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.2006年5月3日；25(9):1906-14.
doi:10.1038/sj.emboj.7601068。 Epub 2006年4月20日。

SUMO结合减弱吉普赛染色质绝缘体的活性

玛雅·卡佩尔森 1, 维克多·G·科尔塞斯
附属公司

SUMO结合减弱吉普赛染色质绝缘体的活性

玛亚·卡佩尔森等。 欧洲工商管理硕士J. .

摘要

染色质绝缘体与独立基因表达域的建立和染色质的核组织有关。据报道，小泛素样修饰物（SUMO）对蛋白质进行翻译后修饰，以调节其活性和亚核定位。我们提供的证据表明，黑腹果蝇吉普赛染色质绝缘体的两个蛋白质成分Mod（mdg4）2.2和CP190被聚合，SUMO与基因组绝缘体位点的子集相关。SUMO结合途径的破坏改善了部分活性绝缘体的增强子阻断功能，表明SUMO修饰起到负调节吉普赛绝缘体活性的作用。Sumoylation不影响CP190和Mod（mdg4）2.2结合染色质的能力，但似乎可以调节吉普赛绝缘体复合体的核组织。结果表明，SUMO偶联可以抑制绝缘体蛋白的长程相互作用，并且可以调节染色质结构域的建立。

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数字

图1
图1
SUMO修改了Mod（mdg4）2.2和CP190在体外各种蛋白质带的大小以kDa表示。Mod（mdg4）2.2的未修改形式为100kDa，CP190的未修改类型为190kDa。CP190的sumoyated形式为220kDa，Mod（mdg4）2.2显示了120和135kDa的两个不同的sumoyated带。(A、 B类)体外sumoylation反应35S标记的CP190（A）或Mod（mdg4）2.2（B）用作底物，存在或不存在SUMO反应成分（SUMO rxm），包括E1、E2酶、SUMO和ATP或dTopors。1号车道，仅CP190；车道2，CP190，带SUMO rxm；泳道3，CP190，带SUMO rxm和在体外-生成的dTopor；车道4，仅Mod（mdg4）2.2；车道5，Mod（mdg4）2.2，带SUMO rxm；车道6，Mod（mdg4）2.2，带SUMO rxm和在体外-生成的dTopor。箭头指向CP190和Mod（mdg4）2.2的汇总形式。(C类)体外用α-SUMO抗体监测存在或不存在SUMO E1和E2、SUMO、Mod（mdg4）2.2或dTopors时的sumoylation反应。箭头指向Mod（mdg4）2.2特定的SUMO-GST共轭。标有星号的低分子量带对应于Ubc9-SUMO-GST。(D类)与谷胱甘肽珠结合的GST-Ubc9或GST与他的6-Mod（mdg4）2.2（无论是否存在His）6-d顶部。沉淀部分和输入蛋白通过SDS-PAGE进行解析，并用α-Mod（mdg4）2.2或α-dTopors抗体进行Western blot。
图2
图2
将Mod（mdg4）2.2和CP190相加体内各种蛋白质带的大小以kDa表示。Mod（mdg4）2.2的未修改形式为100kDa，CP190的未修改类型为190kDa。CP190的酰化形式为220 kDa，Mod（mdg4）2.2显示了120和135 kDa的两个不同的酰化带。(A类)蛋白质提取物果蝇属幼虫在存在或不存在SUMO异肽酶抑制剂（SII）NEM和IAA的情况下制备，通过SDS-PAGE进行解析，并用SUMO抗体进行蛋白质印迹，表明吉普赛人绝缘体蛋白。(B类)野生型生物或指示生物的幼虫蛋白提取物轻水反应堆在SII存在下制备突变体，通过SDS–PAGE进行解析，并用指示蛋白的抗体进行蛋白质印迹。三角形表示凝胶上的提取物含量增加。星号表示抗体识别的非Mod（mdg4）2.2带（Mongelard等, 2002). (C类)野生型（−）或UAS-dTopors公司/ActGAL4（+）幼虫在存在SII的情况下制备，通过SDS–PAGE进行解析，并用指示蛋白质的抗体进行蛋白质印迹。
图3
图3
SUMO与吉普赛人染色质上的蛋白质复合物。白色箭头指示SUMO和绝缘体蛋白之间的共定位位置。DNA用DAPI（蓝色）染色。(A类)用Mod（mdg4）2.2（红色）和SUMO（绿色）抗体对三龄幼虫多线染色体进行免疫染色。(B类)用CP190（红色）和SUMO（绿色）抗体对多烯染色体进行免疫染色。
图4
图4
SUMO结合途径成分的突变促进吉普赛人绝缘体。显示的是腹部、翅膀和眼睛年2爆炸物管理第1页至第11页计算机断层扫描6; +; +,年2爆炸物管理第1页至第11页计算机断层扫描6; +;修改（mdg4）u1型,年2爆炸物管理第1页至第11页计算机断层扫描6; 轻水反应堆5486/表面贴装34493; 修改（mdg4）u1型和年2爆炸物管理第1页至第11页计算机断层扫描6; 轻水反应堆2858/表面贴装3k06307型; 修改（mdg4）u1型雌性苍蝇。
图5
图5
氨酰化不影响CP190和Mod（mdg4）2.2与染色质的结合。DNA用DAPI（蓝色）染色。(A类)野生型多烯染色体的免疫染色，UASlwr/ActGAL4公司和轻水反应堆5/5486具有Mod（mdg4）2.2（红色）和CP190（绿色）抗体的幼虫。(B类)多线染色体的免疫染色年2; +;修改（mdg4）u1型和年2; 轻水反应堆5/5486; 修改（mdg）u1型具有Mod（mdg4）2.2（红色）和CP190（绿色）抗体的幼虫。箭头指向年2轨迹（插图）。
图6
图6
SUMO结合可对抗绝缘体蛋白的核结合。(A类)野生型和非野生型大脑和影像盘二倍体细胞的免疫染色UASlwr/ActGAL4公司具有Mod（mdg4）抗体的幼虫（红色）。(B类)野生型二倍体细胞的免疫染色，修改（mdg4）u1型,轻水反应堆5/5;修改（mdg）u1型和轻水反应堆5486年5月; 修改（mdg）u1型带有CP190抗体的幼虫（红色）。DAPI单独显示在左侧，在叠加图中以蓝色显示。
图7
图7
SUMO修饰对染色质结构域形成的影响模型。染色质环域可以通过远距离的相互作用建立吉普赛人绝缘体复合体，并通过dTopors的系留功能进一步稳定（右）。CP190和Mod（mdg4）2.2的Sumoylation干扰了它们的自我相互作用，导致染色质结构域的破坏（左）。灰色线代表核膜，黄色球体代表核小体。
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参考文献

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