跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2005年10月；7(10):1021-8.
doi:10.1038/ncb1302。 Epub 2005年9月18日。

Bcl-X（L）对InsP3R调控的内质网凋亡通路

卡尔·怀特 1, 池莉, 杨军（Jun Yang）, 娜塔莉亚·贝特伦科, 穆尼斯瓦米·马德什, 克雷格·B·汤普森, J凯文·福斯科特
附属公司

Bcl-X（L）对InsP3R调控的内质网凋亡通路

卡尔·怀特等。 Nat细胞生物学. 2005年10月.

勘误表in

  • 自然细胞生物学。2006年3月；8(3):299

摘要

Bcl-2蛋白家族成员调节线粒体外膜的通透性以控制细胞凋亡。然而，这些蛋白质也定位于内质网（ER），其功能意义尚存在争议。在此，我们提供证据表明，抗凋亡Bcl-2蛋白调节肌醇1,4,5-三磷酸受体（InsP（3）R）ER-Ca（2+）释放通道，导致细胞凋亡抵抗增加，线粒体生物能增强。抗凋亡Bcl-X（L）与InsP（3）R的羧基末端相互作用，使内质网膜中的单个InsP（3。促凋亡蛋白Bax和tBid通过阻断Bcl-X（L）与InsP（3）R的生化相互作用来对抗这种效应。这些数据支持一种新的模型，其中Bcl-X（L）是InsP（3R的直接效应器，增加了其对InsP（三）的敏感性，并使ER Ca（2+）的释放更敏感地与细胞外信号耦合。因此，通过Ca（2+）依赖性信号转导，内质网与线粒体之间更为敏感和动态的耦合，可增强细胞生物能量学并维持生存，从而保护细胞免受凋亡。

PubMed免责声明

数字

图1
图1
Bcl-X的相互作用L（左）使用InsP三R(一)Bcl-X公司L（左）绑定到全长类型1、2和3 InsP三R.DT40-InsP裂解液三稳定表达大鼠1型InsP的R-KO细胞三R和内源性表达2型和3型InsP的COS-7细胞三R、 与GST–Bcl-X孵育L（左），并绑定InsP三用异形特异性抗体检测R（前三组）。底部面板：内源性Bcl-X的联合免疫沉淀L（左）和类型3 InsP三来自COS-7细胞的R。(b条)全长InsP的结构域结构三R及其C末端区域。(c（c）)Bcl-X公司L（左）在InsP的C端结合三R.GST–Bcl-XL（左）未能下拉带有V5标签的1–600 type 1 InsP三R片段在COS-7细胞中表达（顶面板）。1–600 InsP的表达三R通过使用V5特异性抗体的细胞裂解物的western blot进行验证（第3道）。大鼠1型InsP三R缺乏前600个残基（Δ1–600 InsP三R） 在COS-7细胞中的表达与内源性InsP一起被成功下调三R-1（中间面板）。GST–Bcl-X公司L（左）有效结合1型InsP的C末端2512–2750个残基三R（底部面板）。所描绘的所有蛋白质斑点都是三个独立实验的代表。
图2
图2
Bcl-X的影响L（左）在InsP上三R单通道活动。(一)从Sf9细胞中分离的核制剂，其内源性仅表达1型InsP三R.贴片吸管接近孤立的细胞核，其上方可见完整的细胞；比例尺，15μM。(b条)InsP公司三R通道活动。典型InsP三R饱和（10μM）或低（10 nM）InsP条件下的单通道电流记录三; 在没有或存在重组Bcl-X的情况下L（左）（rBcl-X）L（左）; 1μM）；或使用10 nM InsP三瞬时转染Bcl-X的细胞内L（左）.rBcl-X未诱发通道活动L（左）（1μM）单独使用。移液管[Ca2+]为1μM，最适合通道活性；箭头表示零电流水平。(c（c）)Bcl-X的影响总结L（左）在InsP上三R通道活动。在含有10 nM InsP的移液管中三，开放概率(P（P）o（o）)从0.022±0.001增加(n个=2）至0.61±0.09(n个=10），添加1μM rBcl-XL（左）(n个=中使用的补丁数P（P）o（o）确定）。类似地，当Bcl-XL（左）过度表达，P（P）o（o）增加到0.42±0.05(n个= 11). Bcl-X公司L（左）还增加了激活通道的数量(N个A类). 在10 nM InsP中三,N个A类从0.10±0.07增加(n个=20）在控制条件下至1.00±0.16(n个=54）和1.18±0.17(n个=61）存在重组或表达的Bcl-XL（左）分别是。产品所示的总ER离子通量N个A类P（P）o（o）Bcl-X增加L（左）（注意对数刻度）。星号表示P（P）<0.001，未配对t吨-测试。His-和Flag-taged rBcl-XL（左）使用不同纯化方案产生的，同样有效，而His-tagged NCS-1不与InsP相互作用三R（参考文献32），单独或与10 nM InsP组合均无影响三（未显示数据）。(d日)InsP的依赖性三[Ca上的R通道活性2+]在通道的细胞质表面。[Ca的影响2+]我在P（P）o（o）,N个A类和N个A类P（P）o（o）在10μM InsP存在下三（黑色倒三角形），10 nM InsP三（绿色圆圈），10 nM InsP三+1μM rBcl-XL（左）（蓝色钻石）和10 nM InsP三+Bcl-X公司L（左）表达式（红色方块）。
图3
图3
tBid和Bax拮抗Bcl-X的作用L（左）在InsP上三R通道活动。(一)tBid和Bax抑制Bcl-X的结合L（左）至InsP三R.COS-7细胞裂解物与GST–Bcl-X孵育L（左）在没有或存在重组tBid（2–200 nM；上面板）或重组Bax（200 nM，下面板）的情况下，以及结合的InsP三用3型抗体检测到R。两个实验均使用重组神经元钙传感器-1（NCS-1）控制总蛋白浓度。数据是三个独立实验的代表。(b条)tBid和Bax抑制Bcl-X的电生理效应L（左）典型的电流迹线显示了在10 nM InsP存在下100 nM重组tBid或Bax的影响三从瞬时转染Bcl-X的细胞中分离出的细胞核L（左）.移液管[Ca2+]为1μM。(c（c）)增加100 nM tBid或Bax减少P（P）o（o）0.28±0.06(n个=5）至0.07±0.03(n个=3）和0.09±0.05(n个=3）。同样，N个A类从0.74±0.14减少(n个=38）至0.26±0.10(n个=33）在有tBid的情况下，达到0.09±0.05(n个=33）在Bax存在的情况下。产品N个A类P（P）o（o）也减少了。星号表示P（P）<0.001，未配对t吨-测试。
图4
图4
Bcl-X的相互作用L（左）使用InsP三R对Bcl-X至关重要L（左）对ER Ca的影响2+调控和抑制细胞凋亡。(一)空向量pIRES2-DsRed2或pBcl-XL（左）-IRES2-DsRed2在DT40-WT和DT40-InsP中稳定表达三R-KO细胞。1型和3型InsP的表达水平三R、 Bcl-X公司L（左）western blot检测OxPhos复合物IV（COXIV；亚单位1）。线粒体复合物IV蛋白在Bcl-X中的表达没有改变L（左）-表达克隆。描述的斑点是三个独立实验的代表。(b条)Bcl-X的影响L（左）钙的表达2+ER含量（Ca2+急诊室). 描述细胞质[Ca变化的典型记录2+]（[钙2+]我)在DT40-WT和DT40-InsP中应用1μM thapsigargin（TG）三稳定转染Bcl-X的R-KO细胞L（左）或仅矢量。钙2+急诊室通过[Ca的单细胞成像间接估计2+]我thapsigargin对ER-Ca急性抑制的反应2+吸收。每条记录道代表图像区域内至少六个细胞的平均值±标准偏差。条形图总结了thapsigargin的作用；数据表示多个试验中至少30个细胞的平均值±标准偏差。星号表示P（P）<0.05，方差分析。静息平均值[Ca2+]我范围为80至100 nM，四个细胞系的重复克隆之间没有显著差异（数据未显示）。(c（c）)[加利福尼亚州2+]我5μg ml的瞬态响应−1稳定转染Bcl-X的DT40-WT细胞中的抗BCR抗体（抗IgM）L（左）或仅矢量。汇总数据代表了多项试验中至少30个细胞的峰值振幅（平均值±s.e.m）。(d日)用20μg ml处理后的细胞活力−1DT40-WT（固体符号）和DT40-InsP的抗BCR抗体（抗IgM）（时间0）三稳定表达Bcl-X的R-KO（开放符号）细胞L（左）（红色）或单独矢量（与中相同的克隆b条). 使用独立克隆获得了类似的结果（参见补充信息，图S3）。
图5
图5
Bcl-XL（左）–InsP公司三R相互作用调节[Ca2+]我信号和线粒体NADH水平。(一)自发[Ca2+]我三个代表性DT40-WT细胞中的振荡，稳定地单独表达载体（左）或Bcl-XL（左）（中间）和DT40-InsP三表达Bcl-X的R-KO细胞L（左）（右）。(b条)仅矢量和Bcl-X之间振荡细胞的频率和数量差异（平均值±s.e.m.）L（左）-表达细胞。(c（c）)DT40-WT和DT40-InsP的NAD（P）H荧光测量三表达Bcl-X的R-KO细胞L（左）或载体，响应5μg ml−1抗BCR抗体（抗IgM）和FCCP（2μM）。四个独立实验的平均（±s.e.m.）静息NAD（P）H荧光和NAD（P）H荧光在抗IgM刺激下的变化绘制于d日.星号表示P（P）<0.001，方差分析。使用独立克隆获得了类似的结果（参见补充信息，图S4）。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Wei MC等。促凋亡BAX和BAK：线粒体功能障碍和死亡的必要途径。科学。2001;292:727–730.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. 范德海登MG，汤普森CB。Bcl-2蛋白：细胞凋亡或线粒体稳态的调节器？自然细胞生物学。1999;1:E209–E216。-公共医学
    1. Krajewski S等人。研究Bcl-2癌蛋白在核膜、内质网和线粒体外膜中的亚细胞分布。1993年癌症研究；53:4701–4714.-公共医学
    1. Distelhorst CW，海岸GC。Bcl-2和钙：表面下的争议。致癌物。2004年；23:2875–2880.-公共医学
    1. Jurgensmeier JM等。Bax直接诱导分离线粒体释放细胞色素c。Proc。美国国家科学院。科学。美国1998年；95:4997–5002.-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型