跳到主页面内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https公司

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2006年3月；34(3):274-85.
doi:10.1165/rcmb.2005-0277OC。 Epub 2005年11月4日。

β-catenin在急性肺损伤后纤维增殖反应中的作用

象牙·S·道格拉斯 1, 费尔南多·迪亚兹·德尔瓦莱, 罗伯特·韦恩, 诺伯特·F·沃克尔
附属公司

β-catenin在急性肺损伤后纤维增殖反应中的作用

象牙·S·道格拉斯等人。 Am J Respir细胞分子生物学. 2006年3月.

摘要

急性肺损伤后肺泡上皮/毛细血管膜损伤的解决需要协调有效的组织修复，以重建功能性的肺泡上皮/毛细血管膜屏障。我们假设，在小鼠模型中，在深度氧化应激性肺损伤后的恢复和重塑阶段，肺泡芽发育中重要的信号通路被激活。为了验证这一点，我们对暴露于丁基羟基甲苯（BHT，紫罗兰醇）和伴随的亚致死（75%O2）高氧后正处于正常毒性恢复期的小鼠中非经典β-catenin途径蛋白E-cadherin、整合素连接激酶-1和β-catentin的表达进行了表征。小鼠早期出现急性肺损伤，随后出现炎症、胶原沉积、间质细胞增殖和肺结构扭曲。BHT和高氧6天后E-cadherin表达降低，伴随着β-catenin的表达和核定位增强，以及在随后的正常氧恢复期间整合素连接激酶-1的表达增加。这导致共转录调节因子TCF-1和-3以及细胞周期蛋白D1的表达增加。在同一时间点，经BHT醌-甲基化物和高氧治疗8小时和正常氧恢复48小时后，小鼠肺上皮-12细胞的体外增殖比经车用药物治疗的对照小鼠增加2.7倍。尽管存在TUNEL阳性细胞，但经泛酶抑制剂z-ASP治疗的BHT/高氧暴露小鼠的急性肺损伤增加，存活率降低，表明肺细胞坏死增强。BHT/高氧后z-ASP联合治疗的肺中Beta-catenin表达降低。非经典的钙粘蛋白-β-钙粘蛋白轴与BHT/高氧暴露后的纤维增生修复相关，并可能调节上皮增殖和肺基质重塑以及修复，以应对肺损伤。

PubMed免责声明

数字

<b>图1</b>
图1。
BHT/O后2损伤以单核细胞为主的浸润和纤维增生性改变为特征。(A类)锌固定石蜡包埋小鼠肺切片的代表性显微照片(n个=每种情况下为3）。组织病理学H&E（40倍，光学显微镜）(一,c（c）,克,e（电子）,我)和Sirius-red染色（20×，偏光显微镜）检测未成熟（绿色双折射）和成熟（金色双折射）胶原蛋白(b条,d日,（f）,小时,j个). (B类)用比色Sirius-red法测定可提取胶原蛋白总量。数据为μg/右肺胶原平均值±SEM；n个=每种情况下3个右肺*P（P）=0.001与21%O相比2.
<b>图1</b>
图1。
BHT/O后2损伤以单核细胞为主的浸润和纤维增生性改变为特征。(A类)锌固定石蜡包埋小鼠肺切片的代表性显微照片(n个=每种情况下为3）。组织病理学H&E（40×，光学显微镜）(一,c（c）,克,e（电子）,我)和Sirius-red染色（20×，偏光显微镜）检测未成熟（绿色双折射）和成熟（金色双折射）胶原蛋白(b条,d日,（f）,小时,j个). (B类)用比色Sirius-red法测定可提取胶原蛋白总量。所提供的数据为平均胶原蛋白（μg/右肺±SEM）；n个=每种情况下有3个右肺*P（P）=0.001与21%O相比2.
<b>图2</b>
图2。
与单纯高氧暴露相比，BHT/高氧联合暴露会加剧上皮细胞增殖在体外将接种在24孔组织培养板中的亚流入MLE-12细胞单层用BHT-QM（50μM）或载体处理，并在一个密封的常压室中培养，该常压室用95%O冲洗2/5%一氧化碳2或21%O2/5%一氧化碳2在不同的时间段内，恢复常压达48小时。在21%氧浓度下48小时后，荧光分析显示增殖相对于载体2. *P（P）与21%（48小时）对照组相比，<0.01。†P（P）=0.027，与同一时间点的车辆相比（95%[8 h]+21%[48 h]）。数据表示三口井的平均值±SEM；n个=2个实验。
<b>图3</b>
图3。
(A类)BHT/O的影响2全肺钙粘蛋白-连环蛋白粘附连接蛋白表达的损伤与修复。(上部面板)与β-actin相关的指数蛋白的代表性Western blots（前三行分别为ILK-1、E-cadherin和β-catenin）(最下面一行). (下部面板)这些图表示通过密度计对β-肌动蛋白水平进行归一化的量化。数据代表了两个实验(n个=每种情况3）；每种情况下显示三个肺中的一个。(B类)纤维增生性ALI修复中β-catenin的核移位。21%O的肺β-catenin、锌固定和充气肺切片的免疫组织化学和免疫荧光定位的代表性显微照片2(我–四)和BHT/O2d6+d15(v（v）–八)小鼠间质细胞前体免疫染色增强(v（v）;箭头)与…相比(我)通过光学显微镜。双光子荧光显微镜图像（代表每组三个肺）显示叠加处胞质和核β-连环蛋白免疫荧光增强（红色）(不及物动词与ii（ii）)，单色红色通道(vii（七）与三)、和双色共定位图像(八与四). (C类)纤维增生性ALI修复中核β-catenin的共定位增加。通过双光子显微镜图像对核像素的等级和模式进行评分，如插图所示（1+最小核周，2+中等斑点核，3+密集核）。定量评估中不包括形态学鉴定的自身荧光肺泡巨噬细胞。二氨基苯甲醛；Alexafluor 488，伪红色；DAPI，伪绿色。数据表示每个肺的五个高倍视野图像的平均值±SEM；n个=每种情况下3个肺；趋势的chi-square检验P（P）< 0.0001.
<b>图3</b>
图3。
(A类)BHT/O的影响2全肺钙粘蛋白-连环蛋白粘附连接蛋白表达的损伤与修复。(上部面板)与β-actin相关的指数蛋白的代表性Western blots（前三行分别为ILK-1、E-cadherin和β-catenin）(最下面一行). (下部面板)这些图表示通过归一化β-肌动蛋白水平的密度测定法进行量化。数据代表了两个实验(n个=每种情况3）；每种情况下显示三个肺中的一个。(B类)纤维增生性ALI修复中β-catenin的核移位。21%O的肺β-catenin、锌固定和充气肺切片的免疫组织化学和免疫荧光定位的代表性显微照片2(我–四)和BHT/O2d6+d15(v（v）–八)小鼠间质细胞前体免疫染色增强(v（v）;箭头)与…相比(我)通过光学显微镜。双光子荧光显微镜图像（代表每组三个肺）显示叠加处胞质和核β-连环蛋白免疫荧光增强（红色）(不及物动词与ii（ii）)，单色红色通道(vii（七）与三)、和双色同位图像(八与四). (C类)纤维增生性ALI修复中核β-catenin的共定位增加。通过双光子显微镜图像对核像素的等级和模式进行评分，如插图所示（1+最小核周，2+中等斑点核，3+密集核）。定量评估中不包括形态学鉴定的自身荧光肺泡巨噬细胞。DAB，二氨基联苯胺；Alexafluor 488，假彩色红色；DAPI，伪绿色。数据表示每个肺的五个高倍视野图像的平均值±SEM；n个=每种情况下3个肺；趋势的chi-square检验P（P）< 0.0001.
<b>图4</b>
图4。
纤维增生性ALI中β-catenin共转录靶点的表达改变。(A类)通过多重RTPCR表达TCF-1、3和LEF-1。(B类)通过实时qPCR检测TCF-1和TCF-3。全肺RNA BHT/O中GAPDH标准化TCF-1 mRNA拷贝增加2d6+d15与21%O相比2控制；n个=3或4，每种情况如图所示*P（P）< 0.05. (C类)细胞周期蛋白D1蛋白表达与β-连环蛋白轴表达增加相关。全肺裂解物cyclin D1蛋白印迹的肌动蛋白归一化带密度测定。数据表示平均值±SEM，n个=每种情况3*P（P）< 0.05. 插图为代表性印迹（BHT/21%O2波段未显示）。(D类)BHT/O肺切片上细胞周期蛋白D1免疫组化的代表性显微照片2-治疗小鼠和对照组：(我)21%O2, (ii（ii）)BHT/O（BHT/O）2d6中(三)BHT/O（BHT/O）2d6+d8(四)BHT/O（BHT/O）2d6+d15。
<b>图4</b>
图4。
纤维增生性ALI中β-catenin共转录靶点的表达改变。(A类)通过多重RTPCR表达TCF-1、3和LEF-1。(B类)通过实时qPCR检测TCF-1和TCF-3。全肺RNA BHT/O中GAPDH标准化TCF-1 mRNA拷贝增加2d6+d15与21%O相比2控制；n个=3或4，每种情况如图所示*P（P）< 0.05. (C类)细胞周期蛋白D1蛋白表达与β-连环蛋白轴表达增加相关。全肺裂解物cyclin D1蛋白印迹的肌动蛋白归一化带密度测定。数据表示平均值±SEM，n个=每种情况3*P（P）< 0.05. 插入是一个典型的污点（BHT/21%O2波段未显示）。(D类)BHT/O肺切片上细胞周期蛋白D1免疫组化的代表性显微照片2-治疗小鼠和对照组：(我)21%O2, (ii（ii）)BHT/O（BHT/O）2d6中(三)BHT/O（BHT/O）2d6+d8(四)BHT/O（BHT/O）2d6+d15。
<b>图5</b>
图5。
药理学半胱天冬酶抑制增强BHT/O2坏死细胞死亡加重导致ALI。(A类)BHT/O的Klan-Meier生存曲线2-治疗小鼠。初始BHT/O期间z-ASP联合治疗（100μg/小鼠每天腹腔注射）2暴露（BHT/O2+z-ASP 75%，看见图5Ce）在组织学上放大了早期急性肺损伤，与DMSO载体相比，到第6天导致死亡21%(n个=12）BHT/O2d6→21%(n个=12）和车辆+z-ASP d6 75%→z-ASP 21%(n个=5）（对数秩生存BHT/O2+z-ASP 75%与对照，P（P）< 0.03;n个=每组10人）。(B类)BHT/O肺裂解物肌动蛋白正常化裂解caspase-3表达和代表性Western blot的密度比较2d6+z-ASP与BHT/O相比2+车辆处理的动物。数据表示平均值±SEM；n个=每种情况3个*P（P）< 0.05; **P（P）< 0.001. (C类)健康与环境(一,c（c）,e（电子）)或TUNEL阳性细胞（FITC过滤器）与DAPI共同染色以识别细胞核(b条,d日,（f）). BHT/O中存在大量TUNEL阳性细胞2第6天(d日)和z-ASP共治肺(（f）). DAPI，4′6-二氨基-2-苯基吲哚二氢氯化物；TUNEL，末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记。图像代表每个肺部10个高功率场；n个=每种情况3。
<b>图5</b>
图5。
药理学半胱天冬酶抑制增强BHT/O2坏死细胞死亡加重导致ALI。(A类)BHT/O的Klan-Meier生存曲线2-治疗小鼠。初始BHT/O期间z-ASP联合治疗（100μg/小鼠每天腹腔注射）2暴露（BHT/O2+z-ASP 75%，看见图5Ce）在组织学上放大了早期急性肺损伤，与DMSO载体相比，到第6天导致死亡21%(n个=12）BHT/O2d6→21%(n个=12）和车辆+z-ASP d6 75%→z-ASP 21%(n个=5）（对数秩生存BHT/O2+z-ASP 75%与对照，P（P）< 0.03;n个=每组10人）。(B类)BHT/O肺裂解物肌动蛋白正常化裂解caspase-3表达和代表性Western blot的密度比较2d6+z-ASP与BHT/O比较2+经载体处理的动物。数据表示平均值±SEM；n个=每种情况3个*P（P）< 0.05; **P（P）< 0.001. (C类)健康与环境(一,c（c）,e（电子）)或TUNEL阳性细胞（FITC过滤器）与DAPI共同染色以鉴定细胞核(b条,d日,（f）). BHT/O中存在大量TUNEL阳性细胞2第6天(d日)和z-ASP联合治疗的肺(（f）). DAPI，4′6-二氨基-2-苯基吲哚二氢氯化物；TUNEL，末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记。图像代表每个肺部10个高功率场；n个=每种情况3。
<b>图5</b>
图5。
药理学半胱天冬酶抑制增强BHT/O2ALI通过增强坏死细胞死亡。(A类)BHT/O的Klan-Meier生存曲线2-治疗小鼠。初始BHT/O期间z-ASP联合治疗（100μg/小鼠每天腹腔注射）2暴露（BHT/O2+z-ASP 75%，看见图5Ce）在组织学上放大了早期急性肺损伤，与DMSO载体相比，到第6天导致死亡21%(n个=12）BHT/O2d6→21%(n个=12）和车辆+z-ASP d6 75%→z-ASP 21%(n个=5）（对数秩生存BHT/O2+z-ASP 75%与对照，P（P）< 0.03;n个=每组10人）。(B类)BHT/O肺裂解物肌动蛋白正常化裂解caspase-3表达和代表性Western blot的密度比较2d6+z-ASP与BHT/O比较2+经载体处理的动物。数据表示平均值±SEM；n个=每种情况3个*P（P）< 0.05; **P（P）< 0.001. (C类)健康与环境(一,c（c）,e（电子）)或TUNEL阳性细胞（FITC过滤器）与DAPI共同染色以识别细胞核(b条,d日,（f）). BHT/O中存在大量TUNEL阳性细胞2第6天(d日)和z-ASP共治肺(（f）). DAPI，4′6-二氨基-2-苯基吲哚二氢氯化物；TUNEL，末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记。图像代表每个肺10个高功率场；n个=每种情况3。
<b>图6</b>
图6。
BHT/O顺序2-诱导性肺损伤与β-catenin介导的修复。深度氧化应激（例如BHT/O2)结果肺泡上皮损伤，E-cadherin表达减少，β-catenin积聚。深度损伤可导致细胞死亡。再上皮化和修复受ILK-1激活、核β-catenin易位、协同转录调节因子表达增强（TCF 1,3）和细胞周期蛋白D1介导的细胞增殖（BHT/O）调节2d6+d8）。β-catenin活化还介导上皮-间充质转化，导致向基质生成纤维母细胞和肌成纤维细胞的转分化。如果持续存在，则会导致肺部结构变形和纤维增生。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“引用者”文章

工具书类

    1. Adamson IY、Young L、Bowden DH。肺泡上皮损伤和修复与肺纤维化诱导的关系。《美国病理学杂志》1988；130:377–383.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Pan T，Mason RJ，Westcott JY，Shannon JM。大鼠肺泡II型细胞体外抑制肺成纤维细胞增殖。美国呼吸细胞分子生物学杂志2001；25:353–361.-公共医学
    1. Neff TA、Stocker R、Frey HR、Stein S、Russi EW、Buchser E、Leuenberger P、Chiolero R、Perret C、Freeman J等。严重ARDS幸存者肺功能的长期评估。胸部2003；123:845–853.-公共医学
    1. Willis BC、Liebler JM、Luby-Phelps K、Nicholson AG、Crandall ED、du Bois RM、Borok Z。转化生长因子-beta1诱导肺泡上皮细胞上皮-间质转化：在特发性肺纤维化中的潜在作用。《美国病理杂志》2005年；166:1321–1332.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Marshall RP、Bellingan G、Webb S、Puddicombe A、Goldsack N、McAnulty RJ、Laurent GJ。急性呼吸窘迫综合征早期发生纤维蛋白增生并影响预后。美国Respir Crit Care Med杂志2000；162:1783–1788.-公共医学

出版物类型

MeSH术语