、运动等。自然修订版分子细胞生物学。4:915–925.-公共医学

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