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.2007年7月至8月;3(4):300-22.
doi:10.4161/auto.3910。 Epub 2007年7月19日。

大鼠肝脏自噬体膜相关蛋白的蛋白质组学分析

附属公司

大鼠肝脏自噬体膜相关蛋白的蛋白质组学分析

安德斯·弗拜等。 自噬. 2007年7月至8月.

摘要

通过双向(2D)凝胶电泳(zoom gels,pl 4-7和6-9)分离纯化的大鼠肝脏自噬体膜相关蛋白,并进行银染,通过MALDI-TOF质谱鉴定。在超过1500个可检测的蛋白点中,58个(来自39种不同的已知蛋白)至少是自噬体膜相对于细胞质膜的两倍(且显著)富集。所有这些膜相关蛋白也都存在于胞浆中,其中许多是截短的酶变体,预期起到结合作用而非酶功能。11个蛋白质高度富集(与理论最大值25倍一致),对应于自噬体界膜中的专属膜定位。其中三种是甲基转移酶:甜菜碱:同型半胱氨酸甲基转移酶(五种变体);邻苯二酚O-甲基转移酶(一个磷酸化和一个非磷酸化变体)和蛋氨酸腺苷转移酶,可能表明膜成分的甲基化/去甲基化可能在自噬中起作用。第四种高度富集的自噬体蛋白磷脂酰乙醇胺结合蛋白特别有趣,因为自噬标记蛋白LC3/Atg8通过与磷脂酰乙醇酰胺共价结合(形式为LC3-II)与自噬体膜相连。LC3-II在银染2D凝胶上无法检测到,但免疫印迹显示其在自噬体膜中高度富集。其他高富集蛋白包括热休克同源蛋白Hsc70(一个短变异体和一个长变异体)、过氧化物酶原2、过氧化物酶原6(两个变异体。Hsc70是一种在聚集蛋白的识别和蛋白酶体降解以及某些胞质蛋白的溶酶体膜摄取和降解(伴侣介导的自噬)中起重要作用的伴侣蛋白,可以想象,在变性或聚集蛋白质的自噬清除(聚集)中也可能起到识别作用。适度富集(2-14x)的自噬体膜相关蛋白包括极高比例的药物代谢酶,如几种谷胱甘肽S-转移酶、硫转移酶和芳香烃/类固醇氧化还原酶。如果这些蛋白质的自噬功能是识别蛋白质药物加合物,那么它们可以与过氧化物酶类、伴侣蛋白和甲基代谢酶一起,使吞噬细胞(自噬体分隔膜的隔离前体)能够很好地检测和清除氧化变性的蛋白质,超甲基化、药物内收或其他机制。

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