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.2006年5月4日;441(7089):106-10.
doi:10.1038/nature04687。 Epub 2006年3月29日。

癌症分子靶点的功能丧失RNA干扰筛选

附属机构

癌症分子靶点的功能丧失RNA干扰筛选

武恩戈等。 自然. .

摘要

寻找新型癌症治疗药物依赖于分子靶点的识别和验证。癌症的特征包括生长信号的自给自足和避免凋亡;调节这些过程的基因可能最适合治疗性攻击。在这里,我们描述了使用RNA干扰库对癌细胞增殖和存活所需基因进行功能丧失筛查。我们使用多西环素诱导的逆转录病毒载体表达小发夹RNA(shRNAs),构建了一个针对2500个人类基因的文库。我们使用该文库中的逆转录病毒库感染代表弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)两个不同分子亚组的细胞系,称为活化的B细胞样DLBCL和生发中心B细胞样DLBCL。每个载体都被设计成包含一个独特的60-base-pair“条形码”,允许使用条形码序列的微阵列测量转基因细胞群体中单个shRNA载体的丰度。我们观察到,只有在诱导shRNA表达的情况下,在培养三周后,转导细胞中的shRNA载体子集才会被耗尽。在活化的B细胞样DLBCL细胞中,靶向NF-kappaB通路的shRNAs被耗尽,这与该通路在活化的B-细胞样DLBC存活中的重要作用一致。该筛查揭示了CARD11是一个关键的上游信号成分,负责激活的B细胞样DLBCL中组成性IkappaB激酶活性。我们描述的方法可以用于建立癌症的功能分类,并有助于揭示不同于已知癌基因的新的治疗靶点类别。

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