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.2005年11月23日；25(47):10815-21.
doi:10.1523/JNEUROSCI.3249-05.2005。

成年小鼠海马祖细胞是神经原性的，但不是干细胞

Natalie D公牛 1, 佩里·F·巴特利特
附属公司

成年小鼠海马祖细胞是神经原性的，但不是干细胞

Natalie D公牛等。 神经科学. .

摘要

本研究的目的是描述成年小鼠海马区增殖前体细胞的特征。鉴于在动物一生中会产生大量新的海马细胞，预计神经干细胞最终负责维持这种发生。虽然人们普遍认为海马体内存在增殖前体，但关于该细胞的分类存在相互矛盾的报道。它是真正的干细胞还是更有限的祖细胞？通过对神经干细胞的严格功能定义和大量体外测定，我们报告称，固有的海马前体是一种能够增殖和多潜能分化的祖细胞，但不能自我更新，因此无限期增殖。此外，有丝分裂原FGF-2比表皮生长因子（EGF）更能刺激这些细胞的增殖。此外，我们发现BDNF对海马前体细胞产生神经元至关重要，在增殖过程中需要BDNF来触发神经元命运。相反，在海马体周围侧脑室的侧壁中发现了真正的神经干细胞。有趣的是，EGF被证明是该细胞更强的有丝分裂因子，这显然是与常驻海马祖细胞不同的前体。这些结果表明，最终负责成年海马神经发生的干细胞位于海马体外，产生祖细胞，迁移到神经发生区并增殖产生新的神经元和胶质细胞。

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数字

图1。
图1。
初级组织解剖图在体外干细胞活性测定。根据成年小鼠脑图谱（Paxinos和Franklin，2001）确定，相对于前角，在-1.22到-2.70 mm之间切割出一层2 mm厚的冠状切片。切片尾侧朝上，用两对弯曲的镊子解剖组织。首先，移除中脑，然后将海马体作为一个整体，轻轻地从胼胝体中分离出来。最后，包括胼胝体在内的pLV被从皮层上掐断。河马，海马；左心室，侧脑室。这张图片来自Paxinos和Franklin（2001）的许可。
图2。
图2。
原代组织同时培养EGF和FGF-2时的增殖细胞频率。A类，初级海马神经圈限制稀释试验(n个= 9; 平均值±SEM）。对数截距（37%阴性孔）给出了每9229个细胞中一个神经球的形成频率。插图，初级海马神经圈的代表性照片。比例尺，100μm。B类，初级pLV神经圈限制稀释试验(n个= 6; 平均值±SEM）。神经球形成频率按每766个细胞一个神经球计算。插图，初级pLV神经圈的代表性照片。比例尺，100μm。
图3。
图3。
长期扩散的可能性在体外在EGF和FGF-2存在的情况下。A类神经集落形成细胞分析中培养初级海马和pLV细胞时的集落直径（单位：毫米）（平均值±扫描电镜）。B类，当在神经球测定中通过多次传代培养原代海马和pLV细胞时，细胞数量的增加（平均值±SEM）。河马。，希波坎普斯。
图4。
图4。
EGF和FGF-2对增殖的不同影响。A类，神经集落形成细胞分析（平均值±SEM）中，当在EGF+FGF-2或每个生长因子存在下分别培养时，初级海马细胞产生的集落直径（微米）。B类，在神经集落形成细胞测定中，在EGF加FGF-2或每种生长因子单独存在的情况下培养原代pLV细胞时的集落直径（毫米）（平均值±SEM）。
图5。
图5。
初级神经球的分化。A-C公司，代表性分化神经球免疫标记GFAP（绿色）和βIII微管蛋白（红色），并用DAPI（蓝色）复染。原发性pLV神经圈(A类)，在EGF和FGF-2存在下生长的初级海马神经层(B类)以及在EGF、FGF-2和BDNF（100 ng/ml）存在下培养的初级海马神经层(C类)如图所示。A类,B类，插图，代表性分化pLV中少突胶质细胞标记物O4（绿色）的免疫标记(A类)和海马(B类)神经球。D类，在神经球增殖的不同时间点，在存在EGF和FGF-2或向海马培养物中添加BDNF（100 ng/ml）的情况下生长后，含有单独GFAP（星形胶质细胞）或GFAP+βIII微管蛋白（神经元）免疫阳性细胞的分化神经球百分比(n个= 3; 平均值±SEM）。E类，当原代海马细胞在BDNF浓度增加的情况下培养时，仅含星形胶质细胞或星形胶质细胞+神经元的分化神经球的百分比(n个= 3; 平均值±SEM）。河马。，希波坎普斯。
图6。
图6。
BDNF对海马神经圈频率和增殖潜能的影响。A类，当细胞在EGF、FGF-2和BDNF的存在下以增加的浓度培养时，初级海马神经圈的频率(n个= 4; 平均值±SEM）。B类，在存在EGF和FGF-2或EGF和BGF-2加BDNF（100 ng/ml）的情况下，在神经集落形成细胞分析中培养初级海马细胞时的集落直径（以微米为单位）。数值为平均值±SEM。
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