A severe acute respiratory syndrome-associated coronavirus-specific protein enhances virulence of an attenuated murine coronavirus

doi:10.1128/JVI.79.17.11335-11342.2005

.2005年9月；79(17):11335-42.

doi:10.1128/JVI.79.17.11335-11342.2005。

一种严重急性呼吸综合征相关冠状病毒特异性蛋白增强减毒鼠冠状病毒的毒力

勒西亚·佩韦¹, 周海霞, Jason Netland公司, 钱德拉·坦古杜, 海蒂·奥利瓦雷斯, 雷氏, 德怀特看, 托马斯·加拉格尔, 斯坦利·帕尔曼

附属公司

PMID： 16103185
预防性维修识别码：项目经理1193615
内政部： 10.1128/JVI.79.17.11335-11342.2005

一种严重急性呼吸综合征相关冠状病毒特异性蛋白增强减毒鼠冠状病毒的毒力

勒西亚·佩韦等。 J维罗尔. 2005年9月.

.2005年9月；79(17):11335-42.

doi:10.1128/JVI.79.17.11335-11342.2005。

作者

勒西亚·佩韦¹, 周海霞, 杰森·奈特兰, 钱德拉·坦古杜, 海蒂·奥利瓦雷斯, 雷氏, 德怀特看, 托马斯·加拉格尔, 斯坦利·帕尔曼

附属

¹爱荷华大学儿科系，美国爱荷华市2042医学实验室，邮编：52242。

PMID： 16103185
预防性维修识别码： 193615英镑
内政部： 10.1128/JVI.79.17.11335-11342.2005

摘要

大多数可感染严重急性呼吸综合征相关冠状病毒（SARS-CoV）的动物物种不会再发生临床疾病，阻碍了发病机制的研究。为了开发研究SARS-CoV的替代系统，我们将单个SARS-CoV-基因（开放阅读框[ORFs]）引入减毒鼠冠状病毒基因组。一种蛋白质，SARS-CoV ORF6的产物，将亚致死性感染转化为均匀致死性脑炎，并增强了病毒在组织培养细胞中的生长，表明SARS-CoV蛋白质在异源冠状病毒感染的情况下发挥作用。此外，这些结果表明，减毒鼠冠状病毒缺乏SARS-CoV中的毒力基因。重组鼠冠状病毒会导致一种可重复且特征良好的临床疾病，对实验室人员几乎没有风险，并且应该有助于阐明严重急性呼吸系统综合征冠状病毒非结构蛋白在病毒复制和发病机制中的作用。

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数字

**图1。**
rJ2.2感染细胞中SARS-CoV非结构ORF的表达。（A） SARS-CoV基因组，含ORF和结构蛋白（灰色）。（B）如材料方法所述，通过靶向重组（如rJ2.2.6所示）将SARS-CoV非结构蛋白引入rJ2.2。作为对照，在rJ.2.2.6中的残基27处引入了终止密码子^特朗克和rJ2.2.6^击倒对手引发剂蛋氨酸也在rJ2.2.6中发生突变^击倒对手每个构建体都是带有流感病毒HA表位标记的C末端。（C） ORF3a、-6和-7b的产物用抗HA抗体进行Western blot分析。车道：1，rJ2.2；2，rJ2.2.6；3，rJ2.2.3a；4，rJ2.2.3b；5，rJ2.2.7a；6，rJ2.2.7b；第7章第J2.2.8条。（D）所有插入的蛋白都用抗HA抗体通过IFA检测。显示了ORF3b、-7a和-8的产物。请注意，蛋白质3b定位于细胞核。感染rJ2.2（WT）的细胞未检测到染色。

**图2。**
感染rJ2.2.6和rJ2.2.7小鼠的死亡率、发病率和病毒滴度^特朗克，或rJ2.2.6^击倒对手小鼠感染了rJ2.2（三角形）、rJ2.2.6（开放圆）或rJ2.2.5^特朗克或rJ2.2.6^击倒对手并监测死亡率（A）、临床疾病（B）和体重减轻（C）。6 rJ2.2-、38 rJ2.2.6-30 rJ2.2.6组^特朗克-或rJ2.2.6^击倒对手-在这些研究中使用了受感染的小鼠。（D）还测定了CNS病毒滴度。为此，共使用了212只小鼠。与感染rJ2.2.6的小鼠相比，rJ2.2.6-感染小鼠的CNS中检测到病毒滴度显著增加^trunc+KO（第1.5天，*P（P）*=0.38；第3天，*P（P）*= 0.23; 第6天，*P（P）*< 0.01; 第7天，*P（P）*= 0.056; 第9天，*P（P）*< 0.001). 与感染rJ2.2的小鼠相比，在感染rJ2.2.6的小鼠的CNS中检测到病毒滴度的显著增加（第7天，*P（P）*< 0.05; 第9天，*P（P）*< 0.005). 面板B、C和D显示了感染rJ2.2.6的小鼠第0天到第9天的数据，因为在此之前只有23%的小鼠存活。rJ2.2.6的数据^特朗克-和rJ2.2.6^击倒对手-受感染的小鼠合并在一起，因为感染了这些病毒的小鼠会产生相同的临床疾病。（E）从感染rJ2.2.6的小鼠大脑中提取RNA（开放条；n个=3）或rJ2.2.6^击倒对手（封闭钢筋；n个=3）在每个时间点。如材料和方法中所述，通过实时RT-PCR定量N基因特异性RNA的数量。

**图3。**
rJ2.2.6-和rJ2.2.6中的病毒滴度和干扰素反应^击倒对手-感染L929细胞。（A） L929细胞感染rJ2.2.6或rJ2.2.7^击倒对手MOI为1。在指定的时间收获三份细胞，并在HeLa-MHVR细胞上测量病毒滴度。开放圆，rJ2.2.6；正方形，rJ2.2.6^击倒对手图中显示了滴定和SEM。（B）感染rJ2.2.6（通道2、4和6）或rJ2.2.7的L929细胞^击倒对手（通道3、5和7）用Tran脉冲标记³⁵在17小时（泳道2和3）、22小时（泳道4和5）和29小时（泳道6和7）进行30分钟的S标记，并按照材料和方法中所述进行处理。第一道显示了模拟感染细胞。显示了N和S蛋白。每条车道装载50微克蛋白质。（C）感染rJ2.2.6的L929细胞（1道和2道；两个分离株）于16h p.i.时获得RNA，rJ2.2.7^击倒对手（第3和第4道；两个分离株）或rJ2.2（第5道）或模拟感染细胞（第6道），并按照材料和方法进行分析。每条泳道装载10微克RNA。病毒RNA 1（基因组）和2至7（亚基因组）如右图所示。（D）感染rJ2.2（虚线）、rJ2.2.6（开放圆）或rJ2.2.7前24小时^击倒对手（平方），用指示浓度的干扰素-β处理一式三份细胞。感染后（MOI=0.1），在相同浓度的干扰素存在下培养细胞20小时。然后采集样本，并在HeLa-MHVR细胞上测定病毒滴度。

**图4。**
S和ORF6-HA蛋白在感染细胞培养物中的分布。感染rJ2.2.6（MOI=0.05）的17Cl-1细胞在24小时后被洗涤剂溶解。（A）使用MAb 10G（由F.Taguchi，National Institute of Neuroscience，Tokyo，Japan善意提供）和抗HA MAb HA.11（Covance，Inc.）进行电泳和免疫印迹，以检测S和ORF6-HA，分别是。（B）按照材料和方法中的描述，通过蔗糖垫造粒，从澄清的培养基中浓缩病毒，并对蛋白质进行类似的处理以揭示蛋白质。S蛋白以～40:1的细胞/病毒比率分布，而ORF6-HA蛋白以>300:1的电池/病毒比率分配。

**图5：。**
ORF6-HA与MHV结构蛋白和BiP的定位。用rJ2.2.6感染L929细胞12～16h。固定后，对细胞进行HA和MHV M、N、S蛋白或内质网（ER）蛋白BiP染色。还显示了用表达ORF6-HA的逆转录病毒转导的L929细胞。最后四个面板合并显示ORF6-HA与所示蛋白质的共定位。

**图6。**
MHV N、M和ORF6-HA蛋白在疏水和亲水环境中的分配。在16h p.i.收集感染rJ.2.2.6的17Cl-1细胞，并使用M-PER试剂（伊利诺伊州罗克福德皮尔斯公司）将蛋白质分为疏水（Triton X-114洗涤剂）和亲水（水）相。然后对来自所示细胞等效物的蛋白质进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳，转移到聚偏二氟乙烯膜上，并同时用抗-N MAb 5A5.2和Covance抗-HA MAb 1.1进行探测（顶面板）。然后剥离印迹，并用抗-M MAb 4B6.2（底部面板）重新涂覆。

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1. C.C.Bergmann、Q.Yao、M.Lin和S.A.Stohlman。1996年，小鼠肝炎病毒JHM株诱导一种特异性Db-限制性CTL反应。《病毒遗传学杂志》。77:315-325.-公共医学
1. 卡斯特罗、R.F.和S.帕尔曼。嗜神经性冠状病毒表面糖蛋白中的CD8+T细胞表位及其与致病性的关系。J.维罗尔。69:8127-8131.-项目管理咨询公司-公共医学
1. 中国SARS分子流行病学联合会。2004年。中国SARS流行过程中SARS冠状病毒的分子进化。科学303:1666-1669。-公共医学
1. Cinatl，J.、B.Morgenstern、G.Bauer、P.Chandra、H.Rabenau和H.W.Doerr。2003年，用人类干扰素治疗SARS。柳叶刀362:293-294。-项目管理咨询公司-公共医学
1. Dandekar，A.A.和S.Perlman。2002.病毒诱导的裸鼠脱髓鞘由γ-δT细胞介导。美国病理学杂志。161:1255-1263.-项目管理咨询公司-公共医学

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[2] C.C.Bergmann、Q.Yao、M.Lin和S.A.Stohlman。1996年，小鼠肝炎病毒JHM株诱导一种特异性Db-限制性CTL反应。《病毒遗传学杂志》。77:315-325.-公共医学

[3] 卡斯特罗、R.F.和S.帕尔曼。嗜神经性冠状病毒表面糖蛋白中的CD8+T细胞表位及其与致病性的关系。J.维罗尔。69:8127-8131.-项目管理咨询公司-公共医学

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[5] 中国SARS分子流行病学联合会。2004年。中国SARS流行过程中SARS冠状病毒的分子进化。科学303:1666-1669。-公共医学

[6] 中国SARS分子流行病学联合会。2004年。中国SARS流行过程中SARS冠状病毒的分子进化。科学303:1666-1669。-公共医学

[7] Cinatl，J.、B.Morgenstern、G.Bauer、P.Chandra、H.Rabenau和H.W.Doerr。2003年，用人类干扰素治疗SARS。柳叶刀362:293-294。-项目管理咨询公司-公共医学

[8] Cinatl，J.、B.Morgenstern、G.Bauer、P.Chandra、H.Rabenau和H.W.Doerr。2003年，用人类干扰素治疗SARS。柳叶刀362:293-294。-项目管理咨询公司-公共医学

[9] Dandekar，A.A.和S.Perlman。2002.病毒诱导的裸鼠脱髓鞘由γ-δT细胞介导。美国病理学杂志。161:1255-1263.-项目管理咨询公司-公共医学

[10] Dandekar，A.A.和S.Perlman。2002.病毒诱导的裸鼠脱髓鞘由γ-δT细胞介导。美国病理学杂志。161:1255-1263.-项目管理咨询公司-公共医学

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