Real time single cell analysis of Bid cleavage and Bid translocation during caspase-dependent and neuronal caspase-independent apoptosis

doi:10.1074/jbc.M511562200

。2006年3月3日；281(9):5837-44.

doi:10.1074/jbc。M511562200。 Epub 2005年12月28日。

caspase依赖性和神经元caspase非依赖性凋亡过程中Bid断裂和Bid移位的实时单细胞分析

马努斯·沃德¹, 马库斯·雷姆, 海科·杜斯曼, 斯拉沃米尔·卡克马尔, Caoimhin G Concannon公司, Jochen H M Prehn先生

附属公司

PMID： 16407197
内政部： 10.1074/jbc。M511562200型

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caspase依赖性和神经元caspase非依赖性凋亡过程中Bid断裂和Bid移位的实时单细胞分析

马努斯·沃德等。生物化学杂志。 2006。

免费文章

。2006年3月3日；281(9):5837-44.

doi:10.1074/jbc。M511562200。 Epub 2005年12月28日。

作者

马努斯·沃德¹, 马库斯·雷姆, 海科·杜斯曼, 斯拉沃米尔·卡克马尔, Caoimhin G Concannon公司, Jochen H M Prehn先生

附属

¹爱尔兰皇家外科学院生理学和医学物理系及RCSI神经科学研究中心，爱尔兰都柏林2号圣史蒂芬格林123号。

PMID： 16407197
内政部： 10.1074/jbc。M511562200型

摘要

Bcl-2同源域（BH）3-纯蛋白将应激信号与进化上保守的线粒体凋亡途径耦合。半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8介导的BH3-only蛋白Bid裂解为截短蛋白（tBid），随后tBid向线粒体的易位与死亡受体信号传导有关。我们利用重组荧光共振能量转移（FRET）Bid探针测定了死亡受体诱导的caspase 3缺陷MCF-7细胞凋亡过程中Bid裂解和tBid移位的动力学。用肿瘤坏死因子α（200 ng/ml）处理的细胞显示Bid-FRET探针在肿瘤坏死因子γ暴露开始后75.4+/-12.6 min快速断裂。Bid-FRET探针的断裂与tBid向线粒体的移位和线粒体膜电位（DeltaPsim）的崩溃相一致。接下来，我们研究了Bid裂解在半胱氨酸蛋白酶非依赖性谷氨酸诱导的兴奋毒性细胞凋亡模型中的作用。用Bid-FRET探针转染大鼠小脑颗粒神经元，并暴露于谷氨酸5分钟。与死亡受体诱导的凋亡相比，神经元显示全长Bid移位到线粒体。这种易位发生在谷氨酸暴露终止后5.6+/-1.7小时，同时伴有DeltaPsim的崩溃。FRET探针也发生了蛋白水解断裂，但仅在其移位至线粒体后25.2+/-3.5分钟。亚分馏实验证实，在兴奋毒性细胞凋亡期间，全长Bid从胞质部分移位至线粒体部分。我们的数据表明，tBid和全长Bid都有能力在细胞凋亡过程中转移到线粒体。

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