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.2007年3月27日;104(13):5401-6.
doi:10.1073/pnas.0700794104。 Epub 2007年3月19日。

通过蛋白表达谱鉴定p53靶点

附属公司

通过蛋白表达谱鉴定p53靶点

鲁拜亚特·拉赫曼·罗布利克等。 美国国家科学院程序. .

摘要

p53通过特定靶基因的转录调控触发细胞周期阻滞和凋亡。我们利用丝裂霉素C处理的携带野生型p53的HCT116结肠癌细胞的2D凝胶电泳分析,研究了p53激活对蛋白质组的影响。在重叠的窄pH范围凝胶条中分离出约5800个蛋白点,115个蛋白点在p53激活后表现出显著的表达变化。用质谱法鉴定了55个蛋白点。大多数已鉴定的蛋白质以前与p53没有联系。这些蛋白质可分为不同的功能类别,如mRNA处理、翻译、氧化还原调节和凋亡,这与p53调节多种细胞途径的观点一致。进一步详细研究了五种上调蛋白eIF5A、hnRNP C1/C2、hnRNP-K、层粘连A/C和Nm23-H1以及两种下调蛋白Prx II和TrpRS的p53依赖性调节。对mRNA表达水平的分析表明,在已确定的靶点之间存在转录依赖性和转录依赖性调节。因此,本研究揭示了p53的蛋白靶点,并强调了转录诱导依赖效应在p53诱导的生物反应中的作用。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

数字

图1。
图1。
MMC处理HCT116细胞中p53激活和诱导凋亡。(A类)HCT116的p53免疫染色+/+和p53−/−用10μg/ml MMC处理24小时后的细胞(B)MMC处理HCT116 p53蛋白的Western blot分析+/+和p53−/−细胞表现出对p53的诱导和对几个p53靶点的调节。(C)通过碘化丙啶(PI)染色和FACS分析评估细胞凋亡。
图2。
图2。
7种已鉴定蛋白的p53依赖性表达。(A类,C–H型)凝胶切片显示四个时间点的指示蛋白点的差异表达。(B)PDQuest软件对eIF5A斑点进行3D渲染分析。
图3。
图3。
p53调节蛋白表达。通过PDQuest软件分析量化指示斑点的光密度。图表显示了三次独立凝胶运行的平均值。
图4。
图4。
MMC治疗HCT116 p53在指定时间点的p53依赖性蛋白表达的Western blot分析+/+和p53−/−细胞。β-肌动蛋白作为负载对照。
图5。
图5。
p53的转录调控。(A–G)MMC治疗HCT116 p53中指定时间点指定基因p53依赖性mRNA表达的实时PCR分析+/+和p53−/−细胞。(H(H))p53靶点p21作为阳性对照。

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