Oval cell response in 2-acetylaminofluorene/partial hepatectomy rat is attenuated by short interfering RNA targeted to stromal cell-derived factor-1

doi:10.2353/ajpath.2006.060211

。2006年12月；169(6):2066-74.

doi:10.2353/ajpath.2006.060211。

靶向基质细胞衍生因子-1的短干扰RNA减弱2-乙酰氨基芴/部分肝切除大鼠卵巢细胞的反应

东航郑¹, Seh-hoon噢, 容美美（Youngmi Jung）, 布莱恩·彼得森

附属公司

PMID： 17148669
预防性维修识别码：项目经理1762488
内政部： 10.2353/ajpath.2006.060211

靶向基质细胞衍生因子-1的短干扰RNA减弱2-乙酰氨基芴/部分肝切除大鼠卵巢细胞的反应

东航郑等。美国病理学杂志。 2006年12月。

。2006年12月；169(6):2066-74.

doi:10.2353/ajpath.2006.060211。

作者

东航郑¹, Seh-hoon噢, 容美美（Youngmi Jung）, 布莱恩·彼得森

附属

¹佛罗里达大学医学院病理学、免疫学和实验医学系，美国佛罗里达州盖恩斯维尔100275号邮箱，邮编：32610-0275。

PMID： 17148669
预防性维修识别码：项目经理1762488
内政部： 10.2353/ajpath.2006.060211

摘要

众所周知，基质细胞衍生因子-1（SDF-1）在调节干/祖细胞贩运中起着重要作用。据报道，在肝干或卵圆细胞激活期间，SDF-1在肝脏内上调，这意味着可能在卵圆细胞辅助肝再生中发挥作用。在本研究中，使用重组腺病毒传递的短干扰RNA，在经2-乙酰氨基芴/部分肝切除治疗的大鼠肝脏中敲除SDF-1的表达。这些动物的卵圆细胞反应受到损害，OV6阳性卵圆细胞数量减少就证明了这一点。此外，SDF-1表达下调导致α-脂肪蛋白表达显著下降，这意味着这些动物的卵圆形细胞激活受损。末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP镍标记分析显示，与SDF-1抑制相关的细胞凋亡不明显。相反，Ki67免疫组织化学显示，SDF-1的抑制导致肝细胞增殖减少，这意味着这些动物的修复过程受到抑制。这些结果表明，SDF-1是卵圆细胞激活所需的基本分子。

PubMed免责声明

数字

图1
正常大鼠肝脏和2AAF/PHx大鼠肝脏SDF-1的免疫荧光染色。正常肝脏(A类)和2AAF/PHx(B类)大鼠，第9天。**抄送：**第9天，用正常山羊IgG（阴性对照）2AAF/PHx大鼠替换一级抗体。箭头指向SDF-1阳性肝细胞。在2AAF/PHx大鼠肝脏中央周围区域的大多数肝细胞中可以看到SDF-1（绿色）表达。**抄送：**请注意，在这个模型中，门脉三联体中的大多数细胞都是SDF-1阴性的。答：正常肝脏中未检测到SDF-1表达。在此处使用的双通道异硫氰酸荧光素-Texas红色滤光片下，自体荧光显示为橙色。PT，门静脉三联体；CV，中央静脉。原始放大倍数，×20。

图2
Ad-siSDF可下调2AAF/PHx大鼠肝脏中SDF-1的表达，并抑制这些动物的卵圆细胞反应。答：2AAF/PHx和病毒输注后第9天，PCR检测肝脏中的病毒DNA。用2AAF/PHx处理的第9天肝脏DNA作为阴性对照。B类和**抄送：**使用Ad-scramble治疗的2AAF/PHx大鼠的肝脏切片，第9天。D类和**电子邮箱：**第9天，用Ad-siSDF处理的2AAF/PHx大鼠的肝脏切片。B类和**医生：**SDF-1（绿色）的免疫荧光与DAPI（蓝色）的细胞核进行反染。Ad-siSDF处理的动物肝脏中SDF-1被敲除（比较B类具有D类).C类和**电子邮箱：**Ad-siSDF治疗动物的肝切片H&E染色显示卵圆细胞反应受到抑制(E类)与对照动物比较(C类).箭头在里面B类和D类指向SDF-1阳性肝细胞。箭头在里面C类和E类指向椭圆细胞。原始放大倍数，×20。

图3
siSDF治疗后SDF-1基因敲除和AFP表达降低。Western blot检测大鼠肝脏SDF-1和AFP蛋白水平。从每只动物的肝脏中提取的蛋白质样品（10μg）装载到每条通道中。每个带的相对数量是通过将其总密度归一化为同一车道上的装载控制密度来确定的。Ad-siSDF诱导的RNA干扰导致SDF-1表达显著降低，同时这些大鼠肝脏AFP表达降低(*P（P）*<0.05，学生的吨-测试）。

图4
大鼠肝脏切片的OV6免疫染色。答：用Ad-scramble治疗2AAF/PHx大鼠，第9天。**B类：**括号内区域的高倍放大A类。**抄送：**用Ad-siSDF治疗2AAF/PHx大鼠，第9天。**日期：**括号内区域的高放大率C类在Ad-siSDF治疗的动物中观察到较少的OV6-阳性（棕色）卵圆细胞(C类和D类)与对照动物相比(A类和B类).电子邮箱：不同动物组OV6阳性细胞数量的比较。从每组25个随机选择的区域（×40）的切片中计数OV6阳性卵圆细胞。对照组大鼠和Ad-siSDF治疗组大鼠每视野卵圆细胞数分别为88.9±29.8和24.2±17.4（平均值±2 SD，*P（P）*<0.01，学生的吨-测试）。箭头指向椭圆形细胞。原始放大倍数：×10(A类和C类); ×40 (B类和D类).

图5
TUNEL染色在2AAF/PHx大鼠肝脏中未检测到明显的凋亡。答：2AAF/PHx大鼠，第9天。**B类：**2AAF/PHx/Ad-scramble-treated大鼠，第9天。**抄送：**2AAF/PHx/Ad-siSDF治疗大鼠，第9天。箭头指向凋亡细胞（绿色），这些细胞在所有动物的肝脏切片上呈散在分布。此时，所有三组的肝细胞凋亡程度相似。原始放大倍数，×10。

图6
敲除SDF-1阻碍肝细胞增殖。答：2AAF/PHx/Ad-scramble-treated大鼠，第9天。**B类：**2AAF/PHx/Ad-siSDF治疗大鼠，第9天。**抄送：**2AAF/PHx/Ad-scramble-treated大鼠，第13天。**医生：**2AAF/PHx/Ad-siSDF治疗大鼠，第13天。箭头指向增殖的卵圆细胞和箭头指向增殖的肝细胞。原始放大倍数，×20。**电子邮箱：**不同组动物中增殖细胞数量的比较。Ki67阳性细胞（棕色核）作为增殖细胞从每组切片中随机选择的25个区域进行计数。窦内的细胞被有意忽略，因为它们与卵圆形细胞无关。×20放大倍数下，对照大鼠每视野的增殖细胞数为388.7±49.1，*P（P）*<0.01，学生吨-测试）。

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1. Tee LB、Kirilak Y、Huang WH、Morgan RH、Yeoh GC。将大鼠癌前肝脏中的卵圆细胞分化为导管样细胞，并将其置于含乙硫氨酸的胆碱缺乏饮食补充剂中。致癌。1994;15:4116–4124.-公共医学
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