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.2006年11月3日；24(3):331-9.
doi:10.1016/j.molcel.2006.09.013。

PML核体形成机制

天怀参 1, 林惠宽, 保罗·斯卡利奥尼码头, 托马斯·容克, 保罗·潘多尔菲码头
附属公司

PML核体形成机制

田怀深等。 分子电池. .

勘误表in

  • PML核体形成机制。
    Shen TH、Lin HK、Scaglioni PP、Yung TM、Pandolfi PP。 Shen TH等人。 分子细胞。2006年12月8日；24(5):805. doi:10.1016/j.molcel.2006.11.010。Epub 2006年12月7日。 分子细胞。2006 PMID：29654784 没有可用的摘要。

摘要

PML核体（NB）是与转录调控、基因组稳定性、病毒感染反应、凋亡和肿瘤抑制等过程相关的核结构。PML被发现对NB的形成至关重要，因为这些结构并不是在PML空细胞中形成的，尽管PML的加法完全挽救了它们的形成。然而，PML这种结构作用的基础尚不清楚。我们证明PML包含一个SUMO结合基序，该基序独立于其SUMO化位点，并且对于PML-NB的形成来说是非常必要的。我们证明PML环结构域对PML SUMO化和PML-NB的形成至关重要。我们提出了PML-NB形成的模型，其中PML-SUMO化和PML通过SUMO结合基序与SUMO化PML的非共价结合构成了SUMO化蛋白质和/或含有SUMO结合基序的蛋白质随后募集到PML-NB的成核事件。

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数字

图1
图1。PML具有独立于其SUMO化位点的SUMO结合基序
（A） 外显子组织PML公司基因和相应的蛋白质结构域：富含脯氨酸结构域（P）、锌结合盒（B1、B2）、线圈结构域（CC）和环结构域（R）。RING结构域的特征特征（Lorick等人，1999年）以及破坏它的两个点突变如下所示。C、 半胱氨酸、H、组氨酸、x、任何氨基酸。×后面的数字（11，7）表示PML环结构域中半胱氨酸之间的氨基酸数量。PML的假定SUMO结合基序与RanBP2的假定SUMO结合基序对齐，以揭示一致序列，该序列可能由四个大块和疏水性氨基酸组成（以棕色突出显示）。本研究将PML中的VVVI突变为AAAS。还显示了急性早幼粒细胞白血病（APL）中的三个SUMO化位点（用标有S的绿色圆圈表示）和染色体断裂点（用箭头表示）。（B） 研究中使用的PML突变体示意图。环结构域突变（PMLcs）、SUMO结合基序突变（PMLas）、SUMO酰化缺陷突变（PML 3m）、SUM酰化缺陷和SUMO连接基序突变SUMO酸化缺陷的PML与GFP-SUMO1共同免疫沉淀。FLAG标记的PML或PML3m被转染到永生化百万分之一−/−有或没有GFP-SUMO1的MEF。顶部面板：使用抗GFP抗体进行免疫沉淀，使用抗FLAG抗体进行Western blot。下图：在用于免疫沉淀的10%蛋白质输入上使用抗FLAG抗体进行蛋白质印迹。（D） PML-SUMO结合基序是SUMO酸化缺陷的PML和SUMO共同免疫沉淀所必需的。对（B）中描述的FLAG标记的PML及其突变体进行SUMO结合活性分析，如（C）中所示。星号（*）表示交叉反应带。显示了分子量标记（kDa）。（E） 合成PML衍生肽中的SUMO结合基序（VVVI）负责SUMO体外结合活性。重组GST-SUMO1或GST蛋白与VVVI、AAAS或VVKI肽孵育。通过使用针对SUMO1（上图）或GST（中图）的抗体通过蛋白质印迹测定结合的蛋白质。一： 输入（20%），G:GST，S:GST-SUMO1。下部面板显示合成的肽序列。生物素和连接体氨基酸为绿色，PML序列为蓝色，SUMO结合基序为棕色，SUMO-结合基序中的突变氨基酸为黑色。（F） PML-SUMO结合基序在体外介导PML和SUMO相互作用。纯化的重组PMLwt、RING域突变体（PMLcs）或SUMO结合基序突变体（PM Las）与纯化的GST和GST-SUMO1孵育，结合组分（B）以及10%的输入（I）和未结合（U）组分通过SDS-PAGE和Western blot使用针对His（上面板）或GST（下面板）的抗体进行分析。面板之间的数字是GST-SUMO与PML的比率。它们被归一化为PMLwt的值，即设置为1。显示了分子量标记（kDa）。
图2
图2。PML环结构域和SUMO结合基序对PML-NB的形成至关重要
百万分之一−/−永生化MEF转染所示质粒并进行免疫荧光分析。给出了典型的共焦显微镜图像。比例尺，10μm。
图3
图3。PMLwt及其突变体形成的核结构与核仁不重叠
百万分之一−/−永生化MEF转染所示质粒并进行免疫荧光分析。给出了典型的共焦显微镜图像。比例尺，10μm。
图4
图4。PMLwt及其突变体形成的核结构与拼接斑点不重叠
百万分之一−/−永生化MEF转染所示质粒并进行免疫荧光分析。给出了典型的共焦显微镜图像。比例尺，10μm。
图5
图5。PML SUMO化需要PML RING域
（A） PML RING结构域突变显著降低PML SUMO化。用所示质粒转染293T细胞。用抗GFP抗体进行免疫沉淀，用抗FLAG抗体进行Western blot分析（顶面板）。用于免疫沉淀的10%的裂解物也通过Western blot（底部）进行分析（B）百万分之一−/−MEF转染如（A）所示并进行分析。（C） RING结构域突变体PML保持与野生型PML异源二聚的能力。百万分之一−/−如图所示转染MEF。用抗FLAG抗体免疫沉淀细胞裂解物。免疫沉淀和用于免疫沉淀的10%输入物通过免疫印迹法与抗Xpress抗体（顶部面板）和抗FLAG抗体（底部面板）进行分析。星号（*）表示Xpress-PML降级产品。HC：免疫球蛋白重链。LC：免疫球蛋白轻链。显示了分子量标记（kDa）。
图6
图6。PML-NB形成模型
在有丝分裂中，PML的去SUMO化导致PML-NB的分解。因此，PML是由其RBCC基序（显示为二聚体）介导的聚集体。在相间，PML被磺胺酰化。随后，由SUMO结合基序和RBCC基序介导的两个PML分子之间的非共价相互作用促进了集中PML网络的生长，其中SUMO化和/或包含SUMO结合基序的核体蛋白将通过PML提供的SUMO部分和SUMO绑定基序被招募。尽管基于该模型，尚不清楚PML-NB中心的电子致密核心材料在NB生物生成过程中是如何包装的（模型中未显示），但PML-SUMO化很可能与包装过程有关，NB的直径由核心材料的体积决定。红棒：PML二聚体。绿色圆圈：SUMO。浅蓝色圆圈与绿色圆圈相连：氨酰化蛋白。带压痕的深蓝色圆圈：包含SUMO结合基序的蛋白质
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参考文献

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