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.1990年3月1日;144(5):1591-9.

在T细胞受体刺激后磷脂酶C激活之前,可以检测到酪氨酸磷酸化的增加

附属公司
  • PMID: 1689750

在T细胞受体刺激后磷脂酶C激活之前,可以检测到酪氨酸磷酸化的增加

C H 6月等。 免疫学杂志. .

摘要

抗磷酸化酪氨酸免疫印迹用于表征人TCR刺激后的酪氨酸磷酸化蛋白。用单克隆抗体连接TCR后2分钟内,至少12种底物上的酪氨酸磷酸化明显增加。酪氨酸磷酸化增加的时间过程分析揭示了不同的模式。135-kDa和100-kDa-底物的磷酸化在5秒内明显增加,而TCR-zeta-chain的磷酸化增加需要用抗CD3单克隆抗体治疗几分钟。这种快速的细胞酪氨酸磷酸化与细胞周期无关,因为它是在刺激静止的T细胞、T细胞母细胞和Jurkat T细胞白血病细胞系后发生的。当TCR复合物通过异共轭抗CD3/CD4单克隆抗体与CD4受体交联时,尽管未检测到新的底物,但酪氨酸磷酸化程度增加。135kDa和100kDa底物的酪氨酸磷酸化增加是特异性的,因为抗HLA I类、抗CD6、抗CD7和抗CD28抗体不引起酪氨酸磷酸化增加。静息T细胞的抗CD4刺激没有导致pp100和pp135的酪氨酸磷酸化增加,这表明CD4相关激酶lck不能解释TCR刺激后观察到的酪氨酸磷酸化。同样,用佛波酯和钙离子载体对细胞进行药物治疗并没有导致这些底物的酪氨酸磷酸化增加,这表明蛋白激酶C或磷脂酶C的激活并不能解释酪氨酸磷酸化度的早期增加。当细胞受到不同形式的TCR刺激时,pp100磷酸化的开始时间和磷酸化程度与钙动员程度相关。当用[3H]肌醇标记细胞并在抗CD3单克隆抗体刺激后进行分析时,根据肌醇1,4,5-三磷酸的出现来测量,135-kDa和100-kDa底物的酪氨酸磷酸化增加先于磷脂酶C的激活。这发生在T细胞母细胞和Jurkat T细胞系中。因此,这些发现表明,酪氨酸磷酸化增加是连接TCR复合物后观察到的最早检测到的信号,并且进一步表明酪氨酸磷酸化可能将TCR与磷脂酰肌醇二磷酸水解信号通路联系起来。

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