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.2006年11月；26(21):7871-9.
doi:10.1128/MCB.00573-06。 Epub 2006年8月21日。

Yng1p植物同源域指是一种甲基-雌酮结合模块，可识别赖氨酸4-甲基化组蛋白H3

大卫·G·E·马丁 1, 克里斯汀·巴茨, 史晓兵, 凯·L·沃尔特, 维姬·麦克唐纳, 马丁·沃洛达斯基, 或者戈扎尼, 菲利普·希特, 勒安·豪
附属公司

Yng1p植物同源结构域指是一种识别赖氨酸4-甲基化组蛋白H3的甲基组蛋白结合模块

大卫·G·E·马丁等人。 分子细胞生物学. 2006年11月.

摘要

ING（生长抑制剂）蛋白家族包括一组同源核蛋白，在其羧基末端共享高度保守的植物同源域（PHD）指状结构域。该家族成员存在于翻译后修饰组蛋白的多蛋白复合物中，这表明这些蛋白质在允许各种酶活性与核小体相互作用方面起着普遍作用。酿酒酵母中有三个ING家族成员：Yng1p、Yng2p和Pho23p。Yng1p是NuA3组蛋白乙酰转移酶复合物的一个组分，是NuA3与染色质相互作用所必需的。为了深入了解ING蛋白的功能，我们利用遗传策略来识别Yng1p与组蛋白结合所需的基因。利用YNG1过度表达的毒性作为工具，我们表明Yng1p与组蛋白H3的氨基末端尾相互作用，并且这种相互作用可以被该尾中赖氨酸4甲基化的丢失所破坏。此外，我们绘制了PHD指过度表达毒性所需的Yng1p区域，表明该区域能够在体外结合赖氨酸4-甲基化组蛋白H3，并证明PHD指在体外消除结合的突变在体内不再有毒。这些结果确定了Yng1p PHD指通过识别组蛋白H3赖氨酸4甲基化促进NuA3复合物在染色质处的稳定的新功能。

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数字

图1。
图1。
Yng1p在体内与组蛋白H3尾部相互作用。（A） 对菌株YDM126、YDM127和YDM138进行染色质下拉分析，并用过氧化物酶-抗过氧化物酶（Htb1TAP）或抗-HA抗体（Sas3HA）对所得样品进行Western blotting。（B和C）酵母菌株YLH101（B）或FY2162的十倍系列稀释液HHT2型或p小时2Δ3-29（C） 将含有所示质粒的培养基置于缺乏尿嘧啶的合成完全培养基上，尿嘧啶含有葡萄糖或半乳糖作为碳源，并在30°C下孵育3天。（D） 从指定菌株（FY2162转化为pHHT2型或p小时2Δ3-29)用p变换加林加用免疫印迹法检测HA.+、，存在；−，不存在。
图2。
图2。
Yng1p毒性通过COMPASS组蛋白甲基转移酶复合物的丢失得以挽救。将含有所示质粒的酵母菌株YLH101、YLH211和YLH209（A）以及YLH101，YLH206，YLH220，YLH203，YLH204，YLH298和YLH205（B）的十倍系列稀释液涂布在缺乏以葡萄糖或半乳糖为碳源的尿嘧啶的合成完全培养基上，并在30°C下培养3天。
图3。
图3。
Yng1p与组蛋白H3的相互作用依赖于赖氨酸4。（A） 酵母菌株FY2162的十倍系列稀释液HHT2型，第页时间t2K4R，或phht2K36R型将含有所示质粒的培养基置于不含尿嘧啶的合成完整培养基上，尿嘧啶含有葡萄糖或半乳糖作为碳源，并在30°C下培养3天。（B） 从指定菌株（FY2162转化为pHHT2型或phht2K4R型)用p变换加林加用免疫印迹法检测HA。
图4。
图4。
组蛋白结合需要Yng1p PHD指。（A） 对菌株YDM126、YDM127、YDMA37、YDM153和YLH363进行染色质下拉分析，并用过氧化物酶抗过氧化物酶（Htb1TAP）或抗HA抗体（Sas3HA）对所得样品进行蛋白质印迹。（B） 将含有所示质粒的酵母菌株YLH101的十倍系列稀释液置于缺乏亮氨酸的合成完全培养基上，该亮氨酸含有葡萄糖或半乳糖作为碳源，并在30°C下孵育3天。（C） 携带p加林加（车道1）或p加仑1ΔPHDHA（二十二碳六烯酸）（lane 2）质粒和生长在半乳糖上的质粒进行HA.+的Western blotting，存在；−，不存在。
图5：。
图5：。
Yng1p PHD指结合赖氨酸4-甲基化组蛋白H3。（A和B）用指示的生物素化肽和纯化的GST-Yng1PHD进行组蛋白肽结合分析。显示了带有GST抗体的肽结合GST-Yng1PHD蛋白的蛋白质印迹。输入通道代表下拉分析中使用的GST蛋白质的10%。（C） 500毫微克生物素化组蛋白肽被发现在膜上，并用抗生素抗体进行免疫检测，缺席。
图6。
图6。
The toxicity ofYNG1号机组过度表达与Yng1p-triMeH3K4结合水平相关。（A） Yng1p（开条）、Yng1 PHD指（黑条）、PHD指的协调半胱氨酸和组氨酸残基（下划线）以及突变残基（突出显示）的示意图。（B） 使用指示的生物素化肽和纯化的野生型和突变型GST-Yng1PHD进行组蛋白肽结合分析。显示了带有GST抗体的肽结合GST-Yng1PHD蛋白的蛋白质印迹。输入通道代表下拉分析中使用的GST蛋白质的10%。（C） 将含有所示质粒的酵母菌株YLH101的十倍系列稀释液涂布在缺乏以葡萄糖或半乳糖为碳源的尿嘧啶的合成完整培养基上，并在30°C下培养3天。（D） 从野生型酵母菌株（YLH101）中提取的正常量的全细胞提取物，该酵母菌株携带的质粒表达来自镀锌1启动子和生长在半乳糖上的细胞进行HA的Western印迹。
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