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.2007年3月27日;104(13):5318-23.
doi:10.1073/pnas.0701078104。 Epub 2007年3月21日。

MitoNEET是一种含铁的线粒体外膜蛋白,调节氧化能力

附属公司

MitoNEET是一种含铁的线粒体外膜蛋白,调节氧化能力

桑德拉·威利等。 美国国家科学院程序. .

摘要

噻唑烷二酮(TZD)类胰岛素增敏药物的成员广泛用于治疗2型糖尿病。吡格列酮是TZD家族的一员,已被证明与名为mitoNEET的蛋白质特异结合[Colca JR、McDonald WG、Waldon DJ、Leone JW、Lull JM、Bannow CA、Lund ET、Mathews WR(2004)Am J Physiol 286:E252-E260]。生物信息学分析表明,丝裂原网是一个蛋白质小家族的成员,其中包含一个被注释为CDGSH型锌指的结构域。虽然被标注为锌指蛋白,但丝裂原网不含锌,而是每摩尔蛋白质含有1.6摩尔铁。保守序列C-X-C-X(2)-(S/T)-X(3)-P-X-C-D-G-(S/A/T)-H是这一独特蛋白质家族的一个决定性特征,可能与铁结合有关。定位研究表明,丝裂原网是一种存在于线粒体外膜的完整蛋白质。氨基末端锚定序列将蛋白质与外膜相连,CDGSH结构域朝向细胞质。从mito-NEET缺失小鼠中分离出的线粒体显示出氧化能力降低,这表明mito-NEET是一种重要的含铁蛋白,参与控制线粒体的最大呼吸速率。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

数字

图1。
图1。
丝裂原网蛋白家族。人类mitoNEET、Miner1和Miner2氨基酸序列的比对。人类体内保守的氨基酸以灰色显示。多个物种中不变的氨基酸用黄色表示。CDGSH域用红色条表示。丝裂原网的跨膜结构域用蓝色方框标记。
图2。
图2。
线粒体NEET家族蛋白的定位。(A–C)V5标记的丝裂原内皮细胞的免疫荧光染色(A类),矿工1(B)和Miner2(C类)在COS-7细胞中瞬时转染24小时。MitoNEET家族蛋白呈绿色。丝裂原网和Miner2的克隆化(左侧)MitoTracker Red(MR)(居中)在合并的图像中显示为黄色(赖特). DNA被DAPI染成蓝色。(D类)内源性丝裂原内皮素、线粒体追踪红和融合图像的COS-7细胞免疫荧光成像。
图3。
图3。
MitoNEET通过氨基末端信号序列定向至OMM。(A–D)COS-7细胞中瞬时表达的丝裂原网蛋白的免疫荧光成像:V5标记的全长丝裂原网络(A类),V5标记的丝裂原网缺乏氨基酸1–32(B)、EGFP(C类)和EGFP,其中丝裂原网的氨基酸1–32融合到氨基酸末端(D类). (E类)用免疫前血清(PI)或抗丝裂原内皮素抗体对大鼠肾组织切片中的线粒体进行免疫金电子显微镜染色。(F类)用SDS/PAGE分离大鼠肝线粒体亚组分,并用已知线粒体标记蛋白抗体进行免疫印迹分析。缩写:SMP,亚线粒体颗粒;IMS,膜间空间;VDAC,电压依赖性阴离子通道;SMAC,胱天蛋白酶的第二线粒体激活剂;PTPMTI,线粒体蛋白酪氨酸磷酸酶-1。
图4。
图4。
MitoNEET是一种面向OMM细胞质表面的完整膜蛋白。(A类)去除外周膜蛋白的肿胀大鼠肝线粒体的免疫印迹分析。用200 mM KCl(高盐)或0.1 M Na清洗线粒体2一氧化碳pH 11.5(高pH),通过SDS/PAGE和免疫印迹分离颗粒中残留的蛋白质。(B)胰蛋白酶处理大鼠心脏线粒体(渗透性休克)的SDS/PAGE和免疫印迹分析。(C类)胰蛋白酶处理大鼠心脏线粒体的SDS/PAGE和免疫印迹分析(低pH清洗)。BCL2、B细胞淋巴瘤-2;SMAC,胱天蛋白酶的第二线粒体激活剂;VDAC,电压依赖性阴离子通道蛋白。
图5。
图5。
线粒体NEET蛋白水平影响线粒体最大氧化能力。(A类)线粒体(+/+)(填充条)和(−/−)(开放条)小鼠心脏线粒体的呼吸速率。误差条表示n个=7(+/+)和n个=6(−/−)来自三种不同的制剂(P(P)< 0.01). (B)来自丝裂原网(+/+)和(−/−)小鼠的纯化心肌线粒体的SDS/PAGE和免疫印迹分析。NDUFB6是复合物I的一个亚单位。

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